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【摘要】 目的 通过对工艺压缩空气微生物含量的控制，控制血浆蛋白压滤分离过程中微生物的负载量。方法 使用PALL公司空气除菌过滤芯将蛋白分离工艺中使用的工艺压缩空气进行终端过滤，并对使用空气过滤芯的工艺压缩空气前后微生物含量进行比较。结果 使用空气除菌过滤芯未检出微生物，未使用空气过滤芯的工艺压缩空气含有的微生物0.13CFU/m3。结论 使用空气除菌过滤芯对血浆蛋白分离过程中减少微生物的负载量，减少分离过程中微生物污染，保证最终产品热原质检测结果有着重要意义。
【关键词】 工艺压缩空气 空气除菌过滤芯 压滤机 微生物含量
人血浆作为特殊生物活性的健康人源性珍贵的资源，如何充分利用血浆中的各种功能蛋白一直是血浆蛋白分离生产厂家追求的目标。1946年，美国Cohn等［1］发明了低温乙醇法分离血浆蛋白是血浆蛋白的组分分离最可靠的经典方法。相隔近10年后，Kislter等［2］于1954年提出了另一种改良的低温乙醇分离血浆蛋白方法，该改良方法简化了操作，缩短了生产周期，提高了血浆蛋白的回收率，当时的最高回收率2.5g/100ml血浆，但是上述分离方法在组分沉淀分离过程中一直采用离心法。20世纪90年代中后期，人们为了不断的提高血浆蛋白的回收率，逐步采用低温乙醇压滤法分离血浆蛋白替代了低温乙醇离心法分离血浆蛋白，使血浆白蛋白的回收率有了明显的提高，目前普遍可以达至2.7～2.9g/100ml血浆［3］。而且其他指标（如热原稳定性、浊度等）也优于离心法［4］，使用压滤机分离血浆蛋白组分沉淀，需要使用大量的工艺压缩空气对组分沉淀进行气吹，以获得更高的白蛋白回收率，严格控制工艺压缩空气洁净度，特别是工艺压缩空气中微生物含量对控制血浆蛋白分离中微生物的负载，保证分离过程中尽可能少的微生物污染有着特别的意义。笔者所在单位目前对工艺压缩空气使用终端采用PALL公司空气除菌过滤芯进行过滤，并对使用和未使用空气过滤芯的工艺压缩空气进行微生物含量检查，现报告如下。
1 材料与方法
1．1 材料与仪器 （1）ML37-PE螺杆空压机（上海英格索兰压缩机有限公司）。（2）OIL-X压缩空气系列滤器，多明尼克汉德净化设备（上海有限公司）。（3）空气除菌滤芯：AB1PFR7PVH4（美国PALL公司）。（4）尘埃粒子计数器（美国METONE公司）。（5）浮游菌空气采样器MAriT（美国 Millopore公司）。（6）营养琼脂培养基（由本单位培养基室提供）。
1．2 工艺压缩空气流程 空气压缩机→储气罐→OILL-X压缩空气水分离器（滤芯型号WS25-C）→OIL-X压缩空气过滤器（滤芯型号：K058A）→OIL-X压缩空气过滤器（滤芯型号：K058AA）→吸附式干燥机→OIL-X压缩空气过滤器（滤芯型号：K058AR）→OIL-X压缩空气过滤器（滤芯型号：K058ACS）→空气除菌过滤器（滤芯型号：AB1PFR7PVH4）→使用点。
1．3 方法 笔者所在单位在工艺用压缩空气使用前安装PALL公司空气除菌过滤器，对微生物进行控制，空气使用空气除菌过滤器前后的微生物含量和微生物进行检测比较，共3次，每次取5次样品，每次采集空气样品1m3，经注射用水冲洗并经灭菌处理的方法冲罐作为缓冲，对压缩空气进行收集并排放5min以消除缓冲罐中的空气对检测结果的影响，然后与Millipore公司提供的游浮菌空气采样器连接，收集压缩空气对浮游菌进行检测，然后与尘埃粒子计数器连接对尘粒数进行检测。
2 结果
2．1 微生物含量比较 见表1。 表1 微生物含量比较（浮游菌）
注：检测3次，每次5个样品，平均0.13CFU/m3
2．2 尘粒数含量比较 见表2。表2 尘粒数含量比较
3 讨论
对压缩空气进行有效过滤几乎是所有制药行业不可缺少的，本单位的压缩空气系统经过多级过滤器，对空气中存在着的大量水分、尘埃、粒子、细菌及多效的润滑油能够进行有效的过滤［5］，尽管气体输送管道采用了316L不锈钢，但生产工艺要求，压缩空气在使用前必须经冷媒降温后方可使用，加之本单位降温采用的是裂管式换热器，势必增加了管道的长度，在终端使用过滤器是非常必要的，鉴于目前对压缩空气的微生物含量和尘粒数没有标准可依，笔者参照洁净室洁净度级别对百级的要求［6］，对本单位的工艺压缩空气制定了可接受标准(见表1、表2)。从测定结果可见，微生物的含量（浮游菌检测方法）经过空气除菌滤芯后未检出浮游菌，尘粒数均有明显的减少，虽然尘粒数未采用空气除菌滤器也能达到100级空气洁净度的要求，但是≥0.5μm尘粒数较多，这说明虽然空压系统能够对压缩空气进行有效的过滤获得高于100级的空气洁净度，但是由于管道偏长，管路中可能会产生尘粒，同样微生物虽然能通过过滤器进行有效的控制，未经空气除菌过滤器的压缩空气仍有可能含有微生物，终端对微生物的有效控制显得非常重要，以本单位人血白蛋白经由低温乙醇压滤法分离血浆蛋白获得白蛋白原料FV所使用的压缩空气来计算，每批次板框250个，每框气吹2min，500min气吹时间，该空压机的容积流量为6.2m3/min，在使用时按80%的容积流量计算，共消耗压缩空气6.2×80%×500=2470m3，可见气吹分离工艺中使用的压缩空气用量之大，所以严格控制微生物是非常必要的。从用气总量中可以看出，可以大量的减少制品中微生物的含量，大多数细菌和许多霉菌都能产生热原，尽管低温乙醇法分离血浆蛋白过程中细菌不易繁殖，但是存在的微生物仍会释放内毒素［7］，所以在分离工艺过程中加强微生物的控制，对有效的降低各步血浆蛋白分离的微生物负载量，防止微生物产生的热原质，进一步提高制品的安全性，具有重要意义。
【参考文献】
1 Cohn EJ, Strong LE, Huges WL, et al. Preparation and properties of serum and plasma proteins IV a system for the separation into fractions of the photein and lipoprotein components of biological tissues and fluids . Amer Chem, 1946, 68(3):459-475.
2 Kistler P, Nitschmann H. Large Scale production of human plasma fraction. Vox Sang, 1962, 7(4):414-424.
3 汪伟军，管红玲，董士香.不同区域血浆对蛋白回收率的影响. 中国输血杂志，2007，20（3）：226-227.
4 肖林，郝杰，程雅琴,等. 人血白蛋白制品浊度与稳定性的分析.中国生物制品学杂志，2002，15（6）：366-368.
5 药品生产验证指南编委会.药品生产验证指南.北京：化学工业出版社，2003，395-398.
6 国家食品药品监督管理局.药品生产质量管理规范（1998年修订）.1999.
7 粟克喜.热原质与脂多糖.微生物学免疫学进展,1990，46(3)：10-14.
作者单位：730046 甘肃兰州，兰州生物制品研究所血液制剂室