上海地区慢性乙肝患者HBV基因型的分子生物学特性及临床意义

   【摘要】 目的  研究上海地区慢性乙肝患者HBV基因型之分子生物学特性和临床意义。 方法  134例慢乙肝患者中，男103例（76.87%），女31例（23.13%）。年龄18～72岁，平均41.4±9.3岁。其中慢性乙肝携带者（ASC）6例，慢性肝炎（CH）轻度16例，中度61例，重度12例，慢性重型肝炎（CSH）16例，活动性肝硬化（LC）23例。HBV基因分型以特异性引物一套式PCR法和测序（部分标本）确定其基因型。同时检测其肝功能、HBVM、HBV-DNA载量和HBV前C区1896位变异。 结果  上海地区慢乙肝患者之HBV以B和C基因行为优势基因型，分别占42/134（31.34%）和91/134（67.91%）;C基因型在LC患者中所占百分比明显高于B型（χ 2 =4.42，P<0.05）;B和C基因型HBV DNA载量分别为5.98±1.14和6.01±0.96（log10，copies/ml）;HBV前C区1896位变异检出率（V+W/V）在B和C基因型分别为34/41例（82.93%）、64/86例（74.42%），两者在年龄、性别构成比，ALT水平和e-系统间构成比中差异无显著性（P>0.05）。 结论  上海地区慢性乙肝患者HBV以B和C基因型为优势基因型，其病毒复制相当活跃，易发生HBV前C区1896位变异，C基因型比B基因型易发生肝纤维化直至进展为肝硬化。
      
　　【关键词】  慢性乙型肝炎 乙型肝炎病毒 基因型
     
　　乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染在世界各地均有不同程度的流行，但地区差异非常明显 ［1］ ，这除了与国家和地区间的卫生状况、生活习惯、免疫遗传特征等因素明显相关外，主要与病毒本身生物学特性有关。目前研究认为，HBV可分为A～H8种基因型 ［2］ ，而基因分型有助于解释同血清型在不同地区的临床表现及预后的差异，有助于治疗药物的筛选和考评，也有助于病毒变异的研究和发病机制的探讨。本文通过对134例上海地区慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒基因分型及其病毒载量，前C区1896位病毒变异和临床结果的分析，研究上海地区慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因型的分子生物学特性和临床意义。

　　1 资料和方法
    
　　1.1 研究对象 本组134例病人为我院2002年住院患者，其中男103例（76.87%），女31例（23.13%），年龄18～72岁，平均41.4±9.3岁。临床诊断为慢性乙型肝炎携带者（ASC）6例（4.48%）;慢性肝炎（CH）轻度16例（11.94%），中度61例（45.52%），重度12例（8.96%）;慢性重型肝炎（CSH）16例（11.94%），活动型肝硬化（LC）23例（17.16%），诊断标准按2000年10月西安修订的《病毒性肝炎防治方案》执行。
   
　　1.2 检测方法
   
　　1.2.1 HBV基因分型检测 对HBV S区以特异性引物一套式PCR方法按文献操作步骤检测HBV基因型 ［3］ ，并取部分不同基因型的扩增产物进行测序分析比较，证实2种分型方法结果一致。
     
　　1.2.2 HBV前C区1896位变异检测 以特异性引物PCR法进行检测，并部分标本经测序分析进一步证实。

    　1.2.3 HBV DNA定量检测 以Taq-Man探针实时荧光PCR法定量检测，使用Bio-Rad公司的Icycler荧光PCR仪测定，试剂购自深圳匹基生物工程股份有限公司。

    　1.2.4 HBVM检测 采用MEIA法，试剂购自美国abbott公司。

   　 1.3 统计学处理 采用卡方检验，U检验和t检验。

　　2 结果
    
　　2.1 B和C基因型的慢乙肝患者临床结果比较 见表1。从表1可以看出，B型42例（31.34%），C型91例（67.91%），B/C混合型1例（0.75%），未检测出A、D、E、F、G、H及其混合型。不同基因型其临床类型构成比差异有显著性，C型在LC患者中所占百分比明显高于B型，分别为21.98%和7.14%（χ 2 =4.42，P<0.05），经统计学处理差异有显著性。而在ASC、CHB、CSH临床类型构成比上，差异无显著性（P>0.05）。另外，B型和C型患者在年龄、性别构成比及ALT水平等临床结果方面，差异无显著性（P>0.05）。
   
　　2.2 B和C基因型的慢乙肝患者HBV的分子生物学特性比较 见表2。从表2可以看出，B型和C型HBV DNA载量分别为5.98±1.14和6.01±0.96（log10，copies/ml），两者比较，统计学上差异无显著性（P>0.05）;检测B和C基因型慢乙肝患者的前C区1896位变异情况，其野生株（W）、变异株（V）、混合株（W/V）和未检株则分别为7例（16.67%）、6例（14.29%）、28例（66.67%）、1例（2.38%）和22例（24.18%）、15例（16.48%）、49例（53.85%）、5例（5.49%），变异（V+W/V）检出率在B型和C型分别为34例（82.93%）和64例（74.42%），说明前C区1896位变异在B型和C型HBV中发生率较高。另外，B与C基因型相比，其在HBeAg（+）、HBeAb（+）和HBeAg/HBeAb（+）组间构成比统计学上差异无显著性。
    
　　表1 B型和C型的慢乙肝患者临床特征比较略
    
　　表2 B和C基因型的慢乙肝患者HBV的分子生物学特性比较略
    
　　3 讨论
    
　　目前研究认为，不同基因型有相对固定之地域分布 ［2，4］ 。A型分布在西欧、北欧、北美洲及非洲，B型和C型分布在亚洲东部和太平洋地区，D型主要分布在南欧，E型只分布在非洲，F型分布于美洲大陆的土著居民，G型发现于法国和美国，H型分布于中美洲。国内夏国良等 ［5］ 报道，对湖南、广西、河南和河北的280例慢性HBV携带者的基因型确定提示，基因型B和C在湖南等4省（区）为优势基因型，分别占29.3和67.9%。本文对134例上海地区的慢乙肝患者的基因型进行检测，结果B型和C型分别为31.34%和67.91%，未检测出A、D、E、F、G、H及其混合型，说明上海地区之慢乙肝患者HBV基因型同国内其他省（区）相同，以B和C型为优势基因型。另外，检测到1例B/C混合基因型，考虑可能是重叠感染或基因型之间部分转换而来 ［6］ 。 多项研究表明，HBV基因型与临床结果相关 ［7］ 。B型HBsAg携带者组织炎症活动度积分较低，C型慢性HBV感染者中肝硬化发生率更高。B型慢性肝炎对干扰素的反应优于C型 ［8］ 等。本文研究也发现，上海地区慢乙肝患者其乙型肝炎病毒不同基因型在临床类型构成比中分布同样存在差异。其中肝硬化发生率在C基因型患者中明显高于B基因型（21.98%vs7.14%，P<0.05）。而在肝功能不全如ALT水平方面，B型和C型之间无统计学上之差异，说明C基因型的HBV感染者易进展至肝硬化，提示需及早干预其肝纤维化、肝硬化之发生。
   
　　通过对HBV基因型的分子生物学特性的研究发现，B与C基因型病毒复制较活跃，处于一个高水平状态，但病毒载量在B和C基因型间统计学上差异无显著性（5.9822±1.1429vs6.0069±0.9621log10，copies/ml，P>0.05）。进一步研究不同基因型前C区1896位变异显示，上海地区慢性乙肝患者无论是B还是C基因型，其HBV感染以野毒株和变异株混合感染为主（66.67%和53.85%），HBV前C区1896位变异检出率高达82.93%和74.42%，推测可能与上海地区优势基因型B和C的HBV-DNA的nt1858位为T，需1896G变异为终止密码子A，两者才能结合以形成稳定的茎襻结构，有利于HBV的复制有关 ［9］ 。
   
　　总之，我们认为，上海地区慢性乙肝患者以B和C基因型为优势基因型，其病毒复制相当活跃;易发生前C区1896位变异，C基因型比B基因型易发生肝纤维化直至进展为肝硬化。
     
　　参考文献
    
　　1 Xia GL，Liu CB，Cao HL，et al.Prevalence of hepatitis B and C virus in-fections in the general Chinese population:Results from a nationwide cross-sectional seroepidemiologic study of hepatitis A、B、C、D and E virus infections in China.International Hepatology Communications，1996，5:62-73.
   
　　2 Arauz-Ruiz P.Genotype H:a new Amerindian genotype of hepatitis B virus revealed in Centre America.J Gen Virol（England），2002，83（pt8）:2059-2073.

   　 3 Hideo Naito.Rapid and Specific Genotyping System for Hepatitis B Virus Corresponding to Six Major Genotypes by PCR Using Type-Spe-cific Primers.Journal of Clinical Microbiology，2001，39（1）:362-364.

　　4 Stuyver L.A new genotype of hepatitis B virus:complete genome and phylogenetic relatedness.J Gen Virol，2000，81（Pt1）:67-74.

 　   5 夏国良.乙型肝炎病毒基因型和血清亚型在我国部分地区的分布及其特点.中华流行病学杂志，2001，22（5）:348-351.

    　6 Kao JH.Clinical and virological aspects of blood donors infected with hepatitis B virus genotypes B and C.J Clin Microbiol（United States），2002，40（1）:22-25.

    　7 Chu CJ.Clinical Significance of Hepatitis B Virus Genotypes.Hepatolo-gy，2002，29（5）:1274-1276.

    　8 ChuTW.HBV Genotype B Is Associated With Better Response To Inter-feron Therapy in HBeAg（+）Chronic Hepatitis Than Genotype C.Hep-atoloty，2002，29（12）:1425-1430.

   　 9 Lindh M.Genotypes，nt1858variants and geographic origin of hepatitis B virus-Large-scale analysis using a new genotyping method.J Infect Dis，1997，175:1285-1293.    

　　作者单位:1　200000同济大学附属东方医院消化科
  
　　　　　　 2　上海市传染病医院