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【摘要】 目的 探讨汉族、东乡族原发性高血压病(EH)患者的血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1R)基因多态性比较。方法 应用聚和酶链反应(PCR)方法检测汉族健康131例、东乡族健康102例、汉族EH 198例、东乡族EH 115例的AT1RA/C、ACEI/D基因多态性。结果 ACE基因II型在汉族EH组明显高于东乡族EH组，差异有显著性(P=0.011)，ID基因型在东乡族EH组明显高于汉族EH组，差异有显著性(P=0.003);AT1R基因AC型汉族EH组明显高于东乡族EH组，差异有显著性(P=0.046);AA型在东乡族EH组明显高于汉族EH组，差异有显著性(P=0.037)。结论 AT1R基因AA型和ACE基因ID型与东乡族EH有关;ACE基因II型和AT1R基因AC型与汉族EH有关，C和D等位基因与汉族和东乡族EH无关。
【关键词】 东乡族和汉族;原发性高血压;ACE和AT1型受体基因;基因多态性;聚和酶链反应
Objective To investigate the relationship between polymorphism of angiotensin-converting enzyme(ACE) gene and angiotensin II type 1 receptor gene in essential hypertension in Gansu different nations.Methods ACE and AT1R genotyping with polymerae chain reaction(PCR)was performed in 131 normotenive controls of Han people，102 normotenive controls of Dongxiang people，198 Han people hypertensive patients and 115 Dongxiang people hypertensive patients.Results The AA genotype of AT1 receptor or the ID genotype of ACE was significantly more frequent in hypertensions in Dongxiang people than in Han people. AC genotype of AT1 receptor or the II genotype of ACE was significantly more frequent in hypertensions in Han people than in Dongxiang people.Conclusion The association was found between AA genotype of the AT1 receptor gene or the ID genotype of the ACE gene and essential hypertension in Gansu Dongxiang people, the AC genotype of the ATI receptor gene or the II genotype of the ACE gene had significance on the essential hypertension in Gansu Han people,but no association was found between D genotype of ACE gene or C genotype of AT1 receptor gene and essential hypertentions in the Dongxiang or Han study population.
[Key words] Dongxiang and Han nation;essential hypertension;ACE and AT1R gene;genetic polymorphism;polymerae chain reaction
我国最新调查显示我国现有高血压患者约1.6亿人，高血压患病率达18.8%,而高血压的知晓率不足45%，服用药物治疗不超过30%，血压控制率不足10%，高血压病已成为心血管系统的常见病、多发病，原发性高血压病(Essential hypertension,EH)有20%～40%是遗传因素所致，ACE(血管紧张素转换酶，Angiotensin-Converting Enzyme)和AT1R(Angiotensin Ⅱtype 1 receptor，AT1R)基因作为高血压的敏感基因，在高血压的发病中起重要作用，有关ACE和AT1R与原发性高血压的报道较多，甘肃东乡族作为国内外独有的少数民族，有关东乡族ACE、AT1R基因多态性与高血压发病关系的研究尚未见报道。
1 资料与方法
1.1 研究对象
东乡族原发性高血压组115例，男73例，女42例;平均年龄(52.16±14.70)岁。病例来自我省东乡县东乡族。汉族原发性高血压组198例，男125例，女73例，平均年龄(50.08±13.93)岁，病例来自我院体检中心。根据《2003 WHO/ISH高血压治疗指南》诊断标准，两组原发性高血压均排除了其他原因引起的继发性高血压，无冠心病、糖尿病等疾病。对照组分别为东乡族和汉族健康人。
1.2 观察指标
根据《2003 WHO/ISH冠心病治疗指南》，血脂异常的诊断标准：血清甘油三酯(TG)>1.70mmol/L，总胆固醇(TC)>5.72 mmol/L，高密度脂蛋白(HDL)﹤1.04 mmol/L，低密度脂蛋白(LDL)>3.64 mmol/L。
1.3 试剂与仪器
1.3.1 主要仪器
可变速-可逆转匀浆仪(Glas-Col, Terre Haute, USA);低温台式离心机;UV7501紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司);PCR仪(Bio-Rad iCycler 170-870s. Bio-Rad Laboratories,Inc., USA);电泳仪:(1)JY-ECP 3000，(2) JY-600(北京市君意机电技术公司);凝胶成像仪(UVP Bioimaging system, UVP, Inc., UK);全自动生化仪(7170S.Automatic Asalyzer,日本)。
1.3.2 主要试剂
饱和酚(pH>7.8)、氯仿(天津市天新精细化工开发中心); 异丙醇、无水乙醇, 十二烷基磺酸钠(SDS),溴化乙啶 (均为分析纯)，RNA酶、蛋白酶K (Merck KgaA, Germany)、Taq DNA polymerase(北京鼎国生物技术发展中心)、10mMdNTP mixture、常熔点琼脂糖(北京拜尔迪生物公司)。
1.4 方法
(1)血液生化指标的测定应用我院的全自动生化仪。(2)用酚-氯仿法提取基因组DNA(遗传基因)。(3)ACE基因ID多态性扩增法[1] ，PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶(EB)染色，经凝胶成像系统判断基因型，结果如图1。(4)AT1基因A1166C多态性扩增法[2] 。PCR扩增产物用117% 琼脂糖凝胶电泳， EB 染色，经凝胶成像系统判断基因型，结果如图2。 490bp为II型纯合子，190bp为DD型纯合子，同时有490bp和190bp的为ID型杂合子 图1 ACE基因酶切产物ID多态性 255bp反映等位基因A片段，231bp反映等位基因C片段，1 、4条带为AC基因型，2、5条带为AA型 ，3条带为CC型 图2 AT1R基因酶切产物A1166C多态性
1.5 统计学分析
应用SPSS 11.0统计软件，所有计量资料以均数±标准差表示，计数资料采用χ2检验，计量资料用t检验，P<0.05差异有显著性。
2 结果
2.1 原发性高血压组两民族间生化指标比较
汉族原发性高血压病组的总胆固醇和低密度脂蛋白显著高于东乡族原发性高血压病组(P<0.01)，结果见表1。表1 两民族高血压患者生化指标比较
2.2 各基因型在不同民族中的分布
ACE基因多态性有II、 ID、 DD三个基因型，I和D为等位基因。汉族和东乡族各基因型和等位基因之间分布频率比较差异有显著性(P<0.05)。AT1R基因多态性有AA、AC、CC三个基因型，A和C为等位基因。汉族和东乡族两民族的各基因型之间、等位基因之间频率比较差异无显著性(P>0.05),结果见表2。表2 各基因型在东乡与汉族中的分布频率比较
2.3 各基因型在高血压病患者中的分布
在ACE基因多态性中，基因型 II在汉族EH患者中的分布频率显著高于东乡族，两者差异有显著性(P<0.05); ID基因型在东乡族EH患者中的分布显著高于汉族，两者差异有显著性(P<0.05);DD纯合子在东乡族和汉族EH中的分布频率差异无显著性(>0.05)。AT1基因AA型在东乡族明显高于汉族，两者差异有显著性(P<0.05);AC基因型在汉族EH组中高于东乡族EH组，差异有显著性(P<0.05);CC纯合子在东乡族、汉族EH中的分布频率差异无显著性(P>0.05)。结果见表3。表3 各基因型在不同民族高血压患者中的分布频率
3 讨论
RAS系统在血压调节中起重要作用，ACE是 RAS 系统中的关键酶之一，Ang II大多数生物作用是通过AT1R介导的，目前关于ACE、AT1R基因多态性与高血压发病的关系国内外研究结论不一[3] ，特别是民族差异性。
ACE基因多态性在不同种族正常人分布情况， Barley等[4]研究发现欧洲白种人D等位基因频率高于I等位基因频率，而日本、非洲和美洲人D等位基因频率较低。笔者研究发现汉族人群I等位基因频率稍高于D等位基因频率，而东乡族I和D两个等位基因频率之间无差别。D等位基因频率在东乡族为50%，高于我国少数民族藏族 (36.6%)[5]、蒙古族(46.6%)[6]、壮族、维吾尔族(37.5%)[7]，低于哈萨克族(66%)[8]。东乡族与蒙古族相近，汉族与日本人相近，由此可推断 ACE基因I/D多态性与民族有关。
ACE基因I/D多态性在EH患者中分布，本研究显示：II基因型与汉族EH的发病有关;ID基因型与东乡族EH患者的发病有关;DD基因型与汉族、东乡族EH均无关。Grzegorz Dzida等[9]报道在波兰白人ACE基因多态性研究中，DD基因型在EH患者中频率为15%，结论认为ACE基因DD型与EH无关，这与笔者的结论相似。虽然本研究中DD基因型没有增加EH的易患性，但研究已经证实DD型比II基因型ACE血浆浓度和活性高，其可导致血液循环和器官组织内AngII升高和缓激肽降解增加，进而促进 EH的发生和发展。
AT1R基因研究发现，东乡族、汉族EH患者的A及C等位基因与高血压无关，EH患者与健康人之间A与C等位基因无关。Ono等[10]对1492名EH病人，2426名健康人群进行调查，结论认为A和C等位基因与收缩压无关;EH病人与健康人之间C等位基因无差异性，与本研究结果相似。本研究显示东乡族C等位基因频率为7.2%，高于藏族6.1%，彝族3.5%，非洲人2.1%[11];低于西北汉族8.4%，日本人10.8%，波兰人20%[9]，意大利人34.6%和澳大利亚人28.6%[11]，东乡族与藏族相近。说明AT1R等位基因与民族有关。
本研究提示AT1R基因多态性AC型与汉族EH发生有关，AA型与东乡族EH发病有关。我国学者Liu等[11]研究发现藏族舒张压高的男性人群AA基因型频率为96.3%，正常人AA基因型频率为87.8%，前者明显高，与本研究结果相一致。说明EH患者的AT1R基因多态性与民族有关。
通过 AngⅡ1型受体和ACE基因多态性检验，了解高血压病人个体情况，为高血压病人基因和药物的个体化治疗提供一定的理论依据，同时为临床合理选择药物提供帮助。
【参考文献】
1 Michel E,Safar,Malika Lajemi,et al.Angiotensin-Converting Enzyme D/I Gene Polymorphism and Age-Related Changes in Pulse Pressure in Subjects with Hypertension.American Heart Association,2004,29 (1):24-78.
2 Sugimoto K,Katsuya T,Ohkubo T,et al.Association between Angiotensin II Type 1 Receptor Gene Polymorphism and Essential Hypertension:the Ohasama Study.Hypertens Res,2004,27(8):551-556.
3 车锡明,王涟,韩雪莲.血管紧张素系统基因多态性与原发性高血压的相关研究.中华医学遗传学杂志，2001,18(4):292-295.
4 Barley J,Blackwood A,Miller M,et al.Angiotensin converting enzyme gene I/D polymorphism,blood pressure and the rennin-angiotensin system in Caucasian and Afro-Caribbean peoples.J Hum Hypertens,1996,10(1):31-35.
5 Gesang L,Liu G,Cen W,et al.Angiotensin converting enzyme gene polymorphism and its association with essential hypertension in a Tibetan population.Hypertensions Res,2002,25(3):481-485.
6 刘丽娟，佟伟军，张永红，等.蒙古族ACE基因多态性与高血压病关系的研究.中国公共卫生,2003,19(4):392-393.
7 关亚群,张源明,夏艳萍,等.新疆维吾尔族原发性高血压患者血管紧张换酶基因的I/D多态性.西安交通大学学报(医学版),2003, 24(3):232-233.
8 王笑峰,汪师贞,林仁勇，等.新疆哈萨克族隔离群血管紧张素转换酶基因I/D多态性与高血压病的关系.中华医学遗传学杂志,2003,20(3):253-255.
9 Grzegorz Dzida,Jacek Sobstyl,Andrzej Puniak，et al. Polymorphisms of angiotensin converting enzyme and angiotensin II receptor type 1 genes in essential hypertension in a Polish population.Clinical Research,Med Sci Monit,2001,7(6):1236-1241.
10 Ono K,Mannami T,Baba S,et al. Lack of association between angiotensin II type 1 receptor gene polymorphism and hypertension in Japanese. Hypertens Res,2003,26(2):131-134.
11 Liu Y, Zhoma C,Shan GL,et al.1166C Polymorphism of the Angiotensin II Type 1 Receptor Gene and Essential Hypertension in Han，Tibetan and Yi Populations.Hypertens Res,2002,25(2):515-521.