大肠癌临床肿瘤病理学特征及其与PCNA、Fas表达之间的关系

　　业已证实，肿瘤的生长除了瘤细胞的无限增殖外，还与肿瘤细胞的一种特殊的死亡方式-凋亡有关 ［1，2］  。本研究从细胞增殖和凋亡两个侧面入手，采用免疫组化技术，研究PCNA、Fas基因在大肠癌组织中的表达和大肠癌临床病理学特征，以了解大肠癌临床肿瘤病理学特征及其与细胞增殖、凋亡的关系。

　　1 材料与方法

    1.1 一般资料 收集我院近五年手术大肠癌标本76例，年龄22～76岁，平均51.2岁。癌组织病理学分期按Dukes方法。A期8例，B期21例，C期47例，无D期病例。

    1.2 材料 所有标本10%福尔马林固定、石蜡包埋，3μm厚连续切片，分别进行HE、PCNA和Fas染色。PCNA、Fas染色采用过氧化酶标记的链霉卵白素染色（S-P法），用PBS代替一抗做阴性对照，免抗人PCNA及Fas单抗为美国ZYMED公司试剂，均购自北京中山生物技术有限公司。PCNA工作浓度1:100，Fas为1:200。

    1.3 结果判断 免疫组化结果判定参照Shimizu等判定标准 ［3］  :光镜下观PCNA阳性者细胞核着色，Fas阳性者细胞膜和（或）细胞浆着色，被染成棕黄色者为阳性细胞。

　　1.4 统计学方法 用χ 2  检验。

　　2 结果
     
　　PCNA阳性细胞胞核染成棕黄色。大肠癌组织主要为强阳性表达，正常粘膜组织低表达。而肿瘤组织Fas表达水平低下，切缘组织Fas呈高表达。

    在大肠癌原发灶中，高分化、中分化及低分组织中PCˉNA、Fas表达差异无显著性（χ 2  =0.357，P>0.05），而粘液腺癌较其他腺癌PCNA表达显著升高。统计学分析显示Fas与PCNA二者之间的表达互不影响（r=0.89，P>0.05）。见表1。

　　表1 大肠癌组织分化程度与PCNA和Fas表达 略

　　余均差异无显著性本组Dukes A期8例，B期21例，C期47例。DukesA期与C期之间PCNA、Fas表达差异均存在显著性（P<0.05），可见Dukes分期与PCNA、Fas表达之间存在明确的一致性。见表2。

　　表2 Dukes分期与PCNA和Fas表达 略

    47例患者得到完整随访，术后随访5个月～4年（中位随诊时间26.3个月），癌复发16例，转移20例，均经病理或CT证实。局部复发或未复发的肿瘤之间PCNA、Fas表达差异均存在显著性（P<0.05）。肝转移的肿瘤与未转移的肿瘤之间PCNA、Fas表达差异均存在显著性（P<0.05）（见表3）。

　　表3 肿瘤复发转移与PCNA和Fas表达 略

    3 讨论

　　传统上，细胞增殖被看作是肿瘤生长的决定因素及影响患者预后的重要因素，而对于细胞死亡的作用则相对较少。目前，人们认识到肿瘤的生长与发展不仅取决于细胞的增殖率，也决定于细胞的死亡率 ［1，2］  。肿瘤的发病是细胞凋亡及增殖失衡的结果。

    增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，是DNA复制的必需物质，其含量与细胞增殖状况密切相关，它在一定程度上反映了细胞代谢和DNA、RNA合成状态，是检测肿瘤细胞增殖动力学的可靠指标。研究显示，其增殖活性与肿瘤细胞浸润、转移、复发、预后有关 ［4］  。Fas（CD95，Apo-1）是一种促进细胞凋亡的跨膜蛋白，它是存在于大多数细胞的膜表面受体分子。当Fas与其配体结合以后，可通过信号转导和阻断生长因子受体的作用，导致细胞迅速凋亡。Fas是直接影响细胞凋亡的重要基因。Fas表达与结肠癌预后有关 ［5，6］  。

    本研究同时研究了肿瘤组织的增殖和凋亡，发现:大肠 癌组织PCNA阳性率为84.2%，远远超过正常组织（34.1%）。而大肠癌组织Fas表达阳性率为34.2%，远远低于正常组织（83.4%）。上述结果说明癌组织增殖率显著升高而凋亡率显著下降。较未复发者而言，局部复发者PCNA表达显著增强而Fas表达下降;同样已转移者PCNA表达也有类似发现。

    肿瘤的生长侵袭和细胞增殖与凋亡间的平衡有关 ［7］  。细胞之间增殖和凋亡之间相互制约、互相消长，成为矛盾双方。从理论上讲，细胞丢失得多则肿瘤应生长缓慢且患者复发及转移的晚，反之亦然。从上述研究结果，我们看到:一方面，由于大肠癌细胞PCNA高表达，显示出高度的增殖活性;另一方面，大肠癌细胞Fas表达水平低下，反映出凋亡的减弱。增殖、凋亡双方合力的作用，使大肠癌得以发生，并不断向周围浸润，引起局部复发或转移。从肿瘤组织发生学看，快速的增殖和较少的凋亡是肿瘤形成的重要基础;从肿瘤发展学看，快
速的增殖和较少的凋亡是肿瘤得以不断生长、浸润、转移的前提。

    Dukes分期是临床常见的肿瘤分期方法，经过不断的修正，目前Dukes分期逐渐趋于完善。本研究发现:Dukes分期越高，肿瘤组织PCNA表达越多而Fas表达越少，反之亦然。同时，我们发现，局部复发或肝转移者PCNA表达升高、Fas下降，与未复发或无转移者间差异存在显著性。进一步显示了增殖、凋亡与肿瘤浸润之间的密切联系。粘液腺癌较非粘液腺癌PCNA、Fas表达也存在显著差异下降，这可能是粘液腺癌更易转移和复发的原因。

    随访显示，癌组织PCNA高表达同时伴Fas阴性者，平均生存期显著缩短。Dukes C期及粘液腺患者平均生存期缩短。可见，结合病理形态学观察，按照Dukes分期标准，同时检测PCNA、Fas的表达，能更客观更准确地判断大肠癌的恶性程度和生物学特性，评估大肠癌患者的预后。

　　参考文献

    1 Thompsin CB.Apoptosis in pathogenesis and treatment of disease.Sciˉence，1995，267:1456-1762.

    2 Valentini AM，CarusoML，Armentano R，et al.Programmed cell death in colorectal carcinogenesis.Anticancer Res，1999，19:3019-3024.

    3 Shimizu M，Sation Y，Itoh H，et al.Immunohistochemical staining of Ha-ras oncogene product in normak，benign，and malignant human panˉcreatictissues.Human Pathology，1990，21:607-809.

    4 Choi HJ，Jung IK，Kim SS，et al.Proliferating cell nuclear antigen exˉpression and its relationship to malignancy potential in invasive colorecˉtal carcinoma.Dis Colon Rectum，1997，40（1）:51.

    5 Rubio CA，Jacobsson B.The Fas-FasL system and colorectal tumours.J Clin Pathol，2000，55:559-560.

    6 Sheehan KM，O’Donovan DG，et al.Prognostic relevance of Fas（APO-1/CD95）ligand in human colorectal cancer.Eur J Gastroenterol Hepaˉtol，2003，15:375-380.

    7 Evertsson S，Bartik Z，Zhang H，Jansson A，Sun XF.Apoptosis in relaˉtion to proliferating cell nuclear antigen and Dukes’s stage in colorectal adenocarcinoma.Int J Oncol，1999，15:53-58.    
　　作者单位:100101北京解放军第306医院普通外科（ ˇ 病理科） 
    
　　（收稿日期:2004-04-17） （编辑李 阳）