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Hou Wangping，Xia Rui，Yang Guang
Department of Anesthesiology，the People’s Hospital， Jiangmen，Guangdong529020.
【Abstract】 Objective Study the effect of the intestinal ischemia reperfusion injury on the liver and another organ using SMAO model.To observe the protective effect of aprotinin on PLA 2 during the intestinal ischemia reperfuˉsion injury.Methods 24rabbits were randomly divided into three groups（n=8）:Control group（A），SMA was not obstructed，ischemia/reperfusion group（B）and aprotinin group（C）.SMAO model was prepared and obstructed time was45min，and reperfusion for2h.In the group C，aprotinin was injected into vein5min before clamping at30000kIU/kg，and was kept on at10000kIU/kg -1 ·h -1 ，malondialdehyde（MDA），phospholipaseA2（PLA 2 ）of serum were meaˉsured before obstruction（I 0 ），at claming for45min（I 1 ）and1h（R 1 ），2h（R 2 ）after reperfusion respectively.The liver was examined for morphological changes.Results PLA 2 of serum at R 2 in the group C were32.6±3.075U，were sigˉnificantly lower than those of group A（P
<0.05）.But the level of group B were markly higher than those of group A（P<0.05）.Conclusion Aprotinin have protective effects on the intestinal ischemia-reperfusion，can inhibt the level of lipid peroxidation，decline the level of PLA 2 in the serum and reduce the damage on another organ in the inˉtestinal ischemia-reperfusion.
Key words aprotinin ischemia/reperfusion of intestinal phospholipase A 2
抑肽酶（Aprotinin）是从牛肺、胰腺组织中提取的一种蛋白酶抑制剂，可以抑制胰蛋白和糜蛋白酶的活性，临床上首先用于急性胰腺炎的治疗。近来发现它可以减少氧自由基（OFR）的释放，保护血小板 ［1］ ，降低术中及术后出血，减轻心肌和脊髓缺血再灌注损伤 ［2］ 。实验证明，它对肠缺血再灌注损伤的一定的保护作用，抑肽酶是否可以降低PLA 2 的血清水平，我们作如下探讨。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 健康日本大耳白兔24只，体重2.0～2.5kg，雌雄不拘，随机分为3组（每组8只）:A组为假手术组，只分离肠系膜上动脉（SMA），不作阻断。B组为缺血/再灌注组，SMA阻断45min，再灌注2h。C组为抑肽酶治疗组，阻断及灌注时间同B组，阻断前5min一次静注抑肽酶（30000kIU/kg），继以10000kIU·kg -1 ·h -1 速度持续输注直至实验结束。
1.2 实验方法与步骤 术前动物禁食12h，自由饮水，2%戊巴比妥钠（30mg/kg）经耳缘静脉缓慢推注麻醉动物，用DH -1 408型动物呼吸机行机械呼吸，调节呼吸参数维持PETCO 2 在4.67～6.0kPa范围。经股动脉插管。多道生理仪（Life Scope9NIHON KOHDEN日本）监测MAP、CVP、HR、ECG和体温。腹正中切口开腹，由肠系膜静脉置管达门静脉处以备采血和血气分析。三组动物从肠系膜根部分离肠系膜上动脉（SMA），随机将实验动物分为3组，A组不作SMA阻断，B、C两组均于肠系膜根部阻断SMA45min，再灌注2h，肠系膜上动脉阻断（SMAO）模型完成后暂时关闭腹腔。C组抑肽酶用法见前。三组动物在观察期间静注LR（20ml·kg -1 ·h -1 ）。实验结束前静注戊巴比妥钠100mg处死动物，迅速取肝脏组织，以备形态学观察。
1.3 观测指标 血清磷脂酶A 2 （PLA 2 ）用底物酶促反应法 ［3］ 测定血清PLA 2 水平。C组及B组均在阻断前（I 0 ）、阻断45min（I 1 ）、再灌注1h（R 1 ）和再灌注2h（R 2 ）各时点采血检测上述指标，A组按相应时点采样和检测。
1.4 统计学处理 各组数据以均数±标准差（ˉx±s）表示， 组间比较用方差分析，组内两两比较用q检验，以P<0.05表示差异有显著性，等级资料用秩和检验。
2 结果
2.1 血清PLA 2 （U）的变化 C组PLA 2 含量在I 1 时高于A组（P<0.05，表1），其余3个时点虽略高于A组，但与A组比差异无显著性（P>0.05，表1）。C组PLA 2 含量在R 1 、R 2 时明显低于B组（P<0.05，表1），B组I 1 、R 2 时值明显高于A组（P<0.05，表1）。
表1 三组动物血清PLA 2 （U）变化 （ˉx±s）（略）
注:与A组相比， ☆ P<0.05， ˇ P<0.01;与同组I 0 比， △ P<0.05;与B组相比， ▲ P<0.05， ▲▲ P<0.01
3 讨论
3.1 肠I/R可引起肝脏的再灌注损伤 肠道在MOF发病机制中占有重要地位，特别是肠缺血-再灌注损伤 ［4］ 。而当肠粘膜屏障受损后，肠道内的细菌或内毒素可经过淋巴或门脉途径侵入体循环或其它器官，引起全身感染和远隔离器官的损害。肠I/R损伤后肠粘膜屏障破坏导致肠道内细菌和内毒素易位，以及激活并释放的一些炎症介质，从而引发炎症的连锁反应，使得TNFα的表达增强，促进TNFα的产生和释放。而TNFα亦可激活PMN的产生和释放，IL-6、IL-8等产生增加 ［5］ 。而细胞因子在缺血时主要分布在各组织器官内，其在组织器官损害中具有重要的病理意义。
3.2 抑制PLA 2 产生和释放 TNFα能诱导PMN在组织聚集、粘附、释放IL-6和IL-8等炎症介质 ［7］ 。细胞因子在缺血时主要分布在各器官组织内，在器官功能损害中具有重要的病理意义 ［5］ 。TNFα等细胞因子的表达是受PLA 2 调节的，PLA 2 在肠I/R时被激活，使TNFα等细胞因子表达增强 ［8］ 。肠粘膜中含有丰富PLA 2［9］ ，在肠I/R期间因氧自由基的形成和细胞因子作用下，PLA 2 能被迅速激活，同时产生大量炎症介质，包括血小板激活因子（PAF）和花生四烯酸（AA）。PAF不仅直接参与肠粘膜损伤，而且还可激活PMN，造成组织和肠粘膜的损伤 ［9］ 。在本实验中，C组血清PLA 2 在R 1 、R 2 时比B组明显降低（P<0.05，表1），而B组血清PLA 2 较A组明显升高（P<0.05，表1）。这一结果表明在肠I/R中B组已有大量的PLA 2 激活。PLA2 激活不仅使TNFα等细胞因子的表达增强，还通过缺血再灌注引起Ca 2+ 内流，直接或间接造成肝细胞结构和功能损害。郭淮莲等认为抑肽酶能通过抑制血小板胞浆游离［Ca 2+ ］i;阻断PLA 2 的激活，或通过抑制缓激肽（BK）的生成而抑制PLA 2 的产生 ［10、11］ 。从上述PLA 2 与TNFα的关系可知，抑制PLA 2 的激活可减少TNFα的产生。TNFα又是炎性反应的启动因子，减少TNFα的产生，能使IL-6，IL-8等细胞因子群合成、分泌减少。抑制TNFα产生和释放有利于减轻肠缺血再灌注期间局部或全身炎症反应。因此，降低PLA 2 活化和TNFα产生或许是抑肽酶减轻组织损害的又一重要机制。4 结论本实验研究表明:抑肽酶在肠I/R中的运用，不仅可抑制TNFα，而且还可减少PLA 2 的产生和释放，减轻炎症因子对组织的侵害，即达到保护肠粘膜的目的。
参考文献
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（收稿日期:2004-04-23）
作者单位:529020广东省江门市人民医院
湖北省荆沙市一医院
武汉大学医学院附属第一医院
（编辑守 中）