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为了提高ER、PR着色强度及阳性表达率，将采用目前免疫组化染色常用的两种不同pH值的抗原修复液即柠檬酸缓冲液（pH=6）及EDTA缓冲液（pH=8）对本科30例乳腺癌组织标本进行检测比较，抗原修复液pH=8的EDTA缓冲液在乳腺癌组织内ER、PR染色强度及阳性表达率方面取得了较好的效果。
1 材料与方法
1.1 组织标本 为本科2005年1月～2006年2月间，30例乳腺癌石蜡包埋组织（其标本均经10%中性福尔马林固定），做4μm厚连续切片。
1.2 试剂 抗原修复液分别为柠檬酸缓冲液（pH=6）及EDTA缓冲液（pH=8）；ER、PR特异性抗体及Envision试剂盒+DAB显色试剂盒以上即用型试剂均购自上海DAKO公司。
1.3 方法 每例采用连续切片，将其分组编号。切片经常规二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水至水化，PBS液冲洗，按其分组编号分别置入含柠檬酸缓冲液（pH=6）及EDTA缓冲液（pH=8）的抗原修复盒中，于微波中做常规处理；待冷却后用PBS液充分洗涤；然后每张切片滴加特异性抗体，接着按Envision+DAB显色试剂盒操作方法进行免疫组化染色。
2 结果
见表1。
表1 两组不同pH值抗原修复后ER、PR染色强度的比较（略）
注：阳性强度是以阳性细胞数或指数的百分数计。-：25%以下；+：25%～50%；++：50%～75%；+++75%以上。染色结果总体观察，经pH=8的EDTA缓冲液抗原修复后，染色强度较pH=6的柠檬酸缓冲液抗原修复液染色强度明显较强，而且定位也较佳。
3 讨论
由于目前进行免疫组化染色的石蜡切片标本均用甲醛固定，使得抗原性物质，或由于形成醛键、羧甲键等原因而被封闭了部分抗原决定簇；或由于蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，因此，在免疫组化染色时，有些抗原需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。在利用热效应打开蛋白之间的交联键，将已封闭的抗原决定簇暴露和修复中，抗原修复液的选择是一关键。有学说认为，EDTA缓冲液抗原修复的作用机制是通过钙离子的螯合而实现的，而这种螯合作用只有在碱性pH值下才起作用，形成于hydromethylen、羧基及磷酸基团间的钙离子配体复合物通过空间排列的障碍作用，封闭了抗原决定簇的位点，因此去除了钙离子即打碎了混合物，才能与特异性抗体结合进行免疫组化染色；柠檬酸缓冲液抗原修复的作用机制也是通过钙离子的螯合作用实现，要求在高pH值下才起较好作用。由此可见，在对不同抗体检测时选择不同抗原修复液pH值是相当关键的。经过实验，结果证明，在乳腺癌的ER、PR检测中，经EDTA缓冲液（pH=8）抗原修复液微波预处理的ER、PR染色强度明显高于柠檬酸缓冲液（pH=6）抗原修复液预处理的免疫组化染色，且可减少非特异性背景染色、加强阳性着色强度。同时在检测过程中还应注意：所使用的载玻片必须清洁经防脱片处理，以防脱片；微波处理后，仍应将切片留在修复盒内，待其完全冷却取出切片、充分水洗后、再进行免疫组化染色；此外，应掌握微波功率及时间确保修复盒内有足量的抗原修复液，以免影响效果。
(编辑：若 木)
作者单位： 314400 浙江海宁，海宁市中医院肿瘤医院病理科