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【摘要】 目的 通过50例头颈部鳞癌患者血清一氧化氮（NO）浓度的测定，研究一氧化氮在头颈部鳞癌中的表达及其临床意义，探讨一氧化氮在头颈部鳞癌肿瘤免疫方面的作用。方法 采用硝酸还原酶法测定健康人和头颈部鳞癌患者血清NO -3 和NO -2 之和反应体内一氧化氮水平。检测了50例不同临床分期的头颈部鳞癌患者及30例健康体检者。结果 头颈部鳞癌患者血清一氧化氮含量显著高于健康人，前者为（119.23±49.11）μmol/L，后者仅为（68.64±17.36）μmol/L（P<0.001），头颈部鳞癌患者术后2周的血清一氧化氮含量（91.32±33.82）μmol/L，与术前组比较，明显降低（P<0.005），有淋巴结转移组（116.23±27.46）μmol/L显著低于无淋巴结转移组（128.45±23.54）μmol/L（P<0.05）。结论 头颈部鳞癌患者血清一氧化氮含量显著高于健康人，它可能在分子水平参与了头颈部鳞癌的发生、发展。
关键词 一氧化氮 喉肿瘤
The expression and clinical implication of nitric oxide in
serum of patients with head and neck squamous cell carcinoma
Wang Feng，Du Xiaodong，Shu Chang，et al.
The Fourth Affiliated Hospital of Suzhou University，Wuxi214062.
【Abstract】 Objective To study the levels of nitric oxide（NO）in serum of50patients with laryngeal squaˉmous cell carcinoma and its clinical value.Methods The method of nitrifying ferment was used to test the level of NO and total concentration of NO -3 and NO -2 from patients’blood.Results （1）The volume of NO were higher in the laryngeal squamous cell carcinoma patients than that in the healthy person.The former’valume was119.23±49.11μmol/L，but the latter’s was68.64±17.36μmol/L（P<0.001），（2）After operation，the level of NO was lower
.（3）The NO level in the lymph node metastasis group was lower than that in the
non-metastasis group（P<0.05）.Conclusion The volume of NO were higher in the laryngeal squamous cell carcinoma patient than that in the healthy person;in the course of laryngeal squamous carcinoma，the composition and exhaust of NO were enhanced in the body of patients.
Key words nitric oxide laryngeal neoplasms
一氧化氮（nitric oxibe，NO）是一种新型的生物细胞信使分子和效应分子，对肿瘤的增长、转移有一定的作用及影响。目前有关NO与头颈部鳞癌的关系的报道甚为少见，为此，我们采用硝酸还原酶法测定了头颈部鳞癌患者血清NO水平，探讨NO在头颈部鳞癌发病机制中的作用与临床价值，现将研究结果初步报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本实验收集1998年苏州大学附属第四医院和山东大学齐鲁医院头颈部鳞癌患者血清50例。恶性肿瘤中男45例，女5例，54～78岁，平均（57.58±8.79）岁，全为头颈部癌患者，原发于喉声门上区18例，喉声门区17例，喉声门下区3例，跨声门2例;上颌窦2例，鼻咽部2例，下咽部3例，中耳1例，外耳1例，扁桃体1例。根据UICC肿瘤TNM分期标准（1997） ［1］ ，T 1 14例，T 2 10例，T 3 12例，T 4 14例;N 0 28例，N 1 16例，N 2 4例，N 3 2例;49例为M 0 ，1例为M 1 。正常血清对照组30例，男25例，女5例，年龄50～77岁，平均（55.2±6.20）岁，均为健康体检者。
1.2 标本采集与处理 所有病例术前均未经放、化疗，于受检前1周内停服激素及含氮药物。术前1天及术后2周各取空腹静脉血3.0ml。全血以3000r/min离心20min后取血清置于-20℃冰箱保存待测。
1.3 测定方法 采用硝酸还原酶法:即用硝酸还原酶特异地将NO -3 还原为NO -2 ，通过检测血清NO -3 和NO -2 之和反应体内一氧化氮水平 ［2］ ，使用波长540nm比色测定，分别读取测定管和标准管的消光值A，按下式计算:测定管A/标准管A×100=标本NO含量（μmol/L），一氧化氮试剂盒（酶法）由南京建成生工所提供，采用上海分析仪器厂752型分光光度计进行比色法测定。样本均数之间的比较用t检验。
2 结果
2.1 头颈部鳞癌患者与健康对照组血清NO含量比较 见表1。
表1 各组血清NO含量比较 （略）
2.2 头颈部鳞癌患者术前与术后的血清NO水平比较 见表2。
表2 头颈部鳞癌患者术前、术后血清NO含量比较 （略）
2.3 颈淋巴结转移组与非转移组血清NO水平比较 见表3。
表3 颈淋巴结转移组与非转移组血清NO水平比较 （略）
2.4 随访 全部病例随访3年，其中10例失访;死于颈部复发、肝转移、肺转移和死因不明6例，失访2例，总的生存率为80.0%（32/40）。存活32例中血清NO含量（118.72±45.56）μmol/L，死亡8例（含失访2例），血清NO含量（148.27±20.34）μmol/L，两者差异有显著性（t=1.777，P<0.05）。
3 讨论
NO是目前在体内发现的最小、最轻、最简单的生物信使分子，由一氧化氮合酶催化L-Arg和分子氧反应生成。国内外不断有NO与肿瘤方面的研究报道，方法结果各异 ［3，4］ ，但在头颈部鳞癌方面的研究尚少见报道。本研究发现，头颈部鳞癌患者血清NO水平显著高于正常对照，术后2周血清NO水平显著低于术前。说明头颈部鳞癌患者内源性NO合成较正常人为多。提示头颈部鳞癌的发生发展可能与血中NO水平升高有关。
浓度较高的NO可通过抑制细胞DNA复制降低呼吸链 中关键酶的活性，生成具有强氧化性的OH·自由基等途径 ［5］ 而发挥细胞毒作用，对肿瘤细胞的增殖、转移有一定影响。目前人们已从乳腺癌、肝癌肿瘤的腺癌细胞、前列腺癌、妇科肿瘤、恶性胶质瘤及黑色素瘤等恶性肿瘤中检出浓度较高的NO，具有细胞毒作用的NO即为效应分子。
已有研究认为，NO介导的肿瘤细胞生长和转移机制可能包括以下几个方面:（1）直接刺激癌细胞的生长;（2）促进癌细胞转移;（3）促进肿瘤血管生成;（4）促进肿瘤新生血管中微循环的建立;（5）抑制宿主的抗肿瘤反应。但目前，除2、3条较肯定外，其他尚需进一步证明 ［6］ 。
NO好比“双刃刀”，有研究报道，癌的转移与NO浓度呈负相关，这从本文结果中可看出，有远处转移的头颈部鳞癌患者，其血清NO浓度下降。这说明在肿瘤细胞增生和扩散过程中，NO被大量消耗，机体抑制和抗瘤的能力下降。从动态观察结果来看，恶性肿瘤患者治疗过程中，监测血清NO水平的变化，对了解病情的发展和预后具有一定临床价值 ［7］ 。
参考文献
1 舒畅，朱文昭译.国际最新恶性肿瘤的TNM分类标准.北京:台海出版社，2001，17-20.
2 孙恒芳，张旭东，罗源，等.胃癌患者血清和组织一氧化氮水平变化及临床意义.中国肿瘤临床，1998，25（4）:285-286.
3 Lindberg S，Cervin A，Runer T.Nitric oxide（NO）production in the upˉper airways is decreased in chronic sinusitis.Acta Otolaryngol，1997Jan，117（1）:113-117.
4 Moshage H，Kok B，Huizenga JR，et al.Nitrite and nitrate determinations in
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7 杜晓东，栾信庸，舒畅，等.iNOS在喉癌中的表达及临床意义.山东医大基础医学院学报，2001，15（3）:132-136.
作者单位:1 214062无锡苏州大学附属第四医院检验科
2 250012山东大学齐鲁医院