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【摘要】 目的 探讨沙眼衣原体小鼠肺炎感染模型的建立及检测。 方法 用沙眼衣原体小鼠肺炎株（MoPn）鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色及RT-PCR，检测衣原体在小鼠肺组织的生长;通过肺组织髓过氧化物酶检测，确定肺炎症细胞类型。 结果 一定剂量的衣原体MoPn经鼻腔吸入可引起小鼠衣原体肺炎，以肺组织衣原体生长及肺组织大量中性粒细胞浸润为特征。 结论 小鼠可作为研究沙眼衣原体肺炎有价值的动物模型。
【关键词】 沙眼衣原体 小鼠 肺炎 髓过氧化物酶
Establishment and detection to Chlamydia trachomatis pneumonitis of the mouse
Bai Lan，Lv Lixia，Bai Hong
Clinical Lab，Huanhu Hospital，Tianjin300060.
【Abstract】 Objective To establish a mouse model of Chlamydia trachomatis pneumonitis and investigate the detective method.Methods Pneumonitis was produced by intranasal inoculation of Chlamydia trachomatis mouse pneu-monitis（MoPn）biovar in C57BL/6mice.Chlamydia growth in the lungs were determined by chlamydia infectivity and chlamydia mRNA expression in the lungs.Lung inflammatory cell type was determined by lung myeloperoxidase assay.The infection was confirmed by inoculating Hela229cell monolayer with lung homogenates followed by HRP conjugate anti-Chlamydia LPS mAb.Results Intranasally infected with C.trachomatis MoPn in mice resulted in Chlamydia mouse pneumonitis featured by chlamydia growth and massive infiltration of neutrophils in the lung.Conclusion Mice may serve as a useful animal model for the study of the Chlamydia trachomatis pneumonitis.
【Key words】 Chlamydia trachomatis mouse pneumonitis myeloperoxidase
沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（MoPn）是小鼠肺炎的天然病原体，最初是从小鼠肺组织分离得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研究衣原体体内感染。本研究以MoPn通过呼吸道感染易感小鼠，并通过检测衣原体在肺组织中的生长及肺组织炎症细胞的浸润，对小鼠衣原体肺炎进行检测和鉴定。
1 材料与方法
1.1 沙眼衣原体菌株 MoPn生长于HeLa229细胞，用不连续密度梯度离心法纯化衣原体，进行活性测定后用于感染小鼠。
1.2 感染小鼠 6～8周龄雌性C57BL/6小鼠（中国医学科学院血液病研究所提供），在微麻状态下鼻腔内吸入40μl含1×10 3 包涵体形成单位（IFU）的MoPn。
1.3 肺组织上清液中衣原体活性测定 无菌采集小鼠肺组织右叶，制备成组织匀浆，离心。用肺组织上清液滴定HeLa细胞单层。用连接有过氧化物酶的鼠抗衣原体脂多糖单抗（anti-LPS mAb）（Virostat）染色，以鉴定衣原体的感染性，感染强度以IFU表示 ［1］ 。
1.4 肺组织髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）检测 ［2］ 制备肺组织匀浆，沉淀物超声粉碎。上清液与25μl TMB底物液反应，以人髓过氧化物酶做标准品，在全自动酶标仪上读取650nm OD值。
1.5 MoPn mRNA的表达 RT-PCR检测小鼠肺组织沙眼衣原体MoPn mRNA表达。
2 结果
2.1 MoPn感染后小鼠肺组织衣原体生长 见图1。图1显示，在感染后第2天，小鼠肺组织可检测到衣原体生长，IFU值增高。衣原体生长在感染后第7天达高峰，4只小鼠肺组织均检测到衣原体MoPn mRNA表达，见图2。
图1 衣原体感染C57BL/6小鼠肺组织衣原体活性略
图2 小鼠呼吸道沙眼衣原体感染后肺组织衣原体MoPn mRNA表达略
2.2 中性粒细胞髓过氧化物酶（MPO）检测 C57BL/6小鼠呼吸道感染衣原体MoPn后第2天，肺组织MPO活性明显增高（P<0.01），至第3天达高峰，以后逐渐下降，感染后21天恢复正常水平（图未显示）。说明中性粒细胞于感染后第2天在肺组织大量聚集。
3 讨论
沙眼衣原体是影响人类健康的重要病原体，随着临床衣原体感染性疾病的日益增多，迫切需要深入了解衣原体感染的保护性免疫学机制。近年来，使用感染的动物模型在阐明衣原体感染的免疫生物学上取得了重要的研究进展。本研究采用适宜剂量的沙眼衣原体小鼠肺炎株，通过鼻腔吸入感染C57BL/6种系小鼠，结果导致小鼠衣原体肺炎的发生。肺组织出现以中性粒细胞为主的大量炎症细胞渗出。
小鼠生殖道衣原体感染模型证实，BALB/C鼠感染第1周生殖道大量中性粒细胞浸润及感染后第2周C3H小鼠输卵管持续炎症细胞浸润 ［3］ 。我们的研究也证实，C57BL/6种系小鼠呼吸道感染衣原体MoPn引起肺组织大量中性粒细胞浸润，与感染诱导的炎症性细胞因子IL-1、IL-6及TNFα的产生有关 ［4］ 。MPO是中性粒细胞氧依赖杀菌系统的基本成分。人类中性粒细胞MPO占细胞干重的5%，而单核白细胞MPO含量很低。故认为MPO是中性粒细胞的标志性酶。检测MPO可作为检测中性粒细胞聚集的常用方法 ［5］ 。
参考文献
1 Yang X，Gartner J，Zhu L，et al.IL-10gene knockout mice show en-hanced Th-1-like protective immunity and absent granuloma forma-tion following Chlamydia trachomatis lung infection.J Immunol，1999，162:1010.
2 Bai H，Yang J，Yang X，et al.Intranasal inoculation of Chlamydia tra-chomatis mouse pneumonitis agent（MoPn）induces significant neu-trophil infiltration which is not efficient in controlling the infection in mice.Immunology，2005，114（2）:246.
3 Darville，T，C.W.Andrews，ad Jr，J.D.Sikes，et al.Early local cy-tokine profiles in strains of mice with different outcomes from chlamydial genital tract infection.Infect.Immun，2001，69:3556-3561.
4 白虹，谢蜀生，Yang Xi，等.沙眼衣原体肺感染中炎症性细胞因子的表达以及与机体防御的关系.免疫学杂志，2004，4（20）:57.
5 Schierwagen C，Bylund-Fellenius AC，Lundberg C.Improved method for quantification of tissue PMN accumulation measured by myeloperoxi- dase activity.J Pharmacol Methods，1990，23:179.
基金项目:天津市自然科学基金项目资助（编号:033609611）
作者单位:1 300060天津市环湖医院检验科
2 300070天津医科大学免疫教研室
（编辑新 竹）