正交设计法研究舒脉宁注射液最佳精制工艺

【摘要】  目的 研究舒脉宁注射液最佳精制工艺。方法 正交设计法，4个因素，3个水平，阿魏酸×10与总黄酮的和为综合评价指标。结果 影响因素的大小顺序为A>D>B>C，各因素最佳水平为：A1B1C3D2。结论 最佳精制工艺为：将提取液浓缩至1：1，加乙醇至65%，调pH值为9，静置，滤过，回收乙醇，加水至全量，加0.5%活性炭，煮沸10min，滤过，即得。

【关键词】  舒脉宁注射液；精制工艺；正交设计；阿魏酸

     川芎、当归、莪术为舒脉宁注射液的另外3味中药，已经研究其提取工艺，为保证制剂疗效及稳定性，用正交设计法研究其最佳精制工艺。

    1  实验材料

    舒脉宁注射液提取预制液，每1ml相当于1.2g生药。芦丁：化学对照品，中国药品生物制品检定所提供。阿魏酸：化学对照品，中国药品生物制品检定所提供。紫外分光光度计：HP8453，美国惠普公司。高效液相色谱仪：HP1100，美国惠普公司。

    2  实验方法

    2．1  因素-水平的确定  本研究目的是探讨舒脉宁注射液最佳精制工艺。主要考察因素为：提取液的浓缩程度、含醇浓度、醇溶液的pH值、活性炭的用量等4个因素。每个因素选择3个水平。列因素-水平表，见表1。表1  舒脉宁注射液精制工艺因素-水平表

    2．2  正交设计表的选择  本研究选择4个因素，每个因素3个水平，不考虑各因素间的交互作用，因此，选择L9（43）正交表，正交设计及统计分析见表2。表2  正交设计及统计分析表

    2．3  样品的制备  取药材1200g，加6倍pH值为9的水，煎煮4次，每次50min，合并滤液，滤液浓缩至1：1，分为10等份，每份100ml，浓缩至规定比例，加乙醇使含醇量达到规定的浓度，调节pH值至规定的值，静置48h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水至100ml，调pH值为7，115℃灭菌35min，静置5天以上，滤过，备用。

    2．4  含量测定

    2．4．1  总黄酮的测定

    2.4.1.1  对照品溶液的配制  精密称取干燥至恒重的芦丁对照品约10mg，加50%乙醇溶解并定容至50ml，每ml含无水芦丁约0.200mg。

    2.4.1.2  标准曲线的绘制  精密吸取芦丁对照品溶液1、2、3、4、5、6ml,分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加1ml 5%亚硝酸钠溶液，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15min，用水6ml同法做空白在500nm波长处测定吸收度。以浓度对吸收度作回归，得回归方程：C=2.235A+0.015，   r=0.9991。

    2.4.1.3  样品的测定  精密吸取样品液1ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，再精密吸取1ml，自标准曲线项下“置25ml量瓶中……”起，依法测定。

    2．4．2  阿魏酸测定  用HPLC法测定。

    2.4.2.1  色谱条件  色谱柱：Agilend Extend-C18，流动相：甲醇-5%醋酸（25：75），流速：1.2ml/min，检测波长：324nm。

    2.4.2.2  对照品溶液的制备  阿魏酸，中国药品生物制品检定所提供。精密称取阿魏酸适量，以甲醇溶解成每1ml含阿魏酸23μg的溶液。

    2.4.2.3  供试品溶液的制备  精密吸取样品液5ml，置分液漏斗中，加盐酸1ml，加醋酸乙酯（15、15、10、10ml）提取，水浴蒸干，以甲醇溶解，移入25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

    2.4.2.4  测定法  分别取对照品溶液及供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图1、图2，计算，即得。

    3  结果

    测定结果见表2。

    4  结果分析

    方法以总黄酮+阿魏酸量×10为评价指标。各因素影响大小顺序为A>D>B>C,各因素水平为A1B1C3D2。

    5  结论

    最佳提取条件为加6倍pH值为9的水，煎煮4次，每次50min，合并滤液，滤液浓缩至1：1，加乙醇使含醇量达65%，调pH值为9，静置48h，滤过，回收乙醇，加水至全量，调pH值为7，115℃灭菌35min，静置5天以上，滤过，滤液加0.5%活性炭，煮沸5min，滤过，自滤器上添加蒸馏水至全量。

    6  讨论

    阿魏酸、总黄酮均为本品中的有效成分，本研究以测定二者的含量为评价指标。为了全面评价，在计算时将阿魏酸的数值同时扩大10倍。用二者之和作为综合评价指标。研究结果表明，浓缩程度以1：1，含醇量以65%为佳。分析其原因，浓缩程度过大，含醇量过高，会使沉淀物沉淀过快、过多析出，使有效成分包含于沉淀中，造成损失。为了保证制剂的纯度，可以考虑二次醇沉，二次醇沉的最佳条件将继续研究。

【参考文献】
  1 高竟. 中医药科研项目查询报告书，1995，6，16.

2 赵新芳. 心脉宁注射液药理实验报告.云南中医学院学报，1991，19：27.

3 高祥胜. 心脑宁注射液治疗冠心病60例报告. 江西中医药，1995，2.

4 时永华. 脉络宁注射液治疗缺血性中风155例临床观察. 中国中医急症，1993，2：3.

5 侯辉光. 血栓形成急性期溶栓治疗的现状与展望. 人民军医，1987，6：46.

6 徐西. 党参、黄芪对血小板聚集的临床及实验研究. 中药药理与临床，1988，4(4)：32.

7 中国医学科学院. 浓当归注射液基础与临床研究.北京：人民卫生出版社，1985，31.

作者单位：453000 河南新乡，解放军第371医院