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The anti-inflammatory effects and effects on MDA contents of total saponins of psammosilene tunicoids
Wang Li，Yao Guiling，Zhang Liping，et al.
General Hospital of Armed Police Forces，Beijing100039.
【Abstract】 Objective To observe the anti-inflammation effects and possible mechanism of Total Saponins of Psammosilene tunicoids（TSPT）.Methods After establishing AA rats model，the TSPT's anti-inflammatory ef-fects and mechanism against AA was studied through observing changes of the ankle swelling and contents of MDA in inflammatory-tissue soak of AA rats.Results TSPT could inhibit articular swelling and effectively decrease the con-tent of MDA in inflammatory tissue soak of AA rats.Conclusion TSPT has good anti-inflammation effects and the mechanism is likely related to TSPT's down-regulation of MDA.
【Key words】 TSPT AA MDA
金铁锁（苗语:Jenb tieeg sox）系苗族习用药材 ［1］ ，首载于《滇南本草》，为石竹科植物金铁锁Psammosilene tuni-coides.W.C.Wu et C.Y.Wu的干燥根。别名:独定子、对叶七、白马分鬃等，主要含皂苷类成分。具有散瘀定痛、止血、消痈排脓之功，用于跌打损伤，风湿痛、胃痛、创伤出血等的治疗 ［2］ 。目前尚关于其抗AA研究的文献报道，本文就关于金铁锁总皂苷抗AA作用的研究作一介绍。
1 材料与方法
1.1 材料 Freund's完全佐剂（sigma公司产品，由帮定生物技术公司提供），注射器（1.0ml），金铁锁总皂苷（贵阳中医学院制剂教研室提取），地塞米松注射液（批号:0206101，天津金辉氨基酸有限公司提供），风湿宁注射液（批号504002，罗浮山药业提供），TSPT（贵阳中医学院制剂教研室提取）。动物:70只雄性Wistar大鼠，体重:（200±30）g，清洁级二级动物（由军事医学科学院动物中心提供）。1.2 实验方法
1.2.1分组 70只Wistar雄性大鼠，随机分为7个组。分别为:生理盐水组（NS）、模型组（A）、西药阳性对照组（地塞米松注射液）（B）、中药阳性对照组（风湿宁注射液）（C）、TSPT大（D）、中（E）、小（F）剂量组。
1.2.2 造模 除NS组外，其余各组于每只大鼠右后足跖皮内注射Freund's完全佐剂0.1ml致炎。第1天记录大鼠的体重和两侧脚踝关节的周长。
1.2.3 给药 除NS组外，其余均按上述方法造模，于造模后第9天开始给药，连续给药12天。每隔3天，记录各组大鼠体重，及踝关节肿胀，末次给药（造模后第21天）1h后处死大鼠，观察药物对继发性病变的影响。
2 结果
2.1 TSPT对AA大鼠足肿胀的影响 足肿胀的测量方法:用记号笔标记肿胀踝关节周径，每日以特制软皮尺测量踝关节周长（软皮尺无弹性，最小刻度为0.1cm）。实验结果见表1。
统计结果分析:实验结果表明，与生理盐水比较，造模后第8天（药前）各组足均明显肿胀（P<0.01），表明造模成功。用药约1周后，TSPT大、中剂量对足肿胀均显示出明显的抑制作用（P<0.01），作用强度大于中药阳性组（风湿宁注射液），接近地塞米松组。提示:TSPT能有效抑制AA大鼠踝关节的炎症反应。
2.2 大鼠致炎足中丙二醛（MDA）生成量的测定 动物造模分组给药同上。鼠致炎21天后处死，在致炎侧关节上方0.5cm处摘取肿胀足爪，纵向切开，放入5ml生理盐水的试管中4℃浸泡过夜，离心（3000r/min）取上清液，-20℃保存待测。试剂与仪器:MDA试剂盒（由北京帮定生物技术公司提供），可见分光光度计（岛津:FW/UV265）（由北京武警总医院制剂科提供）、恒温水浴锅、离心机（由北京武警总医院检验科提供）。测定方法及参数:硫代巴比妥酸结合法，于532nm处测定，实验操作方法严格按照试剂盒说明进行。
2.3 统计学方法 实验结果以（ˉx±s）表示，采用t检验。如表2。
表1 TSPT对AA大鼠足肿胀的影响 （略）注:与NS组比较: *** P<0.01;与模型组（A组）比较: ★★ P<0.05， ★★★ P<0.01;与西阳组比较（B）: △△ P<0.05， △△△ P<0.01。与中阳（C）组比较: ※※ P<0.05， ※※※ P<0.01
表2 TSPT对AA大鼠炎性组织液中MDA的影响 （略）注:与NS组比较: ** P<0.05; *** P<0.01;与模型组（A）比较: ★★ P<0.05， ★★★ P<0.01;与西阳组比较（B）: △△ P<0.05， △△△ P<0.01;与中阳组比较: ※※ P<0.05
图1 TSPT对MDA水平的影响图
由图表统计分析可知:与NS组比较，模型组炎性组织液中，MDA的含量显著升高（P<0.01），这显示出AA大鼠出现严重的炎性反应。经治疗后，与模型组比较，各个给药组AA大鼠炎性组织液中MDA含量均有不同程度的降低，B（西阳组）、D（TSPT大剂量组）表现出差异有非常显著性（P<0.01）。
3 讨论
MDA通过酶系统和非酶系统产生氧自由基，自由基可引起脂质过氧化，影响一些基因的表达，在炎症和免疫过程中起着中介作用 ［3］ 。因此自由基在生物体系中的作用正受到广泛重视。在正常情况下，机体内仅产生少量氧自由基，其产生、利用和清除保持一种动态平衡。一旦由于某种原因造成体内自由基的堆积，便会损伤组织细胞，导致各种病理变化。AA大鼠炎症反应中，模型对照组炎性组织液中MDA含量显著升高与AA大鼠足肿胀呈正相关，表明致炎因子使机体产生过量的氧自由基。这些活性氧可直接作用于一些细胞包括免疫细胞，与其脂质、蛋白质、核酸等发生反应，引起脂质过氧化，使MDA增多，造成细胞毒性和功能受损。MDA的增多会造成自由基连锁反应加强，使炎症加重或发展。经TSPT治疗后，大鼠炎性组织中MDA的含量降低，表明TSPT能抑制或阻断炎症时氧自由基的过量产生与释放，减轻氧化应激反应与脂质过氧化，使其终产物MDA降低，并接近正常组水平，因而减少了对细胞的损伤，纠正体内氧自由基代谢失衡或紊乱的作用，调整机体内环境，起到消炎、抗氧化和细胞保护作用，促进了炎症反应的消退。TSPT抗炎免疫的作用机理是多方面的，本实验结果提示，TSPT对AA大鼠炎症时氧自由基代谢的调整作用，可能是其中一个重要环节，对AA大鼠的抗关节炎作用可能与其降低脂质过氧化，恢复抗氧化酶活性和腹腔Mφ分泌功能等有关。
参考文献
1 包骏，冉懋雄.贵州苗族医药研究与开发.贵阳:贵州科技出版社，1999，174.
2 中华本草编委会.中华本草.第二卷.上海:上海科学技术出版社，1999，782.
3 莫简.关于自由基在生物体系中作用的几点看法.第四军医大学学报，1997，18（2）:199.
作者单位:1100039北京武警总医院
2100700北京中国中医研究院