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聚合酶链反应（PCR）这种核酸扩增技术作为一个工具，已经深入到生命科学研究的每一个角落，国内的临床实验室，将PCR技术广泛地用于感染性病原体如HBV、HCV、结核杆菌、性病病原体等的临床检测，但由于缺乏对核酸扩增检验技术完整深入的了解，缺乏相应的质量保证措施，导致部分实验室检验结果有很大的主观性和随意性，假阳性和假阴性较为常见。现就PCR实验室防污染措施浅谈几点体会。
1 PCR实验室严格分区
试剂准备区（1），标本准备区（2），扩增区（3），产物分析区（4），并遵循从1→2→3→4区的单向工作，可在（2）区建立阳性参考品点样专用柜以减少或避免阳性参考品对标本或标本区环境的污染。各区有完善的清洁及消毒措施并定期清洁和消毒。各区物品应严格分开，不能混用。
2 实验过程中严格规范操作，合理更换实验服
特别是在（2）区处理标本时，都应戴一次性手套，并经常更换，以避免标本间的交叉污染。当处理可能具有传染危险性的标本时，最好是戴两副手套，当手套与标本有接触时可弃掉外层手套。所用的加样器吸头必须带滤塞。（2）区内的生物安全柜、超净台、加样器、离心机及其他设备都应在试验后用10%次氯酸钠溶液消毒，然后用纯水或70%酒精洗涤去除残留的次氯酸钠，以防次氯酸钠对金属表面有氧化和腐蚀作用。废液缸内应倒入1/3体积的1mol/L HCl，因为酸性条件下，更有利于核酸的降解，从而减少污染，忌倒入次氯酸钠，因其与标本提取所用到的胍盐产生致癌性气体。
3 加样流程
阴性质控品（标本准备区加样）→ 标本核酸样本（标本准备区加样）→阳性参考品（标本准备区专用区域加样）。严禁在生物安全柜或超净工作台进行强阳性质控品的稀释或阳性定量参考品加样工作。
4 扩增区
扩增区是潜在的产物污染源，如发生产物泄漏，必须及时进行清洁消毒工作，并打开门窗更新室内空气，以减少、消除污染。扩增结束，待仪器冷却后，可立即用一次性手套将扩增后反应管进行密封，再进行产物的集中处理。
5 产物分析区
产物分析区是唯一能打开扩增后反应管的地方，此区为负压状态，空气流向为由外向内，以防止扩增产物气溶胶流出。此区产物液体的处理，应集中倒至1mol/L HCl溶液中，浸泡半小时以上后至远离基因扩增实验室处弃掉。
6 假阴性的原因
假阴性可由操作不当、试剂质量差或过期、仪器设备不准确、标本保存不当等因素引起。故要有严格的质量控制。对病原体有基因变异者，当扩增某一基因片段的引物不能取得结果时，改用扩增另一基因片段的试剂。
总之，PCR作为一种敏感而特异的实验或检验方法，能广泛应用于各生物学领域，但操作复杂，技术不易被熟练掌握，由于敏感度高和操作步骤多而复杂，故常有污染情况发生，即使有极少量的污染也会造成假阳性，稍有差错就会出现假阴性。故笔者认为一定要做好假阳性、假阴性的预防及对策这一环节。
作者单位：336000 江西宜春，宜春市第二人民医院检验科
(编辑：宋 冰)