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【摘要】 目的 研究PTEN基因蛋白在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达，探讨其与Ⅰ型子宫内膜癌预后的关系。 方法 应用现代免疫组化SP染色法检测PTEN基因蛋白在35例Ⅰ型子宫内膜癌组织中的表达，采用Kaplan-Meier生存率曲线描述Ⅰ型子宫内膜癌中PTEN表达组和未表达组的术后生存率，并采用Log-Rank检验分析组间差异。 结果 35例Ⅰ型子宫内膜癌PTEN蛋白表达缺失率为65.71%。14例患者随访资料完整，其中PTEN未表达组患者的中位生存期576.00天，PTEN表达组患者的中位生存期918.00天。PTEN表达组的生存率明显高于PTEN未表达组。 结论 PTEN可能是Ⅰ型子宫内膜癌中突变率较高的基因，PTEN蛋白表达是I型子宫内膜癌患者预后良好的标志。
关键词 Ⅰ型子宫内膜癌 PTEN 预后 免疫组织化学SP法
Prognostic correlation of tumor-suppressor gene PTEN in type I endometrial carcinoma
Xu Lin，Jiang Min，Pu Ping，et al.
Department of Gynaecology，the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College，Kunming650032.
【Abstract】 Objective To determine the potential role of PTEN expression in the prognosis of type I endome-trial carcinoma.Methods Expression of PTEN was detected by immunohistochemical staining SP method.Results We detected loss of PTEN protein expression in23cases of35type I endometrial carcinoma.The median survival time of PTEN-positive cases was918days，while that of PTEN-negative cases was576days.The survival rate of PTEN-positive cases was significantly higher than that of PTEN-negative cases.Conclusion The loss of PTEN expres-sion is relatively frequent in type I endometrial carcinoma.PTEN-positive staining is a significant prognostic indicator of favorable survival for patients with typeⅠendometrial carcinoma.
Key words type I endometrial carcinoma PTEN prognosis immunohistochemistry SP method
子宫内膜癌是女性生殖道最常见的三大恶性肿瘤之一，其确切病因尚不清楚。根据子宫内膜癌的病理及临床特征，可分为两型:雌激素相关型与非雌激素相关型。前者分化较好，预后良，发病年龄相对年轻（大部分在绝经前）;后者分化差，子宫内膜多萎缩，发病年龄相对较大（大部分在绝经后） ［1～5］ 。随着分子生物学技术的发展，人们认识到癌是一种基因病，有3种特殊的基因（即癌基因、抑癌基因、DNA损伤修复基因）参与癌的发生、发展。其中抑癌基因PTEN与I型子宫内膜癌的关系是目前研究的热点。PTEN基因与I型子宫内膜癌预后的关系，目前国内尚未见这方面的报道。我们用SP免疫组化法对Ⅰ型子宫内膜癌组织中PTEN蛋白表达情况进行研究，旨在探讨PTEN蛋白表达与Ⅰ型子宫内膜癌患者预后的关系。
1 材料与方法
1.1 病例和标本 选取1998年1月～2003年8月我院病理科存档处手术切除的Ⅰ型子宫内膜癌患者35例的石蜡标本，35例患者年龄26～73岁，平均（52.89±12.20）岁，术前均未接受放疗、化疗及性激素类药物治疗。其中14例患者随访资料完整，死亡9例，存活5例。同时选取同期因其它原因行子宫切除的10例正常子宫内膜组织作对照，年龄32～62岁，平均（44.30±10.54）岁。
1.2 试剂和方法 鼠抗人PTEN单克隆抗体、SP试剂盒及DAB KIT染色剂均购自福州迈新公司。石蜡切片常规脱蜡至水，高压抗原修复，血清封闭，滴加1∶200PTEN鼠抗人单克隆抗体4℃过夜，生物素标记的第二抗体室温下孵育10min，再以链霉菌抗生物素—过氧化物酶溶液室温下孵育10min，最后用DAB显色，苏木素复染，酒精梯度脱水，二甲苯封片，每一步骤间均用PBS（pH7.4）缓冲液冲洗3次，每次3min。每批均设阴性对照和阳性对照，阳性对照为正常的子宫内膜组织切片，阴性对照为未加一抗的PBS缓冲液，实验条件严格一致。
1.3 结果判断和分析 高倍镜（×400）下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定。染色强度评分标准:不着色0分，黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。阳性细胞所占比例评分标准:阳性细胞数<10%者0分，10%～40%者1分，40%～70%者2分，≥70%者3分。两种评分相加，0～1分为阴性，2分为弱阳性，3～4分为阳性，5～6分为强阳性。统计学处理采用Kaplan-Meier描绘生存率曲线，Log-Rank检验组间差异。
2 结果
2.1 PTEN蛋白在各类组织中的分布 PTEN蛋白定位于正常子宫内膜腺上皮细胞胞浆，阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布;恶性变的细胞表现为PTEN蛋白表达减弱或缺失。35例Ⅰ型子宫内膜癌中，23例阴性表达，11例弱阳性表达，1例阳性表达，表达缺失率为65.71%。2.2 PTEN蛋白表达与Ⅰ型子宫内膜癌预后的关系 Ⅰ型子宫内膜癌组织中，PTEN未表达组患者的平均生存天数（619.56±73.87）天，中位生存期576.00天;PTEN表达组患者的平均生存天数（1070.50±87.52）天，中位生存期918.00天。PTEN未表达组的生存率曲线较PTEN表达组差，经 Log-rank检验，示两组间生存率差异有显著性（χ 2 =5.54， P=0.0185）。详见表1，图1。
表1 14例Ⅰ型子宫内膜癌术后生存天数略
图1 Ⅰ型子宫内膜癌PTEN表达组与PTEN未表达组的生存率曲线图略
3 讨论
PTEN基因是1997年Li等 ［6，7］ 在人染色体10q 23.3 分离得到一个新的具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN基因突变或缺失导致磷酸酶活性丧失，使细胞发生恶性转化。PTEN蛋白水平与子宫内膜癌预后的关系，是近几年许多学者关注的问题。Kanamori等 ［8，9］ 对98例I型子宫内膜癌患者进行术后随访发现，PTEN蛋白表达阳性组的生存率明显高于PTEN蛋白表达阴性组分别为62.4%和11.8%，提示PTEN蛋白表达水平有预测预后的价值。I型子宫内膜癌PTEN蛋白表达提示预后良好，可能与PTEN基因的下列作用机制有关:（1）PTEN通过对细胞内第二信号分子磷脂酰肌醇（3，4，5）-三磷酸（PIP 3 ）去磷酸化 ［10］ ，抑制依赖PIP 3 的磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白磷酸激酶B（PI 3 K/PKB）信号传导通路的活性，影响其下游通路的作用靶（包括G 1 期细胞依赖激酶抑制因子P 27kipl 、翻译抑制因子4EBPl等）的磷酸化水平，从而诱导凋亡，并介导G 1 期停滞，影响基因的表达，对细胞生长具有负性调节作用 ［11～13］ 。（2）PTEN氨基酸序列与张力蛋白和辅助蛋白高度同源，PTEN基因可能通过调节细胞聚集粘附功能，影响肿瘤细胞的浸润和转移 ［14，15］ 。本研究也同样发现，35例I型子宫内膜癌中，PTEN表达组的中位生存期为918.00天，PTEN未表达组的中位生存期为576.00天。同时Kaplan-Meier生存率曲线也非常直观的反映PTEN表达组的生存率明显高于PTEN未表达组（P=0.0185）。提示PTEN蛋白表达水平可以作为判断I型子宫内膜癌预后的分子标志物，为临床治疗提供指导。
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作者单位:650032云南昆明医学院第一附属医院妇产科（△ 病理科）
（收稿日期:2004-09-20） （编辑田 雨）