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【摘要】 目的 探讨PTEN基因在乳腺癌组织中的表达及其意义。 方法 采用免疫组化LSAP法，对60例乳腺癌组织进行了PTEN的检测。 结果 20例乳腺增生性病变及良性肿瘤的PTEN均呈高表达，乳腺癌组织中PTEN的高表达率为53.3%，两者比较差异有显著性（P<0.05）;雌激素（ER）阳性组PTEN高表达率为66.7%，明显高于ER阴性组（P<0.05）;有腋窝淋巴结转移者PTEN高表达率（33.3%），明显低于无腋窝淋巴结转移者（P<0.05）;PTEN的表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级无关，但随着组织学分级的增高，PTEN高表达率呈下降趋势。 结论 乳腺癌组织中存在PTEN基因表达缺失及减弱，PTEN的表达异常可能与乳腺癌的发生、发展密切相关。
关键词 PTEN 基因表达 乳腺癌 免疫组化
Expression of PTEN gene protein in breast carcinoma
Liang Yanxiao，Du Hong，Li Wen
Department of Pathology，The First People's Hospital of Guangzhou，Guangzhou510180.
【Abstract】 Objective To study the expression and significance of PTEN in breast cancer.Methods Ex-pression of PTEN gene protein in60cases of breast carcinoma were detected by LSAB immunohistochemical method.Results High expression of PTENwas found in all normal breast tissues，it was significantly higher than breast carci-noma groups.High expression rate of PTEN was significantly higher in estrogen receptor positive groups than in estro-gen receptor negative groups（P<0.05）.In axillary lymph node metastasis groups，PTEN was expressed with a high positive rate of33.3%，it was lower than in the group without axillary lymph node metastasis（P<0.05）.Expression of PTEN was not related to age，tumor size，histologic grade.However，as increasing of histologic grade，the high PTEN expression was declined.Conclusion Abnormal expression of PTEN is associated with the tumorigenesis and develop-ment of breast carcinoma.
Key words breast carcinoma PTEN gene protein expression immunohistochemistry
1997年Li ［1］ 等用代表性差别分析法（representational dif-ference analysis，RDA），研究原发性乳腺癌第10q23染色体的同源性丢失区，分离得到一种新的基因，命名为与张力蛋白同源、第10染色体丢失的磷酸酶基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome，PTEN）。该基因的高表达使肿瘤细胞的生长受到抑制，如果缺乏PTEN基因或PTEN基因受到损害，则有可能导致肿瘤的发生。我们采用免疫组化法检测PTEN在乳腺癌中的表达情况，旨在探讨其在乳腺癌发生发展中的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院1998～2000年手术切除的乳腺浸润性导管癌根治标本60例，年龄30～81岁，平均46岁。平均每例取淋巴结10个（4～32个），标本采用4%的福尔马林固定，常规石蜡包埋切片。有腋窝淋巴结转移（LN+）27例，无腋窝淋巴结转移（LN-）33例。按肿物大小分两组，<2.5cm者33例，>2.5cm者27例，另取20例乳腺增生性病变及良性肿瘤作为对照。
1.2 试剂和免疫组化染色 单克隆抗-PTEN抗体（DAKO公司产品），采用免疫组化LSAB法，切片厚4μm，行微波处理，一抗4℃过夜，DAB显色，以PBS缓冲液代替第一抗体作阴性对照。
1.3 结果判定 PTEN以肿瘤细胞胞质内出现棕黄色颗粒，ER和雄激素（PR）以细胞核出现棕黄色颗粒，为阳性判定标准。随机选择10个高倍视野，计数1000个细胞，计算阳性细胞百分率。<10%为“-”，10%～50%为“+”，>50%为“++”，其中“-”、“+”为低表达，“++”为高表达。
1.4 组织学分级 采用Bloom-Richardsm方法。
1.5 统计学方法 运用SPSS10.0for Windows软件进行统计学处理，采用t检验和χ 2 检验。
2 结果
2.1 在乳腺增生性病变及良性肿瘤与乳腺癌中PTEN蛋白的表达 PTEN蛋白主要定位于乳腺腺上皮及癌细胞胞质中，见图1。20例乳腺增生性病变及良性肿瘤的PTEN均呈高表达，乳腺癌组织中PTEN的高表达率为53.3%，两者比较差异有显著性（P<0.05）。
2.2 PTEN蛋白的表达与乳腺癌临床病理特征的关系 见表1。ER阳性组PTEN高表达明显高于ER阴性组（P<0.05），有腋窝淋巴结转移者PTEN高表达率明显低于无腋窝淋巴结转移者（P<0.05）。随着组织学分级的增高，PTEN的高表达率逐渐降低，但统计学差异无显著性（P>0.05）;PTEN高表达与患者的年龄、肿瘤大小无关。
表1 PTEN蛋白在乳腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系 （略）
3 讨论
肿瘤的发生、发展是一个复杂的多阶段过程，有多种基因的共同作用。PTEN基因是一种抑癌基因，它具有抑制生长、促进细胞凋亡、参与细胞周期调控、抑制细胞的黏附和肿瘤转移的作用 ［2，3］ 。如果该基因发生突变或丧失抑癌活性，即由抑癌基因变为癌基因，使细胞分裂无限进行，最终导致肿瘤的形成 ［4］ 。自1997年发现PTEN基因以来，国外学者对其在恶性肿瘤中作用，进行了广泛的研究。Li ［1］ 等在脑、甲状腺、乳腺、前列腺等肿瘤组织中，发现有PTEN基因突变和异常表达，与这些部位肿瘤的发生、发展有关。Tamura ［5］ 等利用基因转染实验显示PTEN对细胞的迁移、生长、扩散具有抑制作用，PTEN基因突变或失活有助于肿瘤细胞浸润和转移。
目前，有关PTEN基因在乳腺癌组织中的表达及其意义，国内报道较少。本试验检测了抑癌基因PTEN在乳腺增生性病变及良性肿瘤与乳腺癌中的表达，结果显示，PTEN基因在乳腺增生性病变及良性肿瘤均呈高表达，而乳腺癌组织中PTEN基因的高表达率仅为53.3%，明显低于乳腺增生性病变及良性肿瘤，差异具有非常显著性（P< 0.01），表明PTEN低表达是乳腺癌常见的分子事件，其可能参与乳腺癌的发生、发展。因为PTEN蛋白是唯一一种能使脂类去磷酸化的抑癌基因产物，其通过P13K/PTEN/PKB/Akt信号转导途径发挥抑癌作用 ［6］ 。在乳腺增生性病变及良性肿瘤的细胞质有较强的PTEN表达，提示他们可能存在P13K/PTEN/PKB/Akt信号转导途径，调控乳腺上皮细胞的物质代谢、细胞增殖、分化。当PTEN表达减弱或缺失，细胞内P13K/PTEN/PKB/Akt信号转导途径功能异常，导致细胞物质代谢、细胞增殖、分化失去正常调控，易于恶变。本文结果还提示，在有腋窝淋巴结转移27例中，PTEN基因蛋白高表达率仅为33.3%（9/27），33例无转移病例PTEN基因蛋白高表达率为69.6%（23/33），两者比较差异有显著性（P<0.05），表明PTEN蛋白的异常表达可能预示乳腺癌转移和预后差。本试验发现，PTEN蛋白表达水平与ER水平呈正相关，与患者的年龄、肿瘤大小、组织分级无关;但随着乳腺癌组织分级的增高，PTEN的高表达率逐渐降低，虽然统计学无显著性差异，但随着研究资料的不断增加，可能有助于其相关性的判断。总之，PTEN蛋白在乳腺癌中存在异常表达，在乳腺癌的发生、发展中起到一定的作用，值得进一步研究。
（本文图片略）
参考文献
1 Li J，Yen C，LiawD，et al.PTEN，a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain，breast，and prostate cancer.Science，1997，275:1943-1947.
2 Lee JO，Yang H，Georgescu MM，et al.Crystal structure of the PTEN tu-mor suppressor:implications for its phosphoinositide phosphatase activity and membrane association.Cell，1999，99（3）:323-334.
3 Steck PA，Pershouse MA，Jasser SA，et al.Indentification of a candidate tumor suppressor gene，MMACI，at chromosome10q23.3that is mutated in multiple advanced cancers.Nat Genet，1997，15:356-362.
4 Shiozana T，Nikaid T，Shimiza M，et al.Immunhistochemical analysis of the expression of CDK4and P16in human endometrioia-type endome-trial carcinoma.Cancer，1997，80:2250-2256.
5 Tamura M，Gu JG，Matsumoto K，et al.Inhibition of cell migration，spreading，and focal adhesions by tumor suppressor PTEN.Science，1998，280（5369）:1614-1617.
6 Eng C，peacocke M.PTEN and inherited hamartoma-cancer syr-dromes.Nat Genet，1998，19:223-228.
作者单位:510180广东省广州市第一人民医院病理科
（编辑骄 阳）