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沙眼衣原体（CT）是性传播疾病的主要病原体之一，CT导致的盆腔炎性疾病和性传播疾病呈逐年上升的趋势，CT感染可造成流产、不孕、围产期感染和胎儿宫内感染等。继1907年，捷克学者Halberstaeder和Prowazek发现沙眼包涵体，1956年我国学者汤飞凡等分离沙眼衣原体成功之后，引起了全世界对其进行广泛深入的研究［1］。
目前实验室诊断方法基本上可分为细胞生物学检测方法、分子生物学检测方法和免疫学检测方法。
1 细胞生物学检测方法
1.1 涂片镜检法 CT寄生于柱状上皮细胞内形成包涵体，取宫颈或尿道标本涂片后，通过碘染色或姬姆萨染色等可见细胞内包涵体。但由于泌尿生殖道中完整细胞较少，以及细胞内包涵体脆性较大，从而造成敏感性过低，不推荐用于临床标本的检查。
1.2 细胞分离培养法 是目前诊断CT感染最可靠的方法。自20世纪70年代应用以来，一直作为评价其他非培养法的“金标准”。但由于CT的专性细胞寄生性，一般培养法不能使其生长，只有在活的细胞内才能增殖、复制。组织细胞培养法分离CT多采用McCoy细胞或 Hela-229细胞（国内也有报道采用Hep-2细胞），染色后在显微镜下观察细胞内有无包涵体。CT培养法的敏感性为80.0%～90.0%，特异性为100.0%。细胞培养法虽然特异性好，可靠性强，但是由于分离培养操作复杂，技术及设备要求高，所需时间长，且敏感性受标本采集、运送、保存等的影响较大［2］，加上国内很多医院不具备细胞培养条件，因而不适于临床应用，多用于科研和疑难病例的终鉴定。目前通常仅作为其他实验室方法可靠度的参照标准。但是DNA扩增法的出现，使得这一观点已有所改变。
2 免疫学检测方法
2.1 血清抗体检测 尽管沙眼衣原体感染时血清和泌尿生殖道分泌液中会出现抗体，但血清学试验对于诊断无并发症的泌尿生殖道感染价值不大。免疫反应为期短暂，且再感染常有发生。血清抗体在性病高危人群中有较高的本底检出率。不过，在性病性淋巴肉芽肿（LGV）和沙眼衣原体性附睾炎、输卵管炎时血清抗体水平明显升高，检测血清抗体水平有助于诊断。新生儿衣原体肺炎也可用血清学方法测定抗衣原体IgM抗体，具有诊断价值。方法有酶联免疫吸附试验和微量免疫荧光法。当抗体滴度达一定水平时，提示有并发症（附睾炎或输卵管炎），或为LGV。由于沙眼衣原体感染后血清阳转需2～3周时间，因此抗沙眼衣原体IgG检测阴性不能完全排除感染。而病人即便经治疗后，IgG升高仍能持续较长时间，故阳性结果也不一定证明有感染存在。
2.2 酶免疫测定（EIA） 用酶标记的单克隆或多克隆抗体检测CT的LPS或MOMP，酶反应生成有色产物用酶标仪进行测定。目前有Chlamydiazyme、ID-EIA、Pharmacia Chlamydia EIA等多种市售诊断试剂盒可供使用。其敏感性从64%到98%，特异性从93%到98%［3］。通常认为，其敏感性在高危人群中可得到满意结果，而在新近感染及治疗监测中敏感性明显降低。EIA的优点在于方法简便、操作自动化，适于短时内大批量标本的检测。但其最大缺点在于，与其他常见微生物能产生交叉反应，如金黄色葡萄球菌、A群及B群链球菌、淋病奈瑟菌、醋酸钙不动杆菌、肺炎克雷伯菌及其他革兰阴性细菌，而出现假阳性，使特异性达不到100%。国外此法多用于高危人群的筛查，国内应用较少。
2.3 直接荧光抗体测定（DFA） 将针对CT的单克隆抗体用荧光标记，与标本中的CT结合后，荧光显微镜检查就能见到发荧光的原体（Ebs）。针对脂多糖（LPS）的抗体荧光不够亮，且染色不匀；而针对主要外膜蛋白（MOMP）的抗体荧光更亮，且减少非特异染色［4］。DFA不象培养法必须存在有活力的CT，但其敏感性受人群感染率的影响，它最适宜用来检测沙眼衣原体高流行率人群（如性病门诊病人）。其缺点是在低感染率的人群中敏感性差，受实验人员的主观判断影响较大。由于此法操作简便、费用低廉，在不具备分子生物学试验条件的医院，可用以检测临床标本［5］，但也需经验丰富者操作。
3 分子生物学检测方法
3.1 直接检测核酸的技术（即基因探针技术） 此技术利用核酸分子的复性原理，用特定的标记探针去检测标本中的靶核酸。最初为放射性标记，后来逐渐发展为酶或化学发光试剂标记。目前有美国圣地亚哥Gen-Probe公司生产的发光标记基因探针试剂盒PACE-2。与培养法相比，Gen-Probe方法的敏感性和特异性分别为73%～96%和98%～99%，尚无培养法敏感和特异。由于此法成本高、步骤繁琐，随着核酸扩增技术的出现，基因探针技术也就失去了其应用价值。
3.2 核酸扩增技术 继基因探针技术之后，很快出现了核酸扩增技术，这些技术包括：（1）靶DNA或RNA的扩增，如聚合酶链反应（PCR），基于转录的扩增（TBA），自动维持序列扩增（3SR） 以及链置换扩增（SDA）；（2）探针扩增，如连接酶链反应（LCR），Q-β复制酶的扩增；（3）杂交后信号的扩增，如复合探针和分支DNA探针。其中研究和使用较多的是PCR和LCR，尤其是PCR技术，对感染诊断引起了革命性变化［6］。
PCR是1985年建立的一种体外扩散特异DNA片段的技术，Dutilh等首先报道应用PCR检测细胞培养物中的CT，此后多种诊断CT感染的PCR方法相继建立，PCR具有高度敏感性和特异性，重复性好并易于自动化，可检测少量DNA（相当于1～3个原体）。据报道，在抗生素治疗后，培养法检测可立即呈阴性，而PCR在2周内仍可得出阳性结果，引物是决定PCR特异性的主要因素。目前报道的引物序列多选自衣原体的MOMP基因、rRNA基因和内源质粒，rRNA基因较为保守，多用于构建衣原体属特异性引物，一般认为质粒PCR较MOMP PCR更敏感。Palmer等报告MOMP PCR检测初段尿的敏感性为82.0%，特异性为94.0%;Mahony等报道质粒PCR检测初段尿的敏感性和特异性均可达100.0%；连接酶反应（LCR）为1989年建立的另一种核酸扩增方法。1995年LCR在美国获准用于CT的检测。Abbott公司已率先向市场投放利用LCR诊断CT感染的LCX试剂盒。LCR和EIA检测初段尿的敏感性分别为96.3%和37.0%，EIA和培养法检测宫颈拭子的敏感性分别为55.6%和78.3%，而培养法为56.3%，EIA仅为18.8%，特异性均为100.0%，LCR只扩增含需寻找的精确序列的DNA，因而具有很高的特异性，但敏感性不如PCR。PCR实验在操作时，尤其要避免外界污染及残留污染，以免发生假阳性。PCR的开展需要一定的实验条件，实验人员需具备较为熟练的分子生物学操作技术。最好在实验条件较为成熟的实验室开展。
综上所述，随着社会的日益开放，衣原体导致疾病的范围已逐渐扩大到多个临床学科，一方面是衣原体已成为性传播疾病中最常见的一种病原体，另一方面它可形成严重的持续感染。结合实际情况，泌尿生殖道CT感染的实验诊断中，经典的细胞培养方法虽然特异性强，但耗时长、费用大，且不够敏感；免疫学方法简便快捷，在基层医院具有实用性；具有核酸扩增技术的PCR和LCR等检测方法能满足特异性，敏感性均高且快速检测的需要，而且可检测各发病率人群。但这些实验要求具备高精的仪器和熟练的技术，且试剂价格昂贵，不太适合大量人群的普查；总之，CT感染的诊断目前已发展到分子生物学水平，随着科学技术的不断进步，必将出现新的检测技术，以便更准确、快速地对CT感染作出诊断。
【参考文献】
1 李凤鸣.眼科全书.北京：人民卫生出版社，1996，1305-1311.
2 姚兵，杨岳琴，朱启锭.套式聚合酶链反应结合直接荧光法检测女性生殖道沙眼衣原体.中华医学检验杂志，1998，21：338-341.
3 LeBar WD. Keeping up with new technology： new approaches to diagnosis of Chlamydia infection. Clin Chem，1996，42：809-812.
4 Hallsworth PG， Hefford C， Waddell RG， et al. Comparison of antigen detection， polymerase chain reaction and culture for detection of Chlamydia trachomatis in genital infection. Pathology， 1995，27：168-171.
5 罗春丽，蔡晓钟，陈宏础，等.荧光单克隆抗体检测泌尿生殖道沙眼衣原体.上海医学检验杂志，1995，10：92-92.
6 Buck GE. The polymerase chain reaction： a revolutionary new procedure for the laboratory diagnosis of infectious disease. J Ky Med Assoc，1996，94：148-152.
作者单位： 255000 山东淄博，淄博市张店区妇幼保健院
（编辑：秋 实）