血液透析对尿毒症患者外周血淋巴细胞亚群的影响

【摘要】  目的探讨血液透析对尿毒症患者外周血淋巴细胞亚群数量的影响及其可能的机制。方法采用流式细胞术检测53例尿毒症患者和23例正常体检者(对照组)的外周血淋巴细胞亚群的百分数，并对其中的26例维持性血透患者单次血液透析前后外周血淋巴细胞亚群的百分数进行检测。结果尿毒症患者外周血CD3+CD4+细胞以及CD4/CD8比值均高于正常对照组(P<0.05)，而CD3-CD19+细胞数量明显低于正常对照组(P<0.05)，以维持性血透患者的改变更为明显;血透患者透析后外周血淋巴细胞亚群除CD3+细胞外，均较透析前有明显改变，表现为CD3+CD4+细胞数量以及CD4/CD8比值的升高，CD3+CD8+、CD3-CD19+和NK细胞数量的减少(P<0.05)。结论尿毒症患者细胞免疫功能紊乱，T细胞亚群失衡;血液透析对尿毒症患者的外周血淋巴细胞亚群存在较大影响，血液透析并不能完全改善尿毒症患者的细胞免疫功能。

【关键词】  尿毒症;血液透析;淋巴细胞亚群;流式细胞术

　　ObjectiveTo investigate the effect of hemodialysis on changes of lymphocyte subsets in patients with uremia and its mechanism.MethodsThe percentage of lymphocyte subsets from 53 patients with uremia and 23 normal controls were recorded.ResultsCompared with normal controls, percentage of CD4-positive lymphocytes and the ratio of CD4-positive and CD8-positive lymphocytes significantly elevated (P<0.05), while percentage of CD19-positive lymphocytes were significantly reduced(P<0.05), especially in patients with maintenance hemodialysis;the percentage of CD4-positive lymphocytes and the ratio of CD4-positive and CD8-positive lymphocytes were significantly elevated while CD8-positive, CD19-positive and NK were reduced(P<0.05 all) after a single HD session.ConclusionThe cellular immune function was abnormal and T cell was imbalanced in patients with uremia;hemodialysis has a great impact on lymphocyte subsets in periphral and can't improve the cellular immune function completely.

　　[Key words]uremia, hemodialysis, lymphocyte subsets, flowcytometer

　　免疫功能紊乱是尿毒症患者易并发感染、肿瘤等疾病的主要原因，免疫病理损伤所致的肾脏损害是其演变为终末期肾功能衰竭的重要因素之一，国内外众多学者对尿毒症患者的免疫状况进行了研究和探讨，但所得的结论差异较大。本文通过检测53例尿毒症患者和26例维持性血透患者单次透析前后的外周血淋巴细胞亚群的数量，探讨尿毒症患者细胞免疫功能的改变和血液透析对维持性血透患者外周血淋巴细胞亚群数量的影响及其可能的机制。

　　1资料与方法

　　1.1研究对象收集2011年3—12月本院就诊的尿毒症患者53例，其中男27例，女26例;年龄26~77岁。将其分为尿毒症未透析组(Non-hemodialysis，NHD)27例和尿毒症血液透析组(Hemodialysis，HD)26例，HD组均为维持性血透患者透析治疗2~5年，每周透析3次，每次为4~5h。同时选取23例健康体检者，其年龄、性别与试验组相似，差异无显著性。

　　1.2试剂与仪器

　　1.2.1试剂双色淋巴细胞亚群分析检测试剂盒(抗体组成为CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD19、CD3/CD16+56、IgG1/IgG2a、CD45/CD14，均为FITC/PE双色标记)购自美国Becton-Dickinson(BD)公司，溶血素和荧光微球购自Beckman Coulter 公司。

　　1.2.2仪器Beckman Coulter Epics XL流式细胞分析仪。

　　1.3方法所有患者与正常体检者于清晨空腹静脉采血2ml(肝素抗凝)，充分颠倒混匀，其中，NHD组在首次透析前空腹静脉采血，HD组于透析后再次采集静脉血2ml(肝素抗凝)。根据试剂盒说明书，将不同组成的荧光抗体与抗凝血在室温下避光孵育20min，加入溶血素，充分混匀后置37℃避光孵育10min，混匀待测。

　　1.4统计学处理实验数据以均数±标准差(x±s)表示，用SPSS16.0统计学软件对实验数据进行方差分析，HD组透析前后的实验数据采用配对t检验，P<0.05为差异有显著性。

　　2结果

　　2.1对照组、NHD组和HD组外周血淋巴细胞亚群结果与对照组相比，尿毒症患者CD3+细胞百分率的变化差异无显著性，但有上升趋势，CD3+CD4+细胞百分率以及CD4/CD8比值显著增高(P<0.05)，以HD患者的升高更为明显;而CD3-CD19+细胞百分率明显减少(P<0.05)，CD3+CD8+细胞和NK细胞百分率差异无显著性(P>0.05)，结果见表1。

　　2.2HD患者单次血液透析前、后外周血淋巴细胞亚群结果经统计，HD患者透析后与透析前相比，CD3+CD4+细胞、CD3-CD19+细胞百分数、CD4/CD8比值明显升高(P<0.05)，而CD3+CD8+和NK细胞百分率明显下降(P值均<0.05)，结果见表2。表1正常对照组与尿毒症患者外周血淋巴细胞亚群结果比较表2尿毒症血透患者透析前、后外周血淋巴细胞亚群结果比较

　　3讨论

　　尿毒症患者常有多器官、多系统的病理损伤，免疫病理损伤所致的肾脏损害是其演变为终末期肾功能衰竭的重要因素之一[1];在以往的关于尿毒症患者外周血淋巴细胞亚群数量改变的研究认为，尿毒症患者存在不同程度的细胞免疫功能紊乱，至于血液透析能否改善这一状态的报道却结论不一。有研究认为[2]，尿毒症患者外周血T淋巴细胞亚群的变化较正常对照差异无显著性，CD4+细胞亚群中Th2细胞占优势，Th1/Th2细胞比值显著降低，而NK细胞百分数明显增高，长期血透并不能改善这一变化;另有研究表明[3]，尿毒症患者淋巴细胞免疫功能下降，血液透析可以明显改善尿毒症患者细胞免疫功能。淋巴细胞是人体内最主要的免疫活性细胞，T淋巴细胞是淋巴细胞中的主要细胞亚群，是细胞免疫和免疫调节的主要执行者，其数量和活性的改变是机体细胞免疫状态的重要指标。CD4+和CD8+细胞作为T淋巴细胞的两个亚群，其平衡是维持和调节体内免疫系统内环境稳定的中心环节，两者的升高与降低，均可使其比例失调，导致机体免疫功能的异常或紊乱，从而发生一系列病理改变。通过检测尿毒症患者外周血淋巴细胞亚群的数量和维持性血透患者单次透析前后外周血淋巴细胞亚群数量的改变，旨在探讨尿毒症患者细胞免疫功能紊乱的可能机制以及血液透析对外周血淋巴细胞亚群数量改变的影响，从而为临床诊治提供参考依据。本研究表明，尿毒症患者无论是维持性血透患者还是非血透患者，CD3+细胞数量的改变较正常对照组比较差异无显著性，但其中的两个亚群：CD3+CD4+细胞数量明显增多(P<0.05)，CD3+CD8+细胞数量的改变虽差异无显著性，但有下降趋势;CD3+CD4+细胞数量的增加导致CD4/CD8比值的升高，发生比例失调。说明尿毒症患者存在T淋巴细胞亚群功能紊乱，该结果证实了此前一些学者的研究[1]。维持性血透患者，透析治疗对外周血淋巴细胞亚群的影响较大，除CD3+细胞数量的改变没差异无显著性外，CD3+CD4+细胞均较透析前明显增加，CD3+CD8+细胞明显减少，CD3+CD4+细胞的增加和CD3+CD8+细胞的减少使得CD4/CD8比值升高;还发现，尿毒症患者细胞免疫功能的紊乱在HD患者中表现得更为突出，CD3+CD4+细胞数量的增加和CD4/CD8比值的改变较NHD患者更为明显，这可能是由于透析液及透析膜刺激机体的结果，此研究结果与文献报道部分相同[4]。而Yoshihiro等[5]的研究认为，维持性血透患者外周血CD4+细胞数量减少和CD8+细胞数量增加，在增加的CD4+细胞中，发生了Th1/Th2平衡的改变，以Th2细胞占优势。本研究结果不同于一些学者的结果可能是由于入选病例的原发病类型、实验方法以及统计学方法的差异造成的。CD19分子是B淋巴细胞的表面标志，与B细胞的活化和信号转导有关;还与炎症反应密切相关，其表达水平的增高，是机体启动免疫系统反应以对抗炎症反应的一种自身保护反应[6]。B淋巴细胞作为体内的抗体产生细胞，在抗原的刺激下产生特异性抗体，介导体液免疫应答。有研究表明[7]，尿毒症患者机体处于微炎症状态，血液透析促进了炎症因子的释放，较透析前浓度明显升高。本研究显示，尿毒症患者外周血B淋巴较正常对照组明显减少(P<0.05)，CD19分子表达水平减低，导致机体对抗炎症反应能力下降，对抗原刺激的反应性减低，无法产生足够量的抗体，这可能是尿毒症患者易并发感染和肿瘤的原因之一。经过血液透析治疗后，B淋巴细胞的数量较透析前明显升高(P<0.05)，CD19分子表达水平上升，机体启动免疫系统反应以对抗炎症因子的释放，同时机体对抗原刺激的反应性得以改善，这也进一步证明了CD19分子与炎症反应相关。自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，它无需抗原刺激，就能非特异性杀伤肿瘤和病毒感染的靶细胞，具有抗感染、抗肿瘤和免疫调节的作用，在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。本研究表明，维持性血透患者经过血液透析治疗后，NK细胞的数量较透析前明显下降(P<0.05)，这可能也是导致HD患者抵抗力低下，易并发各种感染和肿瘤，引起终末期肾功能衰竭的原因之一。尿毒症患者的细胞免疫功能紊乱，一方面可能与尿毒症患者自身体内存在尿毒症毒素以及代谢产物有关;另一方面可能与原发病本身存在某种程度上的细胞免疫功能紊乱有关。本研究表明，尿毒症患者存在细胞免疫功能紊乱，T淋巴细胞中的两个亚群比例明显失调，从而破坏了机体免疫系统内环境的稳定性，这可能是加重肾脏损害的因素之一;血液透析治疗对改变尿毒症患者的细胞免疫状态影响较大;对尿毒症患者以及维持性血透患者定期进行外周血淋巴细胞亚群的检测，有助于了解患者细胞免疫的状况，为探讨病理机制提供一定的参考依据。

【参考文献】
  　　1蔡蓓，王兰兰，冯伟华，等.尿毒症患者T细胞亚群共刺激分子CD28和CD152的表达分析.国外医学·临床生物化学与检验学分册,2005,26(5):261-263.

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　　7吴仁胜，李时琪，叶扬梅.血液透析对慢性肾功能衰竭患者血液中细胞因子的影响.皖南医学院学报,2009,28(3):190-192.