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【摘要】 目的 探讨雌激素受体的不同亚型（ERα、β）及人乳头状瘤病毒（HPV）在宫颈病变中的相互作用及其对宫颈病变的影响。方法 应用免疫组化两步法检测ERα/β亚型及HPV16-L1/E7蛋白在66例不同程度宫颈病变组织中的表达。结果 在宫颈癌组中，HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）者及ERβ阳性率高于非宫颈癌组，差异有显著性（P=0.019和P=0.029），并且HPV的表达状态与ERβ的表达相关。结论 ERβ可能通过影响HPV在宿主细胞中的感染状态对宫颈病变的发展起一定影响。
关键词 雌激素受体 人乳头状瘤病毒 宫颈病变 免疫组化
The expression ofαandβisoforms of ER and HPV16-L1/E7in cervical Lesions
Shang Yuhong，Bai Lixia，Bao Dongmei，et al.
Department of Obstetrics and Gynecology，Peking University People’s Hospital，Beijing100044.
【Abstract】 Objective To investigate the expression and interaction between the two isoforms of the ER and HPV16in cervical lesions.Methods The immunohistochemistry method was used to study the expression ofαandβisoforms of ER and HPV16-L1/E7in66cases including chronic inflammation，atypical hyperplasia and invasive canˉcer of cervix.Results There were more ERβpositive cases and HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）cases in the carcinoma group（P=0.019and P=0.029），and the states of HPV expression was closely related to whether ERβpositive or not.Conclusion ERβmaybe affect the progression of cervical lesions by determining the infection state of HPV.
Key words human papillomavirus estrogen receptor cervical lesion immunohistochemistry
宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤，HPV特别是HPV16、18等高危型别感染是引起宫颈癌变的首要因素。但HPV感染并非诱发宫颈癌的唯一因素，尚需与其他因素协同作用才能导致宫颈恶性病变的发生。临床资料提示，HPV感染与雌激素及其受体在宫颈病变的发生发展中可能存在某些协同作用。本课题通过免疫组化方法研究ER的不同亚型及HPV的不同片断在宫颈正常上皮、非典型增生及宫颈癌上皮中的表达，探讨ER及HPV与不同程度宫颈病变的联系。
1 材料与方法
1.1 标本收集 选取1998年1月～2002年9月间，我院妇科阴道镜下活检或手术切除获得的宫颈浸润癌、CIN及慢性宫颈炎组织共66例，其中宫颈浸润癌组织21例，CIN28例，慢性宫颈炎17例，年龄20～82岁，平均（42.96±16.38）岁。经10%甲醛固定后石蜡包埋，5μm连续切片。全部标本均经我院病理科诊断确诊。
1.2 主要试剂 鼠抗人ERα单克隆抗体C-542:加拿大Stressgen公司生产。兔抗人ERβ多克隆抗体:美国Upstate公司生产。鼠抗人HPV16-E7单克隆抗体8C9:美国Zymed公司生产。鼠抗人HPV16-L1单克隆抗体CAMVIR-1: 美国Neomarkers公司生产。PV-9000免疫组化试剂盒:北京中山生物技术有限公司生产。宫颈癌SiHa细胞由香港科技大学梁纯博士馈赠。
1.3 实验方法 参照PV-9000免疫组化试剂盒说明进行两步法免疫组化染色。实验中以PBS代替一抗作为阴性对照，并分别以MCF-7及SiHa细胞爬片染色作为ERα、ERβ和HPV16-E7、HPV16-L1的阳性对照。结果判定:光学显微镜下观察宫颈上皮细胞核内有棕黄色颗粒沉淀者为阳性，阴性结果细胞染色同背景（蓝紫色）。根据HPV表达情况分为三组:A组为HPV16-L1（-）/HPV16-E7（-）;B组为HPV16-L1（+）/HPV16-E7（+）;C组为HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）。
1.4 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件进行t检验、单因素方差分析、χ 2 检验及多因素相关分析等统计学分析。
2 结果
2.1 HPV在不同病变宫颈组织中的表达 在全部66例标本中，HPV16-L1表达阳性者30例，HPV16-E7阳性者45例（图1，图2）。并发现在HPV16-L1表达阳性的标本中，HPV16-E7亦均为阳性表达（B组），约占45.5%;HPV16-E7阴性者，HPV16-L1亦阴性（A组），约占31.8%;但在HPV16-E7阳性标本中则有一部分未见HPV16-L1的表达（C组），约占22.7%。以χ 2 检验统计宫颈不同程度病变组其免疫组化结果的差异。结果显示，在宫颈癌组中，HPV16-L1（-）/HPV16-E7（+）者（C组）占42.9%，而非宫颈癌组中仅占13.3%，差异有显著性（P=0.019），见
表1。
表1 宫颈不同程度病变中ER 亚型及HPV16的表达情况 略
2.2 雌激素受体在不同病变宫颈组织中的表达 在全部标本中，ERα表达阴性者35例，阳性者31例，宫颈癌组中阳性率（38.1%）低于非宫颈癌组（51.1%），但其差异无显著性（P>0.05）。ERβ阴性者38例，阳性者28例，比较其在不同病变组所占比例，可见宫颈癌中阳性率为21.9%，明显高于非宫颈癌组（P=0.029，表1，图3，图4）。
2.3 雌激素受体与HPV16表达状态的关系 比较在A、B、C组中，不同雌激素受体亚型所占比例，可见ERα与HPV16的表达状态无关（P>0.05）;而与HPV16-E7及HPV16-L1均阳性组（B组）相比，仅HPV16-E7阳性组（C组）中ERβ的表达率更高，差异有显著性（P=0.034，表2）。
表2 ER亚型与HPV16表达的关系 略
以t检验比较ERβ阴性组平均年龄（40.85±14.47）岁略低于ERβ阳性组（46.00±18.70）岁，但无统计学意义（P=0.27）。以单因素方差分析比较A、B、C组的平均年龄，分别为（37.38±10.79）岁、（43.11±18.13）岁、（49.54±16.86）岁，虽有上升趋势，但差异无显著性（P>0.05）。
以多因素相关分析比较ERβ及年龄因素对C组与其他病例的影响，结果显示，年龄因素的相关系数为0.494，
图1 略
图2 略
图3 略
图4 略
ERβ阳性表达的相关系数为0.025，说明HPV的表达状态与年龄因素无明显相关性而与ERβ的表达相关。
3 讨论
在宫颈癌的发病原因中，HPV作为非常重要的致病因素而被广为研究。其中高危型HPV感染与宫颈癌之间的关系已得到公认。但多项研究证实:单纯的HPV感染本身并不足以引起宫颈癌变，即使是HPV的整合型感染，其感染本身亦多是引起上皮的永生化改变。有研究指出，在HPV16感染中，只有20%发展为非典型增生，而这些癌前病变中，亦只有大约1/5发展为宫颈癌。近年来多项研究表明，HPV尚需与其他因素协同作用，才会导致宫颈癌的发生。随着宫颈癌发病年龄的年轻化趋势，及大规模人群调查显示:口服避孕药者HPV感染及宫颈癌发生的风险率上升，HPV感染与性激素及其受体的关系日益引起重视 ［1，2］ 。既往文献通过免疫组化及原位杂交等方法检测正常宫颈上皮、非典型增生及宫颈癌组织中雌激素受体及HPV的表达情况，发现ERα在宫颈正常组织中的表达率较非典型增生及宫颈癌组织中高。并发现，虽然ER阳性患者更易发生HPV感染，但其表达情况不同，HPV感染的型别亦不同。在ERα阴性的宫颈组织中，HPV16、18型感染更为多见;而在ERα阳性的宫颈组织中，多为HPV31、33、35型等感染 ［3～7］ 。本研究中应用免疫组化方法检测了ER两种不同亚型及最常见的高危型HPV感染型别—HPV16病毒的两个不同抗原部位在宫颈良性病变、非典型增生及宫颈癌上皮中的表达情况。发现在HPV16-L1表达阳性的标本中，HPV16-E7亦均为阳性表达。但在HPV16-E7阳性标本中则有一部分未见HPV16-L1的表达。由于HPV与宿主染色体整合的位点常发生在E2和E1的开放读码框区域，HPV环链最常见在E1或E2的开放读码框内断裂，并导致部分或全部丧失E4、E5、L1和L2，而仅有E6和E7整合入宿主DNA。因此在整合型感染时，L1编码的HPV病毒衣壳蛋白常出现表达缺失。根据HPV病毒整合的这一特点，可通过HPV16-E7和HPV16-L1的表达情况推测HPV感染后在宿主细胞中存在的物理状态:当仅有HPV16-E7表达阳性而HPV16-L1阴性时（C组），可能为整合型感染;而二者均阳性者（B组）可能为游离型感染。在本实验宫颈癌组 中，HPV16-E7阳性而HPV16-L1阴性组（C组）的比例相对较高，而慢性宫颈炎组中二者均表达组（B组）的比例相对更高。这也与既往研究已经证实的HPV整合型感染更易导致宫颈上皮癌变的理论相一致。
在本实验中，宫颈癌组中ERα表达的阳性率（38.1%）低于非宫颈癌组（51.1%），与以往文献报道一致 ［8］ ，但其差异无统计学意义，考虑可能与病例数相对较少有关。随病变程度的增高，ERβ的表达有上升趋势，且宫颈癌组的阳性率明显高于非宫颈癌组。同时在本实验中发现，与HPV16-E7及HPV16-L1均阳性组（B组）相比，仅HPV16-E7阳性组（C组）中ERβ的表达率更高而ERα的表达率无明显差异。由于从HPV感染进入宿主细胞到病毒整合到宿主适当的位置需要很长时间，其潜伏期甚至可长达二、三十年，并且雌激素及其受体亦存在年龄相关性，因此本实验中以多因素相关分析比较ERβ及年龄因素对C组与A、B组的影响，结果显示，年龄因素的相关系数为0.494，ERβ阳性表达的相关系数为0.025，说明HPV的感染类型与年龄因素无明显相关性而与ERβ的表达可能相关，即有ERβ表达时，HPV的整合型感染更多见。
有本实验推测，在宫颈上皮中，ERβ可能通过影响HPV在宿主细胞中的感染状态对宫颈病变的发展起一定影响。而通过HPV16病毒的两个不同抗原部位在宫颈良性病变、非典型增生及宫颈癌上皮中的表达情况，可以推测HPV感染后在宿主细胞中存在的物理状态，为预测宫颈病变的转归提供依据。
参考文献
1 Webster K，Taylor A，Gaston K.Oestrogen receptor transcripts associated with cervical human papillomavirus infection.Sex Transm Infect，2002，78（3）:210-214.
2 Auborn KJ，Woodworth C，Dipaolo JA，et al.The interaction between HPV infection and estrogen metabolism in cervical carcinogenesis.Int J Cancer，1991，49（6）:867-869.
3 Shew ML，McGlennen R，Zaidi N，et al.Oestrogen receptor transcripts associated with cervical human papillomavirus infection.Sex Transm Inˉfect，2002，78（3）:210-214.
4 Salazar ELE.Value of estrogen and progesterone receptors in the manˉagement of intraepithelial squamous lesions of low grade.Gynecol Obstet Mex，2001，69:1-5.
5 Konishi I，Fujii S，Nonogaki H，et al.Immunohistochemichal analysis of estrogen receptors，progesterone recptors，Ki-67antigen，and human papillomavirus DNA in normal and neoplastic epithelium of the uterine cervix.Cancer，1991，68（6）:1340-1350.
6 Nonogaki H，Fujii S，Konishi I，et al.Estrogen receptor localization in normal and neoplastic epithelium of the uterine cervix.Cancer，1990，66（12）:2620-2627.
7 Konishi I.Studies on pathogenesis of cervical carcinoma based on the analysis of growth and differentiation mechanism of cervical epithelium.Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zassi，1990，42（8）:812-822.
8 Gonzalez SJL，Chavez BJ，Maricela RA，et al.Value of estrogen and proˉgesterone receptors in the management of intraepithelial squamors lesions of low grade.Ginecol Obstet Mex，2001，
69:1-5.
作者单位:100044北京大学人民医院
（收稿日期:2004-04-15） （编辑守 中）