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【摘要】 目的 使用TIM856自动滴定与G103手工滴定两种不同pH计在人血浆蛋白分离中对pH值检测结果比较。方法 在血浆蛋白分离中对血浆蛋白组分I和组分Ⅳ的制作进行pH值的滴定，依据滴定值对血浆蛋白组分I和组分Ⅳ加缓冲液进行pH值调整，比较两种不同滴定方式对最终pH值结果的影响。结果 使用两种不同滴定方式最终pH值的结果差异无显著性(P>0.05)，但两组数据标准差差异较大，手工滴定的pH值离散性明显大于自动滴定pH值。结论 自动滴定和手工滴定虽然都达到期望值范围，但自动滴定操作简单、精确，获得的pH值一致性好，手工滴定操作复杂，精确度较低，获得的pH值离散性较大。
【关键词】 血浆蛋白分离;pH值滴定;缓冲液
在人血浆蛋白分离工艺中，各种成分的有效分离，达到较高的收率是至关重要的环节，目前已被广泛采用的低温乙醇法分离血浆蛋白工艺[1]，主要依据其5个重要生产工艺可变参数为(温度、pH、乙醇浓度、离子强度和蛋白浓度)。pH值调控蛋白电荷状态，越接近其等电点(i.e.p)，蛋白越容易沉淀，从而达到工艺所期望的分离效果，pH计作为分离工艺中对血浆蛋白溶液的氢离子浓度的测定手段是至关重要的。准确的添加缓冲液的量来控制工艺所要求的pH范围，通过对小样品滴定的方式所获得的缓冲液的量，利用计算公式放大来实现对血浆蛋白该生产步骤pH值的控制。以往我们使用的手工滴定的方式。随着技术的不断更新，目前采用的自动滴定的方式，现将两种不同滴定方式来控制血浆蛋白溶液pH值的结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 手工滴定pH值主要设备 pH-METER G103 pH计;复合电极;温度探头;厂家：奥地利标准液CertiPUR○R，7.00 4.00 厂家：德国，MERCK公司。
1.2 自动滴定pH值主要设备 TIM856自动滴定pH计;复合电极：pHC2005-8;温度探头：T201;标准液：TUPAC，7.00 4.005;厂家：法国Radiometer analytical公司。
1.3 pH值滴定方法
1.3.1 手工滴定方法
1.3.1.1 分离组分Ⅰ pH值范围7.15～7.25，4000kg血浆蛋白溶液，各取1kg两个样品，使用2ml吸管吸取pH 4缓冲液磁力搅拌下滴加两个样品pH至7.18，1:5稀释两个滴加pH 4缓冲液的样品，pH值均在7.15～7.25之间时，取两个滴加缓冲液量的平均值(若稀释后pH不在7.15～7.25之间，应重新滴定)。放大到4000kg，计算pH 4缓冲液量加入制品中，最终检测4000kg血浆蛋白溶液的pH值。
1.3.1.2 分离组分Ⅳ pH值范围5.80～5.90，10000kg制品溶液，各取1kg两个样品，使用10ml吸管吸取0.872mol NaHCO3缓冲液磁力搅拌下滴加两个样品pH值至5.85，1:10稀释两个滴加0.872mol NaHCO3缓冲液的样品，pH值均在5.80～5.90之间时，取两个滴加缓冲液的平均值(若稀释后pH不在5.80～5.90之间，应重新滴定)，放大到10000kg，计算0.842mol NaHCO3缓冲液加放制品中，最终检测10000kg制品溶液的pH值。
1.3.2 自动滴定方法 步骤同上，将pH计期望值设定为7.18或5.85，pH计将自动滴加缓冲液，pH到7.18或5.85时，自动停止加缓冲液。
2 统计学方法
对各20批次pH值做趋势图;应用SPSS 11.5统计学软件，对所得的各组数据分别进行检验和标准差分析，对P<0.05为差异有显著性。
3 结果
手工滴定与自动滴定pH值分离组分I制品pH值20批次趋势图见图1。
手工滴定与自动滴定pH值分离组分Ⅳ制品pH值20批次趋势图见图2。图1 手工滴定与自动滴定pH值分离组分Ⅰ制品20批次趋势图
图2 手工滴定与自动滴定pH值分离组分Ⅵ制品20批次趋势图 对手工滴定与自动滴定pH值各20批次pH值进行统计学分析见表1。表1 两种不同滴定方法pH值的比较FI手动滴定pH值标准差大于自动滴定pH值标准差，离散性大。
4 讨论
手工和自动滴定pH从控制pH值的角度来看都能达到目的，但从两组数据的离散度和从pH值的趋势图可以看出，手工滴定方法获得的数值离散性大、曲线为锯齿状，而自动滴定方法获得的数值离散性小、曲线为比较光滑的曲线，导致这一结果的原因主要有以下几个方面。第一，手工滴定使用吸管，2ml吸管的精确度为0.02ml，10ml吸管的精确度为0.10ml自动滴定管的精确度为0.01ml，精确度差别明显。第二，手工滴定时，工作人员读取滴加缓冲液的量时误差明显大于自动滴定的值。第三，因手工滴加缓冲液时个人滴加快慢程度有差异，往往手工滴定有超出期望值的情况，造成重复滴定，而且与期望值有明显差异;而自动滴定设定pH值后，pH计将匀速滴加缓冲液，当pH值接近期望值时，pH计将自动降低滴加速度，pH值到期望值时加液将自动终止，每次滴定均能达到期望值。随着科学技术的不断更新，新型设备的不断使用，在血浆蛋白分离中如何更好地控制不同组分的分离[2]，使宝贵的人血浆资源最大限度得到充分利用，获取更大的收获率已经是每个血液制品生产企业的共识。在不断完善的GMP[3]管理中，制品的批间差越小，制品的质量指标越稳定在一个小的范围已经是考查一个工艺稳定性的重要指标。在使用自动滴定pH计后，不但大大减少了工作人员的工作强度，也避免了人为因素导致的批间差。因此新技术、新设备的不断开发和使用，将为人血浆蛋白的分离纯化、血浆资源的综合利用，不断提高血液制品的安全性和产品质量起到积极的作用。
【参考文献】
1 刘湘编.输血疗法与血液制剂(低温乙醇法).北京:人民卫生出版社，1996，155-173.
2 张安山,周海云.实现自控分离对人血浆蛋白质量的影响.中国生物制品学杂志，2007，20(7)：531-533.
3 国家食品药品监督管理局，药品生产质量管理规范(1998年修订)，1999.