辅酶A口服剂对大鼠及家兔食饵性高脂血症的作用

    【摘要】 目的  观察经保护处理后的辅酶A口服制剂经口给药对大鼠及家兔食饵性高脂血症的作用。 方法  采用雄性SD大鼠及雄性新西兰白兔以高脂饮食制备高脂血症模型，高脂饮食同时每日经口给予高中低3个剂量的辅酶A口服剂，对照采用辅酶A前体药泛硫乙胺、辅酶A口服剂的保护剂、辅酶A原药经口给药，以及注射用辅酶A肌肉注射。给药前后取血测定血总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇水平。 结果  辅酶A口服剂可以减轻大鼠及家兔食饵性高脂血症，减轻高脂饮食诱发的总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇的升高程度，大剂量辅酶A尚可降低家兔甘油三酯水平，且降脂作用呈剂量依赖性。辅酶A原药未见明显的降脂作用。 结论  辅酶A经保护处理后的口服制剂可以减轻高脂饮食诱发的高脂血症。
     
      
　　Effects of an oral preparation of coenzyme A on food-induced hyperlipidemia in rats and rabbits
     
　　Dong Na，Pan Jingwei，Zhang Da，et al.
   
　　Department of Internal Medicine，Changhai Hospital，Second Military Medical University，Shanghai200433.
   
　　【Abstract】 Objective To evaluate the effects of an oral preparation of coenzyme A（CoA）hyperlipidemia in rats and rabbits fed on high-lipid food.Methods Normal rats and rabbits were fed high-lipid food and oral CoA was administered intragastrically for2weeks.Results Oral CoA reduced total cholesterol and low density lipoprotein cholesterol dose dependently in rats and rabbits.Large dose of CoA also reduced triglyceride in rabbits.Conclusion The oral preparation of CoA could ameliorate hyperlipidemia in rats and rabbits.
    
      
　　高脂血症是诱发冠状动脉粥样硬化性心脏病的独立危险因素，降血脂治疗可以显著减少冠心病患者心血管事件及死亡率。以他汀类为代表的3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A（3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A，HMG-CoA）还原酶抑制剂为最有效的降血脂治疗药物 ［1］ ，其他的降脂药包括烟酸类、胆固醇螯合剂等。但目前所使用的各种降血脂治疗药物多有肝脏损害等副作用，HMG-CoA抑制剂尚有少见但严重的横纹肌溶解作用，严重者可致死亡 ［2］ 。因此，寻找有效而不良反应小的降脂药物仍是目前降脂药研究的重要课题。辅酶A是广泛参与体内糖、脂肪及蛋白质代谢的重要生物活性物质，尤其是参与脂肪酸β-氧化，产生的乙酰辅酶A进入三羧酸循环为机体提供能量。Con-solo等报道高血脂患者静脉注射辅酶A可降低血甘油三酯水平 ［3］ 。但辅酶A口服易被破坏，其巯基在胃肠道中亦被氧化，并在消化道中降解脱磷而失去活性。目前仅有注射制剂，不利于高血脂患者长期的降脂治疗。因此对辅酶A制剂进行改造，加入一定的保护剂后制成口服剂，观察该口服制剂对高血脂的作用。

　　1 材料与方法
   
　　1.1 试验动物 雄性SD大鼠，体重180～220g。雄性新西兰白兔，体重1.6～2.2kg。试验动物由第二军医大学实验动物中心提供。
   
　　1.2 试验药物 辅酶A口服剂及口服辅酶A保护剂由上海本草生物医学工程研究所提供;辅酶A原料药为山东济南生化药厂生产;辅酶A前体药泛硫乙胺（潘特生，Pan-tethine）由黑龙江省豪康制药厂生产。
   
　　1.3 血脂测定 用OLYMPUS AU1000自动生化分析仪对血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）分别以胆固醇氧化酶法、甘油磷酸氧化酶法、酶法及选择遮蔽酶法测定。

　　1.4 高脂血症模型及药物给药方法及分组
   
　　1.4.1 试验一 健康成年雄性SD大鼠70只，观察10天后在乙醚麻醉下眼球后静脉丛采血测定血脂基础水平，然后分组，每组10只，开始喂高脂饲料（胆固醇1%，猪油5%，基础饲粒94%）并同时给予下列药物每日2次灌胃:阴性对照组喂辅酶A口服保护剂1100mg/kg/日;阳性对照组喂食泛硫乙胺2000mg/kg/日;辅酶A口服剂每日200U/kg、600U/kg及2000U/kg;正常动物对照组除喂食普通饲料外，每日以20ml/kg蒸馏水灌胃。口服药物溶于蒸馏水给药，容积同正常动物组。给药后第14天乙醚麻醉下眼球后静脉丛采血复查血脂。
   
　　1.4.2 实验二 健康雄性新西兰白兔56只，观察10天后耳静脉采血测定血脂基础水平，然后分组，每组8只，开始喂高脂饲料（胆固醇0.5%，猪油2.5%，基础饲料97%）并同时给与下列药物（药物拌入部分高脂饲料中喂给，待含药高脂饲料进食完后再补足高脂饲料）:阴性对照组喂辅酶A口服保护剂825mg/kg/日;阳性对照组喂食泛硫乙胺1200mg/kg/日;辅酶A口服剂每日100U/kg、400U/kg及1500U/kg;正常动物对照组除喂食普通饲料外，每日以20ml/kg蒸馏水灌胃。给药后第20天耳静脉采血复查血脂。
   
　　1.4.3 试验三 在确定了辅酶A口服剂的降脂作用后，进一步以该口服剂为对照观察其与不加保护剂的辅酶A原药口服对高血脂的作用进行比较:健康成年雄性SD大鼠60只，观察10天后在乙醚麻醉下眼球后静脉丛采血测定血脂基础水平，然后分组，每组10只，开始喂高脂饲料（胆固醇1%，猪油5%，基础饲料94%），并同时给与下列药物每日2次灌胃:阴性对照组喂辅酶A口服保护剂1100mg/kg/日;辅酶A口服剂每日800U/kg及2000U/kg;辅酶A原药每日800U/kg及2000U/kg;正常动物对照组除喂食普通饲料外，每日以20ml/kg蒸馏水灌胃。口服药物溶于蒸馏水给药，容积同正常动物组。给药后第14天乙醚麻醉下眼球后静脉丛采血复查血脂。
   
　　1.5 统计学方法 试验数据以均数±标准误（ˉx±s）表示，用方差分析进行统计分析，P<0.05判断为统计学差异有显著性。

　　2 结果
    
　　2.1 辅酶A口服剂对大鼠高脂血症的作用 试验前各组大鼠血脂无显著差异，见表1。高脂饮食同时给药结果表明大剂量辅酶A口服剂（2000U/kg）灌胃2周可以显著降低大鼠血清总胆固醇水平及低密度脂蛋白胆固醇水平，与阳性对照药泛硫乙胺相似，中剂量辅酶A口服粉剂（600U/kg）亦可显著降低大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇水平（图1）。辅酶A对高密度脂蛋白胆固醇未见明显影响。

　　表1 辅酶A口服剂治疗前各组大鼠血脂水平 （略）
    
　　注:上述各指标单位均为mmol/L
    
　　2.2 辅酶A口服剂对家兔高脂血症的作用 家兔实验前血脂水平见表2。口服大剂量辅酶A口服剂（1500U/kg）可以显著降低家兔血清总胆固醇水平及低密度脂蛋白胆固醇水平，与阳性对照药泛硫乙胺相似;辅酶A口服剂尚可显著降低血清甘油三酯水平。药物治疗后高密度脂蛋白胆固醇水平呈下降趋势，但辅酶A组下降比阳性对照组泛硫乙胺程度轻（表2，表3）。
    
　　表2 辅酶A口服剂治疗前家兔基础血脂水平 （略）

　　注:上述各指标单位均为mmol/L
    
　　表3 不同剂量辅酶A口服剂口服20天对高脂饮食家兔血脂的影响 （略）

　　注: * P<0.05， ** P<0.01versus正常对照;P<0.05，P<0.01versus高脂（保护剂）对照;P<0.05，P<0.01versus泛硫乙胺。上述各指标单位均为mmol/L

　　2.3 辅酶A口服剂与辅酶A原料药口服对大鼠高血脂作用的比较 辅酶A口服剂经口给药可以显著降低高脂饮食大鼠血清总胆固醇水平和低密度脂蛋白胆固醇水平;大剂量辅酶A口服剂尚可进一步降低甘油三酯水平;但辅酶A原料药口服对血脂无明显影响（图2～4）。
    
　　3 讨论
    
　　降血脂药物可以显著改善冠心病患者的心血管预后，目前常用的HMG-CoA还原酶抑制剂是有效的降血脂治疗药物 ［1，5］ ，但与其他许多降血脂药物相似，这类降脂药亦有肝脏损害甚至严重的致死性横纹肌溶解的不良反应作用，尤其是在疾疾治疗过程中与其他药物合用时 ［2］。因此，有效而不良反应小的降脂药物有利于患者长期用药及降少与其他药物合并用药时的不良反应。辅酶A是广泛参与体内糖、脂肪及蛋白质代谢的重要生物活性物质，尤其是参与脂肪酸β-氧化，产生的乙酰辅酶A进入三羧酸循环为机体提供能量。有报道高血脂患者静脉注射辅酶A可通过促进脂肪酸的氧化，促进甘油三酯分解代谢，从而降低血甘油三酯水平 ［3，4］ 。但辅酶A口服易被破坏，其巯基在胃肠道中亦被氧化，并在消化道中降解脱磷而失去活性，目前仅有注射制剂，不利于高血脂患者长期的降脂治疗。因此对辅酶A制剂进行改造，加入一定的保护剂后制成口服剂观察其降血脂疗效。研究表明，辅酶A口服剂可有效改善大鼠及家兔高脂饮食诱发的高脂血症，降低总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇，大剂量时还可降低甘油三酯水平。
   
　　本试验选用的阳性对照药泛硫乙胺为泛酸的衍生物，在体内易转化生成辅酶A，在日本1966年作为维生素类药物上市，后又开发为调脂药［6］ 。研究结果发现辅酶A口服剂的降低血胆固醇的疗效与泛硫乙胺相似，而且辅酶A还可以降低甘油三酯水平，泛硫乙胺则未见降低甘油三酯作用。泛硫乙胺降低胆固醇时伴有高密度脂蛋白胆固醇显著降低，而辅酶A对高密度脂蛋白胆固醇的影响较小（表3）。辅酶A原药未见显著降低血脂作用（图2～4）。辅酶A作为体内代谢的生物活性成分参与对血脂的调节，具有潜在的治疗意义。其口服剂降低血胆固醇及甘油三酯作用的其临床疗效及作用机制有待进一步研究。

　　（本文图片见附页1）（略）
     
　　参考文献
    
　　1 Best JD，Jenkins AJ.Novel agents for managing dyslipidaemia.Expert Opin Investing Drugs，2001，10:1901-1911.
   
　　2 Williams D，Feely J.Pharmacokinetic-pharmacodynamic drug interac-tions with HMG-CoA reductase inhibitors.Clin Pharmacokinet，2002，41:343-370.
   
　　3 Consolo F，Ditommass G，Arrgo F，Trifiro A.Rapid modification of the blood lipid and lipoprotein picture by Co A in human.Boll Soc Ital Biol Sper，1975，51:1920-1926.
   
　　4 Consolo F，Ditommass G，Arrgo F，et al.Effects of CoA on modification fo the lipemic picture subsequent to dietary lipid loading.Boll Soc Ital Biol Sper，1975，51:1931-1936.
   
　　5 Stein EA.Managing dyslipidemia in the high-risk patient.Am J Cari- ol，2002，89:50-57.
   
　　6 Gaddi A，Descovich GC，Noseda G，et al.Controlled evaluation of Pan-tethine，a natural hypolipidemic compound，in patients with different forms of hyperlipoproteinemia.Atherosclerosis，1984，50:73-83.
     

　　* 基金项目:本研究项目受上海本草生物医学工程研究所资助（项目SMMBI20010201）
   
　　作者单位:200433上海第二军医大学附属长海医院内科
   
　　　　　　　　　　第二军医大学药理学教研室
   
　　　　　　　　　　上海第二医科大学基础部药理学教研室