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【摘要】 目的 了解新疆伊犁州健康献血人群中HBV、HCV和HIV窗口期病人的发生率及现行血筛免疫检测的残留风险度。方法 用科华公司研制开发的HBV/HCV/HIV核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)对累积收集的新疆伊犁州的健康献血者血浆标本进行回顾性盲法单份检测，了解新疆伊犁州健康献血人群中HBV、HCV和HIV窗口期病人的发生率，及现行血筛免疫检测的残留风险度。笔者用国产ELISA试剂与科华公司研制生产的HBV/HCV/HIV核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)做同步检测，窗口期标本(ELISA 检测阴性,核酸检测阳性标本)进一步用进口罗氏核酸和酶免试剂复核。结果 检测了新疆伊犁州2006年2月-2007年5月健康献血人群的5751份血样标本，共检出8份HBV-DNA，8份HCV-RNA和2份HIV-RNA阳性样本，其中包括3份ELISA漏检HBV (HBsAg阴性)和1份HCV(Anti-HCV阴性)窗口期(核酸阳性)标本，窗口期标本在新疆地区健康献血者中的发生率HBV为0.052%(3/5751)，HCV为0.017%(1/5751)，HIV为0.034%(2/5751)。结论 与HBV/HCV/HIV核酸检测(PCR-荧光法)相比，酶联免疫法存在一定的漏检率，存在安全输血隐患，为保障输血安全,建议艾滋病高发区献血人群HIV、HCV和HBV检测应使用核酸检测。
【关键词】 NAT;核酸检测;HIV;获得性免疫缺陷综合征;HBV、HCV;乙、丙型肝炎病毒
为了解新疆伊犁州健康献血人群中HBV、HCV和HIV窗口期病人发生率及现行血筛免疫栓测的残留风险度，笔者研究了2006年2月-2007年5月前来我站无偿献血且经标法筛查抗-HIV、抗-HCV和HBsAg阴性的健康献血者5751人，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 研究对象为2006年2月-2007年5月，前来我站无偿献血且经金标法筛查抗-HIV、抗-HCV和HBsAg阴性的健康献血者5751人，年龄18～50岁。
1.1.1 试剂 HBV/HCV/HIV核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)由科华公司提供，批号2007070;国产酶标试剂采用科华酶免试剂,HBsAg(批号：20060108，20060703，20061129);Anti-HCV(批号：20060112，20060713，20070117);Anti-HIV(批号：20060110，20060723，20061213)。乙肝两对半试剂 (批号：20060102 ，20060703， 20061129);进口罗氏核酸复核试剂由卫生部临床检验中心提供，批准文号:HBV:P/N:03599779 190,批号69106901， HCV v2.0: P/N: 03302563 018,批号68797101。进口酶免试剂由中国疾病预防控制中心性艾中心提供，HBV：Abbott Murex乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫)，批准文号:S20050065，批号 L040110 ， HCV：Ortho-Clinical Diagnostics丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)，批准文号:S20040074，批号 EXE147 。
1.1.2 主要仪器 BIO-RAD公司的Opticon2，ABI公司7500实时荧光PCR仪，全自动Star加样、FEME酶免检测系统，高速台式离心机、震荡仪。
1.2 方法
1.2.1 血浆样本 进行同步的科华公司ELISA试剂与科华公司研制生产的HBV/HCV/HIV核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)做同步检测，所有操作严格按照试剂盒使用说明书进行。
1.2.2 潜在窗口期样品 对于核酸检测阳性而ELISA检测阴性的潜在窗口期样品进行重点检测和跟踪，以进口罗氏核酸试剂来复核该样品从而确认窗口期标本。
1.2.3 质量控制 HIV、HCV和HBV的检测，均参加卫生部的室间质评。
1.2.4 统计学处理 核酸检测与ELISA检测结果采用χ2检验。
2 结果
2006年2月-2007年5月新疆伊犁血站应用双盲法对5751份献血者血浆标本进行了同步ELISA和核酸检测筛查，以国产ELISA试剂筛查出抗原/抗体阳性标本分别为：HBsAg 37例(0.64%)，Anti-HCV 31例(0.54%)，Anti-HIV 10例(0.17%)。以HBV/HCV/HIV核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)同步筛查出HBV-DNA阳性标本8例(0.14%)，HCV-RNA阳性标本 8 例(0.14%)，HIV-RNA阳性标本2例(0.035%)。合并ELISA筛查结果，合计HBV阳性标本40例(0.70%);HCV阳性标本32例(0.56%);HIV阳性标本10例(0.17%)(见表1)。本次通过大量筛查新疆高危地区流动献血者标本，从中发现可能存在的HBV/HCV/HIV窗口期标本，并对检测出的窗口期标本用进口核酸试剂进行复核。本次共检测了5751份献血者标本，检测出3例HBV、1例HCV的核酸检测阳性而ELISA检测阴性的疑似窗口期样本。窗口期样本筛查结果(见表2)。表1 5751份待检样本HBV、HCV、HIV核酸检测与ELISA检测结果表2 科华核酸试剂盒窗口期标本检测检出效能经统计，对HBV、HCV、HIV检测，NAT法与ELISA法差异有显著性(P<0.05)，ELISA法检测阳性率高于NAT法，但受方法学影响因素，ELISA法存在一定的假阳性，且对窗口期样本存在漏检。
本临床研究中发现了3例HBV、1例HCV的核酸检测阳性，而ELISA检测阴性的窗口期样本。结果显示如果不使用核酸检测而仅使用ELISA检测，其病毒漏检几率在HBV和HCV中分别达到了5.2/10,000(3/5751)和1.7/10,000 (1/5751)。
3 讨论
经由输血导致的传染性疾病是引起血液安全问题的主要因素。我国目前主要采用酶联免疫检测(ELISA)技术方法对血液病毒进行筛查。虽然国产ELISA试剂的灵敏度和特异性在不断地改进和提高，但仍不能完全排除在“窗口期”的病毒感染血源漏过正常筛检。所谓“窗口期”，是指从感染病原开始，直至用某种检测方法能够检测到该病原存在为止的这一段时间。据文献报道[1]，HIV窗口期发生率一般为1/7,800,000～1/1,900,000，本次检测未发现HIV窗口期标本，可能与HIV窗口期发生率及本次检测的标本数有关。ELISA检测的“窗口期”较长，即使是技术发达、血源筛查严格的国家，如美国，其90%以上输血传播HIV和HBV以及75%以上输血传播HCV的危险性也来自“窗口期”感染献血。为了减少ELISA检测的“窗口期”漏检，在国外特别是一些发达国家和地区已普遍采用核酸检测方法来进一步提高血液安全性[2～4]。
本检测结果初步显示HBV和HCV窗口期发生率在伊犁州流动献血者中达5.2/10,000(3/5751)和1.7/10,000 (1/5751)，远高于西方国家(加拿大1/153,000和1/2,300,000，法国1/640,000和1/10,000,000，德国1/230,000和1/670,000，日本1/52,000和1/348,000，美国1/180,000和1/230,000)。
据文献报道[1]，HIV窗口期发生率一般为1/7,800,000～1/1,900,000，本次检测未发现HIV窗口期标本可能与HIV窗口期发生率及本次检测的标本数有关。本次检测出现的酶免阳性，核酸阴性情况可能与多个因素有关：标本的收集、运输、保藏;窗口期标本的HBV-DNA滴度极低;HCV/HIV RNA较易降解;不同献血者复杂的个体免疫状态的差异等。
核酸检测能有效检测出滴度极低的窗口期标本，与ELISA检测结果相结合，可以互补。为保障输血安全,建议艾滋病高发区献血人群HIV、HCV和HBV检测应使用核酸检测。
【参考文献】
1 Alan Kitchen.人类免疫缺陷病毒(HIV).见:世界卫生组织主编.安全血液和血液制品远程教育项目(第二册).上海市中心血站译,中文第2版,2002，20-31.
2 Busch MP,Keinman SH,Jackson B,et al.Nucleic acid amplification testing of blood donors for transfusion-transmitted infectious diseases.Report of interorganizational force on nucleic acid amplification testing of blood donors.Transfusion,2000,40(2): 143.
3 Roth WK,Buhr S,Drosten C,et al.NAT and viral safety in blood transfusion.Vox Sang,2000,78 (Suppl 2): 257.
4 Thomas I,Mathys E,Gerard C.The use of nucleic acid amplification techniques to increase the viral safety of blood.Clin Lab,2002,48(3): 155.
作者单位：835000 新疆伊宁，伊犁州中心血站