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【摘要】 目的 探讨癌基因Bcl-2、nm23在卵巢上皮性恶性肿瘤的发生、发展和转移过程中的意义。 方法 采用免疫组织化学技术，检测了30例卵巢癌标本中的Bcl-2和nm23的表达状况。 结果 Bcl-2、nm23在良性、交界性、卵巢癌Ⅲ期、卵巢癌Ⅳ期各组中的表达率分别是20%，40%，45%，47%和40%，40%，54%，21%。在卵巢癌Ⅲ期有淋巴结转移组中nm23（1/5，20%）较无淋巴结转移组中（5/6，83%）有一个较低的表达（P<0.01）;Bcl-2在无淋巴结转移组中（2/6，30%）与有淋巴结转移组中的表达差异无显著性（2/5，40%;P>0.05）。 结论 Bcl-2过表达与卵巢癌浸润和增殖有关，nm23低表达与卵巢癌转移有关，与癌组织的表面种植及局部扩散关系不大。
关键词 卵巢癌 淋巴结转移 免疫组化 Bcl-2蛋白 nm23蛋白
Relations between Bcl-2，nm23and metastasis of ovarian epithelial tumor
Wen Li，Wen Kaihui，Yan Ruilan，et al.
Department of Obstetrics and Gynecology，The323th Hospital of PLA，Xi'an710054.
【Abstract】 Objective To investigate the correlation of formation，development and metastasis if Bcl-2，nm23and ovarian epithelial tumor.Methods Labelled streptavidin-biotin（L SAB ）immunohistochemical staining method.Results The positive staining rate of Bcl-2and nm23were20%，40%，45%，46.7%and40%，40%，54%，23%in the benign，borderline and invasive epithelial ovarian tumor stageⅢ，stageⅣ，respectively.In the ovar-ian epithelial tumor stageⅢ，lower incidence of nm23positive staining was also found with lymph node metastasis（1/5，20%）than in that without lymph node involvement（5/6，83%;P<0.01）there was not different expression inci-dence of Bcl-2in ovarian epithelial tumor stageⅢwithout lymph node metastasis（3/6，50%）than in that with lymph node involvement（2/5，40%;P>0.05）.Conclusion It is suggested that Bcl-2overexpression might play a significant role in invasion and proliferation in the ovarian epithelial tumors，not in lymph node metastasis.nm23low-expression might play a significant role in lymph node metastasis.It does not has significant correlation with surface planting of cancer tissue and partial proliferation.
Key words ovarian epithelial tumor lymph node metastasis immunohistochemistry protein Bcl-2 pro-tein nm23
卵巢癌是妇科肿瘤中死亡率最高的疾病。其预后与病理分级、临床分期和淋巴结转移呈正相关。笔者采用免疫组化法对30例卵巢癌组织中Bcl-2、nm23的表达进行了研究，以探讨其在卵巢癌发生、发展和转移中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源 取自西京医院手术、病理证实的30例原发性上皮性卵巢癌标本，系福尔马林固定、石蜡包埋组织块。所有患者手术前未经化疗或放疗，全部患者按WHO分类标准FIGO进行临床分期，经手术病理确诊。30例上皮性卵巢癌均为同期随机抽样患者。同时取良性上皮性卵巢肿瘤标本10例，交界性上皮性卵巢肿瘤10例。
1.2 试剂与方法 兔抗人Bcl-2蛋白多克隆抗体、多克隆nm23抗体均为美国Santa公司产品。以上试剂均由北京中山生物技术有限公司提供。石蜡包埋组织块连续切片，3μm厚，捞片于涂有防脱胶玻片上，60℃烤箱内过夜备用。nm23免疫组化染色采用LSAB法免疫组化技术，操作按说明书进行。羊血清代替一抗作阴性对照。Bcl-2采用SABC免疫组化染色方法，参照SABC使用说明书进行。对照实验用同等稀释度的正常家兔血清及血清稀释液替代第一抗体。
1.3 分组 卵巢良性上皮性肿瘤组10例，卵巢交界性上皮性肿瘤组10例，卵巢恶性上皮性肿瘤Ⅲ期组11例，卵巢恶性上皮性肿瘤Ⅳ组19例。在卵巢恶性上皮性肿瘤Ⅲ期中根据其淋巴结转移情况，又可分为淋巴结转移阳性组5例，淋巴结转移阴性组6例。
1.4 结果判定 2名病理医师独立观察，每个切片应至少有5个代表性的高倍视野。nm23阳性标准:nm23阳性染色位于胞浆的棕黄色颗粒或团块，当阳性染色的卵巢癌细胞>31%时为阳性表达，<30%时为阴性表达，即低表达。Bcl-2阳性标准:根据阳性细胞所占比例判定。5%～50%肿瘤阳性染色的定为阳性（+），阳性细胞>50%定为强阳性（++），<50%的肿瘤细胞着色或与背景一致不着色的判断为阴性（-）。
2 结果
2.1 Bcl-2的阳性表达率 Bcl-2和卵巢癌临床病理学特征见表1，Bcl-2染色阳性率:在良性卵巢肿瘤组中为20%，在交界性肿瘤组中为40%，在卵巢癌Ⅲ期组中为45%，在Ⅳ期卵巢癌组中为46.7%。各组间相比较，良性卵巢肿瘤组与交界性卵巢肿瘤组和卵巢癌Ⅲ期、Ⅳ期组间阳性表达率差异有显著性（P<0.05）;卵巢癌Ⅲ期组与卵巢癌Ⅳ期组间的表达率差异无显著性（P>0.05）。见表1。
2.2 nm23的阳性表达率 nm23和卵巢癌临床病理学特征见表1，nm23染色在良性肿瘤、交界性肿瘤和卵巢癌Ⅲ期各组中的表达率分别为40%，40%，54%;各组间的表达率差异无显著性（P>0.05）。卵巢癌Ⅳ期中的nm23的阳性表达率为21%，明显低于以上各组。其良性肿瘤组、交界性肿瘤组和卵巢癌Ⅲ期组与卵巢癌Ⅳ期组间阳性表达率差异有显著性（P<0.05）。卵巢癌Ⅳ期组nm23阳性表达率明显降低。见表1。
表1 Bcl-2和nm23在卵巢上皮性肿瘤中的表达（略）
2.3 Bcl-2和nm23与淋巴结转移的关系 笔者将上皮性卵巢癌Ⅲ期中淋巴结转移阳性与无淋巴结转移者各分一组。在淋巴结转移阳性组中nm23表达率为20%。Bcl-2在淋巴结转移阳性组与阴性组间的表达率差异无显著性（P>0.05）。nm23在淋巴结转移阳性组与阴性组间表达率差异有非常显著性（P<0.01）。见表2。
表2 Bcl-2和nm23与卵巢癌淋巴结转移的关系（略）
3 讨论
抗凋亡基因Bcl-2与其他一些基因共同参与对细胞凋亡的调节 ［1］ ，正常情况下呈周期性低水平表达，过量表达的Bcl-2可抑制细胞凋亡。细胞生长不仅依赖细胞的增生，而且也依赖细胞程序性的死亡 ［2～4］ ，抑制细胞程序性死亡的一些基因可参与肿瘤的发生，Bcl-2基因是其中较重要的一种，它最早从小鼠的淋巴瘤中分离出来 ［5］ 。Bcl-2基因并不刺激细胞增殖，而是促进非增殖的细胞存活，延长细胞寿命，使细胞不易凋亡 ［6］ 。本试验显示，Bcl-2在交界性肿瘤组、卵巢癌Ⅲ期组、Ⅳ期卵巢癌组中高表达说明该指标的检测有助于预测恶性肿瘤的程度。目前，卵巢癌的治疗仍是手术及术后系统的化疗，通过卵巢癌组织中的Bcl- 2水平，可估计该癌对化疗的敏感程度，具有一定的意义。
nm23基因是一抑制肿瘤转移的基因。它参与微管的聚合/解聚合G蛋白的介导的信号传导过程 ［7］ ，Hemsy等在原发性乳腺癌的研究中发现，nm23RNA水平与淋巴结转移和预后有关，在肿瘤转移抑制表型中起重要作用 ［8，9］ 。笔者的研究表明，nm23低表达与卵巢癌深度浸润和淋巴结转移有显著关系。nm23低表达者卵巢癌的浸润深度和淋巴结转移率大于高表达者。这与日本学者Manolai等 ［10］ 对卵巢癌nm23-H 1 表达水平的研究结果相一致。
笔者的结果提示Bcl-2过表达在卵巢上皮癌的浸润和增殖中起重要作用。nm23低表达说明nm23基因参与卵巢上皮性癌淋巴结转移和肿瘤深度浸润过程的调节。在本试验中nm23的表达率在良性肿瘤、交界性肿瘤、恶性肿瘤有腹膜扩散的Ⅲ期患者组中无明显不同，表明nm23表达与直接浸润和肿瘤细胞的腹腔种植无关。在Ⅲ期卵巢肿瘤中，nm23在有淋巴结转移组中的表达率明显低于无淋巴结转移组（P<0.01）。说明nm23表达水平与淋巴结转移有关，nm23低表达提示淋巴结转移的可能性较高，预后较差。
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（编辑子 涵）
作者单位:710054陕西西安解放军第323医院妇产科
北京解放军北京军区总医院妇产科
陕西西安解放军第四军医大学西京医院