一种更为简单的抗酸菌染色法

　　【摘要】  本文提供了一个更为简单的抗酸菌染色法，100份采自可疑结核病人的痰标本，经用本方法和Ziehl Neelsen染色法进行了比较，检出结核菌阳性标本32例，结果完全相互符合。本简化抗酸菌染色法，步骤简单，不需加热，染色鲜明，不易污染周围环境，可以使工作人员舒适地进行抗酸性细菌的染色，特别有利于多标本的染色检查，有利于提高工作效率。
    
　　【关键词】  抗酸菌染色法;结核菌染色法
    
　　A further simplified acid fast staining method for mycobacteria
     
　　ZHAO Shao-xing，ZHANG Xian-ming，YANG Shun-li，et al.

　　Shanxi Institute of Chinese Traditional Medicine，Tai Yuan030012，China
   
　　【Abstract】 A more simple acid fast staining procedure was described in detail.100sputum specimens colleted from suspected tuberculosis patients were stained and examined by both the simplified acid fast staining method and classic Ziehl-Neelsen staining technique.the results were comparable exactly.This is a simple，more clean and more”cozy”acid fast staining procedure that could be used in any hospital laboratories for detection of mycobacteria，espe-cially in process of numbers of specimens.
   
　　【Key words】 acid fast staining methoed;staining of mycobacterium tuberculosis
    
　　抗酸菌染色是检查结核杆菌等抗酸菌的常用方法，Ziehl-Neelsen染色法 ［1］ 是一个古老和经典的抗酸菌染色法，效果很好，但是操作比较复杂，因此过去几十年中有不少学者企图在Ziehl-Neelsen染色法的基础上改进和简化，也取得了一些进展。Kinyoun氏法 ［2］ 不需加温比较方便，Allen法 ［3］ 改成两步，比较省时。现在我们把Kinyoun氏法和Allen氏法结合起来，略加改进，组成一个更为简便易行的抗酸菌染色法，经过试验对比，效果良好。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 标本选择 可疑结核病患者痰标本100份，采自太原市结核病医院和山西省第二、三监狱的可疑患者。
　　1.2 染色剂的配制
   
　　1.2.1 强化石碳酸复红溶液 称取盐基性复红（Basic fuchsin）4.0g，放入95%乙醇20ml，溶解后加入9%石碳酸水溶液100ml，混合，室温放置一天后即可使用。
   
　　1.2.2 退色复染合剂 称取美蓝（Methylene blue）5.0g，加入95%乙醇160ml，溶解后加入蒸馏水250ml，混匀，边摇边滴、滴加入硫酸90ml，加入硫酸不宜太快，以确保安全。
   
　　1.3 染色程序 用无菌眼科小镊子夹取患者痰黏液一小块，置于一洁净玻片上，取另一洁净玻片覆盖其上并用双片碾制法碾制出两张厚薄均匀的痰液涂片，在酒精灯上微微加温，使之干燥、灭活和固定。在涂片上放上一片约2cm×4cm的洁净滤纸片，在滤纸片上滴加上强化石碳酸复红染液染色15min，不需加温，水洗。沥净水滴，加上退色复染合剂，静放作用3～5min，水洗、凉干，用普通光学显微镜检查。结核杆菌染成红色，背景为浅蓝色。

　　2 结果与讨论
      
　　我们对100例可疑结核病患者的痰标本，同时用Ziehl-Neelsen染色法和我们简化了的抗酸菌染色法进行了对比性的染色观察，结果检出结核杆菌阳性病例32例（32%），阴性68例（68%），互相符合率为100%。对32例Ziehl-Neelsen染色阳性的涂片进行了Gaffky分类，属Gaffky第1类（+，稀少）的有7例，属Gaffky第2类（++，少量）的有10例，属Gaffky第3类（+++，多）的有15例。这说明新染色法对Gaffky三类标本都能同样检出结核杆菌，即使Gaffky第1类含菌量稀少的痰标本也能检出结核杆菌，未有漏检。
   
　　抗酸菌检查，包括结核杆菌检查是各医院检验科的一项日常检验工作，工作相当繁重，原Ziehl-Neelsen染色法染色效果很好，但是操作比较复杂，特别需要在酒精灯上加温染色，不仅操作上是一个负担，而且染色液非常容易外泄，污染周围环境，使工作人员感到相当烦恼。本文介绍的简易抗酸菌染色法，将原来的三部染色法简化为二步法，而且免却了加温的步骤，这就可以使抗酸菌染色轻松愉快地进行，免除了精神上的一些负担，有利于工作效率的提高。据赵风桐等报道 ［4］ :不加温的抗酸菌染色法有染色不太鲜明的缺点，我们也有同样的发现。后来我们把强化盐基性复红的染色时间延长到15min，解决了这个问题，达到了与Ziehl-Neelsen原法同样的鲜明染色效果。
   
　　本抗酸菌染色法，步骤减少，操作舒适，不需加温，染色效果同样良好，可以应用于各医疗单位的结核杆菌等抗酸菌的检查。 

　　【参考文献】
    
　　1 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.第二版.南京:东南大学出版社，1997，441.
   
　　2 Koneman EW（ed）Diagnostic Microbiology，pp353，Philadelphia，Lip-pincott co，1997.
   
　　3 Allen JL.A modified Ziehl-Neelsen stain for mycobacteria.Med Labo-ratory Sciences，1992，49:99.
   
　　4 赵风桐.分枝杆菌抗酸染色法的比较.全国检验医学细菌鉴定和药敏试验学术讨论会论文集，2002，128.
　　* 基金项目:山西省自然科学基金项目（编号:2002118）

　　作者单位:030012山西太原，山西省中医药研究院
   
　　　　　　　030024山西太原，太原市结核病医院