GC法测定黑骨藤伸筋透骨喷雾剂中薄荷脑的含量

【摘要】  目的 建立黑骨藤伸筋透骨喷雾剂中薄荷脑的含量测定方法。方法 采用毛细管气相色谱法。色谱条件：PEG 20 M柱(30m×0.25mm×0.25μm);载气：氮气; 柱温130℃;分流比20：1;进样口温度160℃，检测器温度(FID)200℃。结果 薄荷脑在0.6641～3.3206μg范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为100.55 %(RSD为0.4 %)。结论 该方法简便、准确可靠，重现性好，结果稳定。可用于黑骨藤伸筋透骨喷雾剂中薄荷脑的含量测定。

【关键词】  黑骨藤伸筋透骨喷雾剂;薄荷脑;气相色谱法;含量测定

【Abstract】 Objective To establish an accurate GC method for the determination of Menthone in Heiguteng Shenjintougu Spray. Methods The capillary vessel GC was used. Chromatograph condition: PEG 20 M column(30m×0.25mm×0.25μm); The carrier gas was N2;The column temperature was 30℃; The Split ratio was 20:1; The injector temperature was 160℃; The detector temperature(FID) was 200℃. Results The linear range of Menthone was 0.6641～3.3206μg(r=0.9999)，respectively. The linear relation were good.The average recoveries was 100.55%(RSD=0.4%).Conclusion The method was simple and accurate,sensitive and reliable. It can be used for quality control of Menthone in Heiguteng Shenjintougu Spray.

　　【Key words】 Heiguteng Shenjintougu Spray; Menthone;GC;quantitative determination

　　黑骨藤伸筋透骨喷雾剂是由黑骨藤、伸筋草、透骨香、薄荷脑等中药材组成的一种外用喷雾剂，具有活血化瘀，消肿止痛，舒筋活络等作用。临床上主要用于急慢性软组织损伤，症见患部疼痛肿胀、青紫瘀斑、关节活动功能障碍等。该品种尚无现行有效的质量标准，为了更好地控制和评价产品质量，有必要建立一种灵敏度高、专属性的方法来控制其有效成分的含量。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　气相色谱仪：岛津2014气相色谱仪、FID氢火焰检测器，GCsolution色谱工作站。色谱柱： PEG 20M柱30m×0.25mm×0.25μm弹性石英毛细管色谱柱。

　　1.2 试药

　　对照品：薄荷脑：0728-200005、樟脑：110747-200507(均购于中国药品生物制品检定所)。乙醇为分析纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

　　样品来源于贵州老来福药业有限公司，批号为20100301、20100302、20100303。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　PEG 20M柱30m×0.25mm×0.25μm弹性石英毛细管色谱柱。柱温130℃，进口温度160℃，检测器温度(FID)200℃;分流比20：1,理论板数以薄荷脑峰计不得低于7800。

　　2.2 样品制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备

　　精密称取薄荷脑对照品166.03mg，置25ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(6.6412mg/ml)。

　　2.2.2 内标溶液的制备

　　精密称取樟脑适量置容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成约4mg/ml的内标溶液。

　　2.2.3 供试品溶液的制备

　　精密量取样品1ml，置10ml量瓶中，加内标溶液4ml，加入2ml水，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.2.4 阴性样品溶液的制备

　　按处方量称取除薄荷脑以外的各种药材适量，依生产工艺制成不含薄荷脑的阴性样品。精密量取该阴性样品1ml，置10ml量瓶中，加水2ml，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为阴性样品溶液。

　　2.3 测定方法

　　分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性样品溶液各1μl注入色谱仪，记录色谱图，阴性样品在待测成分及内标保留时间附近均无显著干扰峰出现，各组分之间峰的分离度>1.5，结果见图1。图1 气相色谱图A. 樟脑对照品 B.薄荷脑对照品 C.供试品 D.阴性对照

　　2.4 线性关系考察

　　精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，加内标溶液4ml，加水2ml，用乙醇稀释至刻度，在选定的条件下进样测定，以进样浓度和峰面积之比(AR/As)*Cs进行线性回归分析，回归方程为：Y=0.9273X-0.0097，r=0.9999。结果表明，薄荷脑在0.6641～3.3206μg/μl范围内线性关系良好。

　　2.5 精密度试验

　　取同一份供试品溶液，吸取1 μl注入色谱仪中测定峰面积，重复测定6次，RSD为0.35 %。

　　2.6 重复性试验

　　取同一样品按供试品溶液的制备项下方法制备6份供试品溶液，分别吸取供试品溶液1μl注入色谱仪中测定，记录色谱图，峰面积RSD为0.52%。

　　2.7 稳定性试验

　　吸取同一供试品溶液1μl分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h注入色谱仪中测定，记录色谱图，峰面积RSD为0.26%，说明本方法在10h内稳定性良好。

　　2.8 回收率试验

　　取重复性项下的样品10ml，置20ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，精密量取1ml(样品含量为16.78mg/ml)，置10ml容量瓶中，共取6份，分别精密加入薄荷脑对照品溶液(浓度为8.253mg/ml)1ml，再分别精密加入4ml内标溶液，加水2ml，加乙醇至刻度，摇匀，取1μl进样测定，计算回收率，平均回收率为100.55%，RSD为0.4%，结果见表1。表1 回收率测定结果

　　2.9 样品测定

　　取3个批号的样品，照上述方法测定，分别计算样品中薄荷脑的含量，结果见表2。表2 样品含量测定结果

　　3 讨论

　　该制剂中君药黑骨藤的研究资料很少，化学成分尚不清楚，伸筋草主要成分石松碱等缺乏对照品，均无法进行含量测定。臣药透骨香为地标药材，含量测定少有研究，延胡索为止痛的经典药味，含量测定研究资料较多，其中延胡索中的延胡索乙素具有良好的止痛作用，可作为含量指标。但由于受其他药材干扰较大，提取方法有待进一步研究。

　　本品中所含薄荷脑为芳香药、调味药及祛风药，可用于皮肤或黏膜产生清凉感以减轻不适及疼痛[1]。薄荷脑为挥发油类物质，沸点较低，适宜用GC法测定，现有中成药中薄荷脑的含量测定方法较多，多数为气相色谱法，现参照有关文献[2]建立本品薄荷脑的含量测定，以有效地控制产品质量。

　　该方法简便、可行，重现性好，可用于黑骨藤伸筋透骨喷雾剂中薄荷脑的含量测定。

【参考文献】
  　1 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部).2010年版.北京：化学工业出版社，2010：395.

　　2 卢日刚.妇康洗液中挥发性成分含量测定.中成药，2001，24(11)：896.