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1 对象与方法
1.1 实验对象 胃癌病人50例。
1.2 实验目的 查找癌细胞在病人骨髓中的转移情况。
1.3 实验方法 采用免疫组化SP法，标记抗体:EMA，CK20。
1.4 标本的采集及涂片
1.4.1 采集方法 局麻下，抽取胃癌病人骨髓液1ml，离心，分离后提取底层细胞部分置于洁净的离心管中。
1.4.2 标本涂片 取经过上述处理后的骨髓液50ml，滴在载玻片上，用牙签将其涂成2.5cm 2 大小的范围，风干，或用定型吹风机冷风吹干。置于洁净的95%乙醇中固定5min，取出，蒸馏水洗，PBS洗，即可进行免疫组化的染色步骤。不能马上进行染色的涂片，在固定完成后，置于-18℃冰箱中保存，保存时间最好不要超过1个月。
1.5 染色方法 免疫组化SP法，其染色过程于组织切片基本相同。
（1）固定好的涂片PBS冲洗后，用绵纸将涂片周围水分擦干，注意:图片细胞周围要留出1mm的空隙以防止细胞本身水分被吸干，造成假阳性结果。以下每步试剂滴加之前，擦干玻片周围水份的操作，均应依此。若用免疫组化笔划圈时，要留出2mm宽的缝隙，防止细胞被其有机成分损伤。（2）滴加5%～10%羊血清封闭10～30min。（3）滴加按一定比例稀释的一抗工作液，EMA∶1:80或CK20，1∶120，（购自试剂公司的抗体原液，用阳性组织片作预试验，用棋盘式稀释法，找出合适的稀释比例，细胞涂片因细胞成分含量较少，可以在组织片的基础上，适当加大稀释比例1%～10%。（4）室温孵育2～3h，或4℃冰箱过夜，PBS冲洗5min×3次。（5）滴加生物素标记的二抗工作液，10～30min，PBS冲洗5min×3次。（6）滴加辣根过氧化物酶标记的三抗工作液10～30min，PBS冲洗5min×3次。（7）显色5～30min。显色时一定要在显微镜下观察，到需要的程度，及时终止，以免显色不足或过度，造成假阴性或假阳性形成。（8）苏木素复染1min，1%酸酒精分化，PBS返蓝，自来水冲洗2～5min。（9）乙醇95%脱水，无水乙醇脱水，定性吹风机吹干，中行树胶封固。（10）镜下观察，EMA胞浆着色，CK20胞浆胞膜着色。
2 结果分析
细胞涂片中EMA（上皮膜特异性抗体），CK20（标记腺上皮细胞及其来源的肿瘤）着色，或者说细胞阳性可诊断肿瘤细胞有无转移，提示临床采取进一步治疗。
3 讨论
常规HE染色中，肿瘤根治手术常规清扫淋巴结，只有成团癌细胞转移到淋巴结中，才容易被病理科医师检出，提示临床医师该病人淋巴结的转移情况，在某个病人骨髓中发现阳性细胞，对于研究肿瘤在血液、骨髓中的转移情况，具有很深的科研及临床意义。
作者单位:050011河北医科大学第四医院病理科