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流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，流感病毒分为甲、乙、丙3种型别，甲型流感病毒暴发较多，乙型流感病毒也是人类流感暴发的主要病原体之一[1]。2012年2月21日，浙江省永嘉县桥下镇防保站报告某小学发生二十多例流感样病例，县疾病预防控制中心接到报告后，立即组织流行病学专家和实验室检验人员赶赴该校现场，开展流行病学调查和应急处置工作，同时采集标本开展实验室检测诊断，现将该事件实验室检测情况分析如下。
1对象与方法
1.1对象选择该校流感样学生患者30例，其中男生16例，女生14例。患者来自5个不同班级，按临床症状不同分层，各层随机抽样。2012年2月21日选择感冒严重(体温≥38℃，感冒症状明显)的学生10例;2012年2月24日选择20例，其中轻度感冒(体温37.5℃～38℃，有咳嗽、咽痛等症状)的学生10人，感冒前驱期(体温≤37.5℃，有咳嗽或头痛等轻微感冒症状)的学生10人。
1.2方法
1.2.1标本采集和处理标本类型为咽拭子。使用已经消毒灭菌的棉签置于患者咽喉部轻微擦拭，取出后置于3mlHANKS病毒保存液振荡均匀，冷藏运送至县疾病预防控制中心实验室-70℃保存待检。
1.2.2实验仪器与试剂实验仪器分别有EXCO生物安全柜，XW-80A微型漩涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)，CHB-100恒温金属浴(杭州博日科技有限公司)，Microfuge zzR低温高速冷冻离心机(美国BECKMAN公司)，ABI7500实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)等;试剂为上海之江生物科技有限公司的核酸提取试剂，批号为20111201。
1.2.3RNA提取使用上海之江生物科技有限公司的核酸抽提试剂盒(磁珠柱提取法)，在PCR实验室按试剂盒说明书进行RNA提取。
1.2.4PCR反应体系及反应条件使用上海之江生物科技有限公司的一步法RT-PCR反应检测流感病毒。反应体系为25μl，其中混合液为20μl，包括19μl各型核酸荧光PCR检测混合液与1μl RT-PCR酶，振荡混匀数秒，3000rpm离心数秒，取上述混合液20μl置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5μl加入进行PCR扩增。反应条件：45℃逆转录10min;95℃预变性15min ;以95℃ 15sec、60℃ 60sec扩增40个循环，选取FAM通道在60℃进行单点荧光检测。
2结果
2.1基本情况该校现有学生361人，男生177人，女生184人，教职工23人。全校共12个班级，分6个级段，每个级段2个班。所有学生来自附近村庄，无住校。2012年2月12日开始，该校学生陆续出现发热、咳嗽、流涕、咽痛等上呼吸道感染症状，截止2012年2月21日，累计发病学生36人，罹患率9.97%(36/361)，其中男生19人，罹患率10.73%(19/177)，女生17人，罹患率9.24%(17/184)，男女罹患率比较，χ2=0.18，P>0.05，差异无显著性。
2.2实验室检测2012年2月21日，采集标本由县疾病预防控制中心实验室主任亲自操作，采集的标本主要是具有严重感冒症状，体温≥38℃的学生患者，共 10例。经实验室病原学检测，结果7例学生乙型流感病毒抗原阳性，3例学生标本检测结果阴性，乙型流感病毒抗原检出率为70%(7/10)。2012年2月24日，标本由县疾病预防控制中心实验室的年轻技师采集。对象为部分已经经过治疗，现场体温<38℃的学生，共20例，实验室病原学检测结果均为阴性，乙型流感病毒抗原检出率为0(0/10)。
3讨论
实验室检测是实时荧光定量PCR技术方法，属于分子生物学诊断。随着分子生物学的发展，特别是PCR技术的发展为流感病毒的鉴定与分型提供了越来越多的简便、快速、灵敏、特异性强的方法[2]。该技术的优点是敏感性和特异性均高，主要应用于快速诊断。我们对学生感冒或流感分型不明确的情况下，使用该方法，既有效又可快速诊断，应该是非常明智的选择。30例患者标本实验室检测结果，7个标本显示乙型流感病毒抗原阳性，阳性率为23.33%(7/30)，结合现场流行病学调查结果，可以判定本次该校学生暴发事件为乙型流感暴发疫情。患者的样本采集非常重要，典型病例采集的咽拭子病毒检出率高，10个标本检出7个，乙型流感病毒抗原检出率为70%;而非典型病例的咽拭子病毒检出率为0。此结果应该与样本采集的环境等因素有一定关系。2012年2月24日采集的样本是经过药物治疗，且感冒症状比较轻或不典型的学生，其病毒含量比较低或已经被排除;而2012年2月21日采集的标本是典型感冒症状的学生，患者的病毒量比较高。所以，在今后工作中，采集样本时，必须考虑样本的环境、患者条件以及采集的有效程度，增加标本的可靠性和实用性，提高标本检出率。我国流感每年发病率为10%～30%[3]，其流行病学特点以暴发为主，甲型流感居多，乙型流感相对较少，但传播更快，蔓延更迅速。针对乙型流感暴发疫情的流行特点，建议学校加强晨检，早期发现和报告疫情，及时采取有效措施，防止疫情进一步蔓延[4]，保障学生健康成长。
【参考文献】
1张冬艳，冯燕，茅海燕，等.中国南方地区乙型流感株与疫苗株的HA1区氨基酸差异研究.浙江预防医学，2011，23(7)：1-7.
2蔡欣，朱泽轶，邹民吉，等.流感病毒诊断方法的研究进展.医学研究杂志，2009，38(5)：7-9.
3秦成奎，明恒泰.一起小学乙型流感暴发流行的调查报告.江苏预防医学，2010，21(2)：28-29.
4李志芳，傅明芬，陈伟.浙江省桐庐县一起小学乙型流感爆发疫情调查.上海预防医学杂志，2010，22(8)：414.