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【摘要】 目的 研究乳腺癌Bcl-2和Ki-67蛋白表达及临床意义。方法 应用免疫组化S-P法检测50例随访5年以上的乳腺癌患者标本中Bcl-2和Ki-67的表达情况，分析其临床病理特性以及相关性关系。结果 Bcl-2和Ki-67蛋白表达的阳性率分别为64%（32/50）和60%（30/50）。Bcl-2高表达与乳腺癌组织学分级，腋淋巴结转移、分期呈显著负相关，与生存期呈正相关。Ki-67的高表达与组织学分级、肿瘤的大小，腋淋巴结的转移，复发和转移呈显著正相关（P<0.05）。结论 （1）乳腺癌Bcl-2蛋白表达阳性提示肿瘤分化程度高，淋巴结转移少。（2）Ki-67表达阳性提示肿瘤分化程度低，恶性度高，病期较晚，复发、转移多。两种标志物反映乳腺癌病理参数特性有不同意义。
【关键词】 乳腺癌；Bcl-2；Ki-67；免疫组织化学；病理
The expression of Bcl-2 and Ki-67 in breast carcinoma and its clinicopathological significance
XU Dong-zhe, JIN Zhe-zhu,LI Rui-yong.Department of general surgery, Affiliated Hospital of Yanbian University.Jilin 133000,China
【Abstract】 Objective To study the expression and clinical significance of Bcl-2 and Ki-67 in breast carcinoma.Methods The expression of Bcl-2 and Ki-67 were detected by immunohistochemical S-P methods in tissue samples from 50 cases of breast carcinoma.Results The overall positive rate of Bcl-2 and Ki-67 was 64%（32/50）and 60%（30/50）respectively.The high expression of Bcl-2 showed to be negative correlation with histological grade and axilla lymph node metastasis,and to be positive correlation with survival period.The high expression of Ki-67 was positively related to the tumor size ,axilla lymph node metastasis,histological grade , recurrence and metastasis （P<0.05）. Inverse correlation was found between the expression of Bcl-2 and Ki-67 （P<0.05）.Conclusion （1） The positive expression of Bcl-2 occurs more in well differentiated breast cancer and negative lymph node state. （2） The positive expression of Ki-67 revealed the low differentiation of tumor and with high recurrence and metastasis as well as a later clinical stage. Both Bcl-2 and Ki-67 could act as a marker to evaluate different biological behavior of breast cancer.
【Key words】 breast carcinoma; Bcl-2 ; Ki-67; immunohistochemistry; pathology
Bcl-2是第一个被发现的细胞凋亡抑制基因，在细胞凋亡调控过程中起着关键作用。Ki-67是细胞增殖和合成代谢相关的非组合蛋白，有关对Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中表达的研究提示，对评估乳腺癌特性有意义。但其表达的观点不一，本文检测乳腺癌Bcl-2和Ki-67，探讨其表达与乳腺癌临床病理特性关系。
1 材料与方法
1.1 材料 材料来自我院1992-1997年资料完整的乳腺癌根治标本50例,患者均为女性，年龄23～67岁，平均年龄为47.6岁。其中朝鲜族20例，汉族30例。组织学类型：浸润性导管癌23例，单纯癌11例，其他癌16例。组织学分级：Ⅰ级16例，Ⅱ级19例，Ⅲ级15例，TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期48例，Ⅲ期2例。
1.2 试剂 鼠抗人Bcl-2 单克隆抗体、 鼠抗人Ki-67核抗原单克隆抗体和通用型SP kit 均为美国ZYMED公司产品。
1.3 染色方法 筛选出50例乳腺癌简化根治标本癌组织蜡块，做4μｍ厚的组织切片，脱蜡后放入盛有枸橼酸缓冲液（工作液）的容器中，置微波炉内（95℃，15min）行抗原修复，取出冷却至室温。经PBS冲洗后用通用型SP kit中的正常山羊血清封闭，室温孵育10min，弃血清分别滴加1:50浓度的Bcl-2-抗和Ki-67-抗，置４℃冰箱过夜。PBS冲洗后，滴加通用型SP kit中的生物素标记二抗，室温30min，PBS冲洗后滴加通用型SP kit中的生物标记二抗，室温30min；PBS冲洗后滴加通用型中的辣根酶标记的链霉卵白素，室温30min。PBS冲洗后DAB显色剂显色，自来水冲洗后，苏木素复染，中性树胶固定，封片。对照：以PBS代替一抗作为阴性对照。用已知阳性切片作阳性对照。
1.4 阳性结果的判断 Bcl-2阳性着色组织学特征为以癌细胞胞浆着色为主，胞膜和核膜上呈现棕黄色颗粒， 而Ki-67为细胞核成深棕色。根据阳性细胞在同类细胞中所占的比例判定结果。着色细胞<10%为（-）；10%～25％为（＋）；25％～50％为（＋＋）；>50％为（＋＋＋）。
1.5 统计学分析 采用SPSS11.0统计软件进行χ2检验、Fisher精确检验和相关分析。
2 结果
2．1 Bcl-2、Ki-67蛋白在乳腺癌细胞中表达情况 Bcl-2蛋白位于癌细胞的胞浆、胞膜和核膜，以胞浆为主，总阳性率为64%。Ki-67的阳性标记位于细胞核内，呈棕色颗粒，胞浆阴性。总阳性率为60%。
2．2 Bcl-2、Ki-67蛋白表达与乳腺癌临床病理关系 Bcl-2 、Ki-67的阳性表达与患者的年龄、民族、绝经前后无关，差异无显著性（P>0.05）。肿瘤≤2cm 组Ki-67蛋白表达阳性率为28.6%，明显低于>2cm组Ki-67蛋白表达（72.2%），差异有显著性（P<0.01），呈正相关，但Bcl-2表达与肿瘤大小无关。Bcl-2的表达阳性率Ⅰ级明显高于Ⅱ级和Ⅲ级，差异有显著性（P<0.05）。Ki-67表达与组织学分级呈正相关，Ki-67的表达阳性率Ⅲ级高于Ⅱ级和Ⅰ级，差异有显著性（P<0.05）。而Bcl-2、Ki-67蛋白表达与病理临床分期无关（P>0.05）。 淋巴结转移阴性组Bcl-2的阳性表达率明显高于淋巴结转移阳性组的表达率（P<0.05），其阳性表达与生存期呈正相关。但Bcl-2表达与肿瘤的复发和转移无关。Ki-67的阳性表达与腋淋巴结的转移呈正相关。淋巴结转移阳性的Ki-67的表达率（81.8%）明显高于阴性表达率（42.9%），差异有显著性（P<0.01）。Ki-67的阳性表达与肿瘤的复发和转移密切相关，复发和转移肿瘤中的Ki-67的阳性表达率为90%，明显高于无复发和转移的表达（52.5%）（P<0.05）。 见表1。
2．3 Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中的表达的相关关系 经相关检验，Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中的表达呈负相关（P<0.05），见表2。表1 Bcl-2和Ki-67表达与临床病理参数关系表2 Bcl-2和Ki-67在乳腺癌中表达的关系
3 讨论
Bcl-2是抑制细胞凋亡的重要的凋亡调控基因,在多种癌中表达［1］。Bcl-2的表达提示肿瘤的恶度较低，是一个可靠的临床预后好的指标［2，3］。本组Bcl-2表达在分化Ⅰ级组明显高于Ⅲ级，在淋巴结转移阴性中的Bcl-2的表达明显高于阳性的表达，其表达与腋淋巴结转移呈负相关。在肿瘤大小和分期中的表达， 尽管有报道显示Bcl-2表达与肿瘤大小呈负相关［4，5］，但多数报道与之无关［6］。Ki-67是反映细胞增殖活性的一种标记，半衰期短，在细胞周期中，除G0期和G1早期外，其他各期均有表达，Μ期达到高峰［7］。Ki-67在肿瘤的良恶性的区分、恶性程度的确定及评估预后等方面有较广泛的应用。在乳腺癌的预后研究表明，Ki-67与c-erbB-2、P53等一同被列为仅次于激素受体、组织学级别的乳腺癌第二类预后指标［8］。本组Ki-67的阳性表达与肿瘤的大小、组织学分级、淋巴结转移、复发和转移差异有显著性（P<0.05），呈正相关，而Bcl-2的表达随Ki-67表达增多明显减少，呈负相关，但复发转移无明显统计学差异，与文献报道不一致［9～11］，可能与复发、转移后带瘤生存以及实验条件不同等多因素有关。临床分析这些指标时应分别对待，为乳腺癌高危病理参数特性的了解有一定帮助。
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作者单位：133000 吉林延吉，延边大学附属医院普通外三科