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ELISA 法是目前病毒性疾病诊断的最常用方法。它是一项定位、定性和定量的综合性技术，具有特异、快速、敏感、方便等优点，便于基层使用。IgM抗体是蛋白质抗原反应中首先产生的抗体，可用来进行病人的早期诊断，也是病毒近期感染的重要感染指标。
1 IgM抗体检测几种方法
1.1 SPA（葡萄球菌A蛋白）吸收抗IgM试验 Bradlleg等（1979）等报道用SPA吸收被检血清中的IgG，如被检血清用SPA吸收后，ELISA结合水平下降，则说明主要是IgM。但本法有很大局限性，不是所有的SPA株均适用吸收IgG。所以重复性差，假阳性较多见，由于SPA不能充分去除IgG，因此被误认为抗病毒IgM抗体。
1.2 以抗原检测特异性IgM 先将抗原包被于固相载体，加入被检血清，此时血清中相应的特异性IgG及IgM可和固相载体上抗原相结合形成免疫复合物。再加入酶标记的抗人IgM（μ）第二抗体结合物。抗人IgM（μ）仅能与IgM结合，以此反映血特异性IgM。此法缺点是抗原纯度要求严格。纯化病毒抗原技术复杂，还可因血清中IgG的竞争性而受限制，降低敏感度，也可受RF因子干扰产生假阳性。
1.3 抗体捕捉法 将抗人IgM的(μ)链抗体吸附到固相载体上，用于捕获抗体，加入被检血清。这样，IgM所有特异性都被（μ）链抗体保留固相载体上，洗去未被固定的血清中其他成分，然后加病毒抗原，如被检血清中有特异性IgM,二者结合，随后加酶标记的抗病毒抗原的IgG，它就与被IgM固定的抗原结合，显色为阳性，不显色为阴性。此法的优点：（1）此法可使IgG及其他抑制物与IgM分开，被检抗原通过与固相载体上的病毒抗体结合。这样，可以避免抗原直接固定或吸附到固相载体时可能发生的变形。（2）方法敏感，尤其对高比例的病毒特异性抗体。（3）可用于产后感染急性期，先天感染及某些虫媒病毒感染的脑脊液中，IgM含量很高。
2 IgM抗体测定技术存在的问题及解决方法
2.1 非特异性结合 在固相技术中，非特异性结合主要来源于血清中IgG抗体竞争性抑制所造成的，解决的办法：（1）高度稀释血清标本，则免疫球蛋白的非特异性吸附就不再是一个问题。（2）用非活动性蛋白，明胶或正常动物血清，封闭残存游离蛋白结合位置，减少非特异性结合。（3）用含有吐温―20动物血清缓冲液稀释血清和结合物。也可用抗体阴性的人血清（浓度1%～2%）减少非特异性结合。
2.2 类风湿因子（RF）干扰 在固相技术中，RF干扰有两种可能：A：第一种可能是吸附到固相抗IgM上的RF因子可直接与标记IgG抗体结合，不需要抗原参与。B：第二种可能是RF因子与特异性IgG抗体结合，再与抗原和标记抗体反应。上述两种干扰，第二种只有血清抗病毒IgG滴度高而血清稀释低时才出现假阳性反应。而第一种可能是很重要的，血清中如存在高水平RF因子时，则常常出现假阳性反应。原因是酶标记抗体容易形成凝集。而RF因子对聚合物比一般IgG具有更高的亲和力。由于这一类干扰，不需要特异性IgG抗体和抗原作媒介。因此，可采用不加抗原为对照。如同样出现阳性反应，则证明为RF因子干扰而出现的假阳性。去除RF干扰方法有以下几种： （1）高度稀释血清标本。（2）用F(ab)作为标记抗体，因为RF因子只与IgG分子Fc段结合。（3）用含有凝集IgG的稀释血清标本。凝集IgG可以封闭RF因子结合点，而阻止假阳性反应。
3 讨论
检测病毒IgM抗体的几种方法中，SPA吸附抗IgM试验重复性差，有一定的局限性;包被抗原纯度要求高，而纯化病毒抗原技术复杂；抗体捕捉法方法敏感，使用范围广，出现假阳性较低。因此，检测病毒IgM抗体多采用抗体捕捉法。
作者单位： 265300 山东栖霞，栖霞市计划生育服务站
(编辑：杜文燕)