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【摘要】 目的 探讨抗生素药敏谱分型方法对医院感染暴发调查的意义。方法 微量肉汤稀释法（MICs）和琼脂纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验、脉冲场凝胶电泳。结果 菌株的抗生素药敏谱表现为七型。抗生素药敏谱不同的菌株的PFGE表现同一谱型。结论 抗生素药敏谱分型易于操作，简便，快捷，并有较为统一的标准，在指导临床用药中起到了重要作用。在医院感染暴发的调查中，更倾向于用基因分型方法。
【关键词】 医院感染；暴发；抗生素敏感试验
Study on apply of antimicrobial sensitivity pattern method to investigation an outbreak of nosocomial infection
LU Lin，SONG Shi-duo.Tianjin Medical University NO 2 Hospital，Tianjin 300211，China
【Abstract】 Objective The study is discussed the value of apply phenotype-method to investigate an outbreak nosocomial infection. Methods MICs and K-B antimicrobial resistance methods ,PFGE. Results Isolates have seven antimicrobial sensitivity patterns .Apply PFGE on isolate of different antimicrobial sensitivity pattern, find that they are the same clone. Conclusion Antimicrobial sensitivity pattern method is a simple, quick, ease of proformance, have the same standard, can instruct medicine using of clinic. But investigate outbreak of nosocomial infection , prefer to genotyping method.
【Key words】 nosocomial infection;outbreak; antimicrobial sensitivity pattern
医院感染暴发的病死率高［1］。建立快速、敏感的实验室分型技术对传染源的追踪、溯源，最终有效地控制疫情意义重大。传统的表型分型法包括生化分型、抗生素药敏谱分型，方法较简单，可在日常细菌鉴定工作中完成，可为临床流行病学调查提供信息。本研究对28株医院感染暴发的洋葱伯克霍尔德菌的抗生素药敏谱进行分析。探讨抗生素药敏谱分型方法对医院感染暴发调查的意义。
1 材料与方法
1．1 测试菌株 28株菌株，均分离自某院术后24～48h内出现败血症患者的血培养标本，诊断均符合医院血流感染［2］。
1．2 生化鉴定 28株菌株分别用API 20NE条鉴定系统鉴定，补充氧化酶试验。
1．3 药物敏感试验 微量肉汤稀释法（MICs）和琼脂纸片扩散法（K-B法）的头孢他啶（CAZ）、环丙沙星（CIP）、亚胺培南（IPM）、美洛培南（MEM）、米诺环素（MH）、四环素（TC）、复方新诺明（SXT）的药敏纸片和左氧氟沙星（LEV）、头孢吡肟（CPR）、氧氟沙星（OFX）、阿米卡星（AMK）、头孢氨噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SUL）、庆大霉素（Gm）、哌拉西林（PIP）的标准品，购自中国药品生物制品检定所。质控及药敏判断结果标准遵照NCCLS2003版的规定执行［4］。大肠埃希菌ATCC 25922和绿脓杆菌ATCC 27853作为质控菌株。
1．4 脉冲场凝胶电泳 参照BIO-RAD的CHEF基因组DNA凝胶块制备手册［5］和CHEF Mapper XA使用手册［6］及Coenye等［7］的研究，设置限制性内切酶反应和脉冲场凝胶电泳参数。
2 结果
2．1 生化鉴定 氧化酶阳性。经API 20NE条鉴定系统鉴定一致为洋葱伯克霍尔德菌。
2．2 药物敏感实验 洋葱伯克霍尔德血流感染菌株对15种药物的敏感实验表明，对左氧氟沙星、环丙沙星、头孢他啶、哌拉西林、头孢曲松、亚胺培南、美洛培南、复方新诺明、米诺环素均敏感；对阿米卡星、庆大霉素、四环素均耐药，对头孢哌酮舒巴坦钠中介20株，耐药8株；头孢吡肟中介24株，耐药4株；头孢氨噻肟的敏感24株，中介4株。本研究的临床株对头孢哌酮舒巴坦钠、头孢吡肟、头孢氨噻肟的差异使抗生素药敏谱表现为七型。见表1。表1 28株分离菌株中抗生素药敏谱型注：S：敏感，I：中介，R：耐药
2．3 脉冲场凝胶电泳 随机选取抗生素药敏谱不同菌株进行脉冲场凝胶电泳，限制性内切酶反应图谱具有同样的条带数，且相应条带大小相同，依照Tenover等的标准 ，判断为同一克隆。
3 讨论
医院感染暴发对菌株进行同源性分析的传统方法-表型分型法包括:生物学分型、抗生素药敏谱分型。因为细菌分型的前提是流行病学上相关的菌株源于单一亲代的克隆扩增，但细菌易受环境因素影响，常不可预见地改变其性状的表达，源于同一亲代的菌株在表型上可有所不同，而且有一部分菌株不表达表型方法分型所依据的特征，无法对其进行分型，这是表型分型方法的缺点。
抗生素药敏谱分型是利用细菌对某些抗生素或重金属离子耐药性的差异，达到分型的目的。本研究的洋葱伯克霍尔德菌血流感染菌株的药敏表现为：对四环素、阿米卡星、庆大霉素耐药外，对氟喹诺酮、碳氢酶烯类、复方新诺明、米诺环素、头孢曲松、头孢他啶、哌拉西林敏感，对头孢哌酮舒巴坦钠中介20株，耐药8株；头孢吡肟中介24株，耐药4株；头孢氨噻肟的敏感24株，中介4株。本研究的洋葱伯克霍尔德菌血流感染菌株对头孢哌酮舒巴坦钠、头孢吡肟、头孢氨噻肟的差异使其抗生素药敏谱表现为七型。脉冲场凝胶电泳是常用基因分型方法之一，也是医院感染暴发调查的实验室方法中应用最多的。PFGE以其重复性好、分辨力强而被誉为细菌分子学分型技术的“金标准”。随机选取抗生素药敏谱不同菌株进行脉冲场凝胶电泳，判断为同一克隆。抗生素药敏谱的差异可能与菌株感染个体，个体或体外实验影响有关。因为抗生素药敏谱分型，它本身不是细菌的固有特征，这一特征是在抗菌药物压力条件下形成的。在不同的抗生素压力条件下，可形成不同的抗生素药敏谱型。这也反映了它影响因素多的局限性。
抗生素药敏谱分型，具有易于操作，简便，快捷的特点，可在日常细菌鉴定工作中完成，并有较为统一的标准，在指导临床用药中起到了重要作用，可为临床流行病学调查提供信息，但它影响因素多，重复性差，说明问题的深度不够。在医院感染暴发的调查中，要快速鉴定暴发菌株、追踪传染源、了解传播途径，以便采取预防及控制措施，所以更倾向于用基因分型方法。
【参考文献】
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4 BIO-RAD. Section 3 preparation of agarose embedded bacterial DNA. Instruction Manual, CHEF Genomic DNA Plug Kit, Rev E.:5-8.
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7 Tenover FC, Arbeit RD, Goering RV, et al. Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis: criteria for bacterial strain typing. J Clin Microbiol,1995, 33:2233.
作者单位：300211 天津，天津医科大学第二医院感染研究所