水蛭对血瘀并脑栓塞大鼠血浆6-k-PGF1α及TXB2的影响

　　【摘要】  目的  观察水蛭对血瘀大鼠脑血栓后血浆中6-k-PGF1α及TXB2的影响。方法  采用体内血栓形成仪，在寒凝血瘀基础上制作大鼠脑血栓模型，灌胃给予水蛭粉混悬液，通过放射免疫法测定大鼠血浆中6-k-PGF1α及TXB2的含量。结果  造模后8h、24h、48h的大鼠行为障碍评分3.3~4.4，6-k-PGF1α显著降低，TXB2明显升高；水蛭可明显逆转上述改变。结论  水蛭可明显改善血瘀血栓大鼠的行为障碍，抑制其血浆中6-k-PGF1α的减少及TXB2增加。

    【关键词】  水蛭；大鼠；血瘀；脑血栓；6-k-PGF1α；TXB2

     水蛭为环节动物水蛭科蚂蟥（Whitmania pigra Whitman）、水蛭（Hirude nipponica Whitman）或柳叶蚂蟥（W.acranulata Whitman）的干燥全体，具有破血、逐瘀、通经的作用。现代药理学研究表明，水蛭含水蛭素、肝素、抗血栓素等物质，水蛭能活血祛瘀,活化纤溶系统,促进已形成血栓溶解［1］，改善脑缺氧状况,降低血液黏稠度及血脂水平,抑制体内外形成血栓［2］,故临床常与其他药配伍治疗脑血栓。本研究观察了水蛭对血瘀并脑血栓大鼠血浆中6-k-PGF1α及TXB2的影响，旨在为了进一步探讨水蛭的作用机理。

    1  材料与方法

    1.1  实验材料

    1.1.1  动物  Wistar大鼠，山东大学医学院实验动物中心提供，SPF级动物［许可证号SCXK（鲁）20020004］实验动物质量合格证№：0000111）。

    1.1.2  药物与试剂  水蛭粉，过100目筛，呈棕黄色至棕褐色，为本院实验室自制。血浆6-k-PGF1α、TXB2放免试剂盒由北京东亚免疫技术研究所提供。

    1.1.3  仪器  γ-放免计数器（西安凯普机电有限公司）；DDL-5型冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；电子天平R2000D（日本产）；BT87-3型体内血栓形成仪（包头医学院心血管病研究室研制）。

    1.2  方法  取12月龄大鼠，雌雄各半，体重350g左右，共40只，随机分为4组：对照组，血瘀并脑血栓模型组。水蛭高、低剂量组。水蛭高、低剂量组灌胃水蛭0.81g/kg、2.7g/kg（1ml/100g体重）；对照组和模型组灌胃等容量的生理盐水，连续9天。于第6天除对照组外，其余大鼠均先冰浴并皮下注射肾上腺素复制血瘀模型［3］，第7天10%水合氯醛0.3g/kg麻醉后，仰卧固定，颈部切开皮肤分离一侧颈总动脉、颈外动脉，利用体内血栓形成仪刺激颈总动脉，5mA，4min，待颈总动脉血栓形成，夹闭颈外动脉。轻揉颈动脉血栓，使之脱落、颈动脉再通，血栓随血流经颈内动脉到达大脑中动脉，形成以大脑中动脉阻断为主的局灶性脑栓塞。观察动物行为障碍的程度判定栓塞模型成功，评分标准参考Bederson等［4］的方法，分数越高，动物的行为障碍越严重。观察测定脑栓塞后8h、24h、48h时的行为学指标，并在每个时间点颈静脉取血EDTA-消炎痛抗凝，4℃ 3500rpm离心15min，分离血浆，按说明书测定6-k-PGF1α及TXB2。

    2  结果

    见表1~3。血瘀大鼠脑栓塞后8h、24h、48h的行为学指标评分3.3~4.4分，6-k-PGF1α显著降低，TXB2明显升高；与血瘀+脑栓塞组比较，0.81g/kg剂量水蛭使大鼠脑血栓后行为评分减少，6-k-PGF1α显著增高，TXB2明显降低；0.27g/kg水蛭在48h行为评分显著减少，脑血栓24h、48h后6-k-PGF1α显著增高，TXB2明显降低。

    2.1  水蛭对血瘀大鼠脑血栓后不同时间的行为指标评分的影响  见表1。表1  各组血瘀大鼠脑血栓后不同时间的行为指标评分注：与血瘀+脑栓塞组比较，*P<0.05；**P<0.01

    2.2  水蛭对血瘀大鼠脑血栓后不同时间血浆6-k-PGF1α的影响  见表2。表2  各组血瘀大鼠脑血栓后不同时间血浆6-k-PGF1α水平注：与血瘀+脑栓塞组比较，*P<0.05；**P<0.01

    2.3  水蛭对血瘀大鼠脑血栓后不同时间的血浆TXB2的影响  见表3。 表3  各组血瘀大鼠脑血栓后不同时间的血浆TXB2影响 注：与血瘀+脑栓塞组比较，*P<0.05，**P<0.01

    3  讨论

    祖国医学认为中风的基本病机为血瘀，临床上脑栓塞多发生在血瘀基础上。本实验在血瘀证大鼠的基础上，先刺激形成体内颈动脉血栓，再使血栓脱落形成以大脑中动脉栓塞为主的局灶性脑缺血，并以行为障碍评分为指标，判定形成以大脑中动脉栓塞为主的局灶性脑缺血动物模型。既易于操作，又符合脑栓塞的发病机制。

    血栓烷A2（thromboxaneA2,TXA2）与前列环素（prostaglandinI2,PGI2）的比值对于维持血小板和血管的正常功能、防止血栓形成有重要作用,急性脑梗死的发生与其失衡有关。TXA2和PGI2在体内不稳定,国内外均以测定其稳定代谢产物血栓素B2（thromboxaneB2,TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-prostaglandinF1α,6-k-PGF1α）作为判断其浓度的指标。6-k-PGF1α是防止缺血性疾病发病的保护因素,而TXB2的增高则是促使其发病的高危因素［5，6］　

    实验结果表明，水蛭粉混悬液能明显改善血瘀并脑栓塞大鼠的行为功能障碍，抑制TXB2、6-k-PGF1α的含量变化，表明水蛭治疗脑血栓的作用与TXB2、6-k-PGF1α含量相关。

    【参考文献】

    1  高慧琴,郭小平.水蛭在心脏血管疾病中的应用近况.上海中医药杂志,1993,8：75.

    2  王达平.水蛭虫粉对缺血性中风患者血液流变性及血脂水平的影响.中国中西医结合杂志,1995,15（3）：150-152.

    3  李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991，146.

    4  Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke,1986,17:472-476.

    5  张苓,孙玉华,李淑芳.丹奥治疗急性脑梗死49例临床观察.中国冶金工业医学杂志,2003,20（3）:184-185.

    6  聂志余,郑悦,张仲慧,等.脑梗死急性期血小板超微结构的变化及意义.临床神经病学杂志,2001,14（2）:71.

     作者单位： 1 250013 山东济南，山东省胸科医院

    2 250014 山东济南，山东省中医药研究院

　　（编辑：江  宇）