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1 材料与方法
1.1 标本与来源 收集河北医科大学第二附属医院1990年3月～2003年4月卵巢浆液性肿瘤手术切除存档组织蜡块，所有病例术前均未做化疗与放疗。实验前对原切片复验（按WHO1999年标准核实病理诊断和分级并据临床资料进行分期）。标本共142例，包括（1）卵巢良性浆液性囊腺瘤48例（平均年龄37.4岁）;（2）卵巢交界性浆液性囊腺瘤11例（平均年龄50.4岁）;（3）卵巢浆液性囊腺癌83例（平均年龄53.4岁）。其中Ⅰ期17例，Ⅱ期10例，Ⅲ期40例，Ⅳ期16例。组织学分级1级22例，2级29例，3级32例。伴有腹水者60例，伴有盆腹腔播散者63例，伴有淋巴结转移者28例。
1.2 仪器和试剂 nm23-H1，MMP-9鼠抗人单克隆抗体（即用型），SP试剂盒及DAB试剂均购自北京中山生物技术有限公司;u-PA兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德生物工程公司，工作浓度为1:50。
1.3 实验方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连接法（SP法）检测三组卵巢浆液性肿瘤中nm23-H1、MMP-9和u-PA的表达。具体步骤按说明书进行。
1.4 结果判定 nm23-H1、MMP-9和u-PA均以细胞浆呈现棕黄色颗粒者判为阳性;胞浆和胞核均无着色或仅有胞核着色者判为阴性。每张切片随机选择10个高倍视野，计数1000个上皮细胞，以阳性细胞数量及染色强度综合判断。
1.5 统计学方法 计数资料采用χ 2 检验。
2 结果
2.1 不同卵巢浆液性肿瘤组织中nm23-H1、MMP-9和uPA的表达 见表1。
表1 不同卵巢浆液性肿瘤组织中nm23-H1、MMP-9和u-PA的表达（略）
注: * 恶性组高于良性组、交界组，P均<0.05; ** 恶性组显著高于良性组，P<0.01; # 恶性组显著高于良性组，P<0.05
由表1可以看出，恶性组的nm23-H1阳性表达率明显高于良性和交界组（P均<0.05）。MMP-9在三组中的阳性表达率呈逐渐上升趋势，恶性组的表达率显著高于良性组，P<0.01。u-PA的阳性表达率，恶性组高于良性组，P<0.05。良性组与交界组和交界组与恶性组之间，MMP-9和u-PA的表达差异无显著性。
2.2 卵巢浆液性囊腺癌组织中nm23-H1，MMP-9和u-PA表达与临床分期、病理分级的关系 见表2。
表2 卵巢浆液性囊腺癌组织中nm23-H1，MMP-9和u-PA表达与临床分期，病理分级的关系（略）
注: * 组间比较P<0.05; # 3级OSC表达水平显著低于1级，P<0.05; ** 3级OSC的阳性表达率显著高于1级，P<0.05
从表2可以看出，早期卵巢癌（Ⅰ，Ⅱ期）中，nm23-H1阳性率显著高于晚期者（Ⅲ，Ⅳ期），P<0.05。同时，随卵巢癌分化程度降低，nm23-H1表达逐渐降低，3级OSC表达水平显著低于1级OSC。又发现，随临床分期的增加，MMP-9阳性表达率升高，且3级OSC MMP-9和u-PA的表达率均显著高于1级OSC。
2.3 卵巢浆液性囊腺癌中nm23-H1，MMP-9和u-PA表达与腹水、盆腹腔播散及淋巴结转移的关系 见表3。
表3 卵巢浆液性囊腺癌中nm23-H1，MMP-9和u-PA表达与腹水、盆腹腔播散及淋巴结转移的关系（略）
注: * 组间比较，P<0.05
由表3可以看出，nm23-H1的阳性表达率，淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组（P<0.05），有无腹水和有无癌瘤播散组比较，差异均无显著性（P>0.05）。MMP-9， u-PA的阳性表达率随癌瘤播散的发生，阳性表达率增高，且MMP-9表达与淋巴结转移相关，而二者与患者是否出现腹水无显著性相关。
2.4 nm23-H1，MMP-9和u-PA协同表达情况 见表4。
表4 nm23-H1，MMP-9和u-PA协同表达情况（略）
由表4可看出，nm23-H1与MMP-9和u-PA的表达间未见明显相关性。
3 讨论
nm23-H1是近年来颇受重视的肿瘤转移抑制基因，研究发现，在不同人类恶性肿瘤的进展过程中，nm23-H1发挥不同的作用 ［1～3］ 。在本研究中，我们对卵巢浆液性肿瘤nm23-H1的表达进行了分析，结果表明，nm23-H1在卵巢良性、交界性和恶性浆液性肿瘤中均有表达，但卵巢浆液性囊腺癌（OSC）中nm23-H1的表达率明显高于良性和交界性肿瘤，提示nm23-H1的表达可能与OSC的发生有关，它的过度表达出现于OSC发生的早期阶段，是卵巢组织发生恶变的重要信号之一。结果还显示，OSC中伴有淋巴结转移者nm23-H1表达率降低，提示nm23-H1基因表达对OSC的转移可能具有抑制作用，它的失活与其转移相关。同时发现，OSC中nm23-H1表达阳性者生物学行为较好，而表达阴性者则相反，均提示nm23-H1基因是在OSC发生过程的早期阶段被激活，而随OSC恶性进展，其表达开始明显下降，肿瘤的转移潜能逐渐增高，是肿瘤恶性进展和晚期的特征。这在结直肠癌等的研究中，也有类似的报道 ［4］ 。在基质金属蛋白酶（MMPs）家族中，相对分子质量92000的MMP-9为Ⅳ型胶原酶，可有效降解基底膜的主要成分Ⅳ型胶原及明胶，它的异常表达与人类许多恶性肿瘤的转移密切相关 ［5～7］。在本研究中，我们亦发现，MMP-9与OSC的浸润转移显著相关:MMP-9的阳性表达率，癌瘤盆腹腔播散组明显高于无癌瘤播散组;同时，低分化（3级）者表达明显高于高分化（1级）者。这可能由于分化差的癌细胞有更强诱导MMP-9表达的能力，因而也有更强的浸润及转移能力。另外，MMP-9阳性表达，随着分期增加而呈递增趋势，P<0.05。这些结果均表明，OSC除了其位置隐蔽，还由于癌组织内大量的MMP-9有效地破坏上皮及血管的基底膜，易造成广泛播散。
尿激酶型纤溶酶原激活剂（urokinase type plasminogen activator，u-PA）是一种丝氨酸蛋白水解酶，主要作用于生理病理条件下的细胞迁移和组织修复，介导细胞周围基质蛋白的溶解。而细胞外基质是癌细胞脱落、游走的主要障碍，因而，u-PA的过度表达，可促进癌细胞浸润、转移。在本组卵巢浆液性肿瘤组织中发现，卵巢浆液性囊腺癌的u-PA表达显著高于良性及交界性肿瘤，提示u-PA的高表达是恶性肿瘤的特征之一。且发现u-PA含量与OSC的恶性生物学行为相关，显示u-PA表达程度与OSC的转移能力可能相关。
在本研究中，nm23-H1与MMP-9和u-PA之间未发现明确的相关性，因而认为虽然这三种蛋白均与OSC的浸润、转移密切相关，但其蛋白表达异常可能由不同的病因所引起，对其各自的病因，有待进一步研究。
总之，现代研究认为，恶性肿瘤的发生、发展是极其复杂的过程，是多因素、多步骤、多阶段、多种癌基因和抑癌基因参与的复杂病理过程。本研究也支持上述观点。
参考文献
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作者单位:054000河北邢台邢台医学高等专科学校病理教研室
050000河北医科大学第二附属医院病理科（* 通讯作者）