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【摘要】 目的 通过建立经胸廓内动脉置泵治疗犬急性心肌缺血的动物模型，观察介入组和对照组TXB2、6-酮-PGF1α的变化。方法 选择健康杂种犬60条，随机分为介入组和对照组，每组30条。犬在静脉麻醉下开胸，结扎左冠状动脉前降支，建立急性心肌缺血动物模型。介入组分离胸廓内动脉后远端结扎，在近端置管，外接输液加压泵。介入组通过胸廓内动脉加压滴注硝酸甘油，对照组通过外周静脉滴注硝酸甘油。两组实验犬在冠脉结扎前、冠脉结扎后30 min、静脉或泵内滴注硝酸甘油2 h以及6 h后股静脉采血测定TXB2、6-酮-PGF1α。结果 冠脉结扎后对照组和介入组TXB2随着时间的延长明显升高，在冠脉结扎后6 h最高（P<0.001）。对照组的TXB2升高在冠脉结扎后6 h比介入组更明显(P<0.05)。冠脉结扎后对照组的6-酮-PGF1α明显下降，而介入组无明显变化。二组比较，差异有统计学意义。结论 经胸廓内动脉置泵滴注硝酸甘油对心肌缺血后血小板激活、血栓形成有一定遏制作用，对TXA2和PGI2的变化和失衡有明显的抑制作用。
【关键词】 胸廓内动脉 介入治疗 急性心肌缺血 血栓素B2 6-酮-前列腺素F1α
Study on TXB2,6-keto-PGF1α in dog acute myocardial ischemia with thoracic artery pump
WANG Cao-feng,WU Shen,SHENG Jing,et al.Shanghai Ninth People’s Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200011,China
［Abstract］ Objective On the basis of acute coronary artery occlusion,we established the animal model of internal thoracic artery and placed a drug pump.To observe the changes of TXB2，6-keto-PGF1α in model group and control group.Methods 60 healthy cross-breed dogs were randomly divided into model group and control group,30 dogs in each group.Opened the chest under intravenous anesthesia，ligated the left anterior descending coronary artery,established the animal model of acute myocardial ischemia.Detached and ligated internal thoracic artery in the model group,then intubated at the proximal artery.Nitroglycerin was infused through internal thoracic artery in model group.So did through extra- vein in control group.TXB2，6-keto-PGF1αwere measured before anterior coronary artery deligation,after coronary artery deligation 30 minutes,120 minutes and 360 minutes.Results The levels of TXB2 elevated after coronary artery deligation.There was significant difference between model group and control group in 360 minutes after coronary artery deligation (P<0.05).The levels of 6-keto-PGF1α were decreased significantly in control group,while no change in model group.There was significant difference between two groups.Conclusion The intervene treatment through internal thoracic artery limits platelet activation and thrombosis.
［Key words］ internal thoracic artery；interventional therapy；acute myocardial ischemia ；TXB2;6-keto-PGF1α
目前，急性冠状动脉疾病的治疗可通过溶栓、冠脉成形术、冠脉搭桥术、冠脉斑块切除术、冠脉内支架、心肌激光打孔等各种方法来改善急性心肌缺血。解剖上冠脉与心外血管有丰富的吻合支，可以来自胸廓内动脉、支气管动脉、心包膈动脉等。心外侧支循环由心包网建立，通过升主动脉、肺动脉壁、心房壁动脉网与冠脉侧支相连。胸廓内动脉发自锁骨下动脉第一段的下壁，在第一肋附近，从胸廓内动脉发出心包膈动脉，与膈神经伴行经肺根前方，在心包与纵隔胸膜之间下行至横膈，沿途发出分支至心包和胸膜。当急性冠脉闭塞时，原有的侧支循环增加，潜在的侧支循环开放，使心肌供血增加，心包膈动脉血流明显增加，有利于心肌缺血症状的改善。既往，有关胸廓内动脉用于冠脉搭桥术的报道很多［1～3］。但是，通过结扎胸廓内动脉使冠脉侧支压力增加，同时局部置泵应用扩血管药物来改善急性心肌缺血的方法国内外未见报道。本实验从心外侧支循环解剖学角度出发，通过结扎胸廓内动脉远端，同时向近心端置入加压泵来观察冠脉闭塞致心肌缺血时TXB2、6-酮-PGF1α变化，为急性心肌缺血的治疗探索新途径。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 主要材料、试剂 TXB2、6-酮-PGF1α试剂盒（由北京东亚免疫技术研究所提供）。
1.1.2 主要仪器设备 超净工作台， HITACHI 20 PR-520自动高速离心机，微量移液枪，DG 3022A酶联免疫检测仪，721分光光度计，γ-放免检测仪。Arrow 深静脉留置管，气管镜，电热恒温水浴箱，CYAM-32麻醉呼吸机,Medex输液加压泵。
1.2 方法
1.2.1 对象 健康杂种犬60条，体重9～17 kg，雌雄不限，随机分为两组。对照组30条，雌17条，雄13条，体重（11.00±2.05 ）kg；介入组30条，雌14条，雄16条，体重（12.80±2.44）kg。由上海交通大学医学院动物实验中心提供。
1.2.2 实验方法 （1）急性冠脉闭塞模型的建立：实验犬在2%氯胺酮（5 mg/kg）诱导麻醉下，用5%戊巴比妥钠（20 mg/kg）静脉麻醉。经口气管插管，连接麻醉呼吸机，进行正压辅助呼吸。于胸骨左缘第四肋间开胸，切开心包，结扎冠脉前静脉注射利多卡因8 mg/kg。结扎左冠状动脉前降支中段，造成急性心肌缺血。在结扎后1～3 min，预定缺血区外膜及心肌颜色变暗，造成急性冠脉闭塞的动物模型。（2）建立结扎胸廓内动脉经胸廓内动脉置入药物泵的动物模型：对照组犬，在急性冠脉闭塞动物模型建立后，外周静脉滴注硝酸甘油，剂量为100 μg/min，连续维持6 h。介入组犬，在急性冠脉闭塞的动物模型建立后，于右胸骨旁第四、五肋作切口，寻找及分离胸廓内动脉。结扎胸廓内动脉的远端，向近心端插入Arrow静脉留置管3～4 cm，外接Medex输液加压泵，经胸廓内动脉内滴注硝酸甘油，剂量为100 μg/min，连续维持6 h。(3)TXB2、6-酮-PGF1α的测定方法:两组实验犬在冠脉结扎前、冠脉结扎后30 min、静脉或泵内滴注硝酸甘油2 h以及6 h后股静脉采血测定TXB2、6-酮-PGF1α。取一次性5 ml空针吸取消炎痛-EDTA·Na2 液约0.1 ml，快速静脉穿刺采血5 ml，即刻在空针内颠倒混匀，注入试管内，40 g离心(3 500 r/min)15 min，分离血浆，样本置-20 ℃冰箱保存。待测TXB2用平衡法，6-酮-PGF1α用非平衡法。
1.2.3 统计学处理 各项指标测值以均数±标准差（x±s）表示。采用Statpal及NOSA软件包进行数据统计，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
对照组在冠脉结扎前、冠脉结扎后30 min、静脉滴注硝酸甘油2 h以及6 h后静脉采血测定TXB2、6-酮-PGF1α。介入组在冠脉结扎前、冠脉结扎后泵置入30 min、泵内滴注硝酸甘油2 h以及6 h后静脉采血测定TXB2、6-酮-PGF1α。冠脉结扎后对照组和介入组TXB2 随着时间的延长明显升高，在冠脉结扎后6 h最高（P<0.001）。对照组的TXB2升高在冠脉结扎后6 h比介入组更明显(P<0.05)。冠脉结扎后对照组的PGI2明显下降，而介入组无明显变化。二组比较，差异有显著统计学意义。结果见表1～3，图1～2。表1 经胸廓内动脉介入治疗急性心肌缺血时对TXB2的影响 表2 经胸廓内动脉介入治疗急性心肌缺血时对6-酮-PGF1α的影响 表3 经胸廓内动脉介入治疗急性心肌缺血时TXB2/6-酮-PGF1α比值注：组间t检验，aP＜0.05,bP＜0.01;组内t检验，cP＜0.05
3 讨论
TXA2是血小板表面激活后产生的花生四烯酸经环氧化酶作用后的产物，由血小板微粒体合成并释放，其稳定形式是TXB2，能强烈地收缩血管和促进血小板凝集。PGI2 是花生四烯酸经环氧化酶代谢后生成的另一产物，由血管壁内皮细胞合成和释放，其作用与TXA2相反，具有舒张血管，抑制血小板活化、聚集的作用。TXA2 和PGI2的性质不稳定，在水溶液中很快降解成为TXB2和6-酮-PGF1α。TXA2(TXB2)与PGI2(6-酮-PGF1α)形成一对生物活性作用相反，但又互相制约，是维持内环境稳定的重要物质［4，5］。当TXA2生成增多，PGI2生成减少，即TXA2/PGI2比值升高时可导致冠脉痉挛和血栓形成［6］。测定其稳定的代谢产物TXB2和6-酮-PGF1α能较好地反映TXA2和PGI2的比例关系。在正常生理状态下血浆或组织中TXA2 和PGI2失调是造成血小板聚集，血管痉挛收缩或血栓形成的原因之一［7］。
通过本次实验研究发现,经胸廓内动脉介入治疗犬急性心肌缺血较传统的外周静脉治疗有如下特点：（1）心肌缺血动物模型成功建立后，由于机体缺血、缺氧，介入组和对照组TXB2均明显升高，但对照组升高更明显，冠脉结扎6 h后两组差异有统计学意义（P<0.05）。（2） 冠脉结扎后对照组的6-酮-PGF1α明显下降，而介入组无明显变化。二组比较，差异有统计学意义。（3）两组TXB2/6-酮-PGF1α比值在冠脉结扎30 min至6 h后均差异显著，对照组明显高于介入组。说明两组犬在冠脉结扎初期均有血小板的过度激活，TXA2释放增多。对照组较介入组血浆TXB2升高幅度更大，介入组6-酮-PGF1α变化不大，而对照组显著降低。说明对照组血小板激活更显著，存在极强的血小板激活因素，以至造成TXB2生成过多，PGI2代偿不足。说明经胸廓内动脉置泵滴注硝酸甘油对心肌缺血后血小板激活、血栓形成有一定遏制作用，对TXA2和PGI2的变化和失衡有明显的抑制作用。介入组TXB2和6-酮-PGF1α的变化均明显减弱，提示维持血管扩张较传统外周静脉给药途径更强，对改善心肌缺血有一定作用。
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作者单位：200011 上海，上海交通大学医学院附属第九人民医院