侧柏叶抗真菌作用研究 （Ⅱ）

关键词 侧柏叶 真菌 最小抑菌浓度

Study the anti-fungal activity of Cacumen platycladi（Ⅱ）

Zhang Qingyun，Liu Zhiqin，Hu Yingqing，et al.

Medical College of Chinese People’s Armed Police Force Academy，Tianjin300162.

【Abstract】 Objective Testing the anti-fungal activity of extracts of theCacumen Platycladi and measuring the minimal inhibitory concentration of them.Methods The test tube dilution method was employed.Results The MIC of extracts from Cacumen Platycladi was0.14～9.2mg/ml.Conclusion The extracts of the Cacument Platycladi had distinct anti-fungal.

Key words cacumen platycladi fungal MIC

侧柏叶为常用中药，具有凉血止血、清肺止咳等功效，传统用于治疗多种出血症、风湿痹痛、咳嗽等，近年来研究表明侧柏叶具有抗炎、抗氧化、止血和抗菌作用。侧柏叶中含有挥发油、黄酮、单宁酸和鞣质类酚性成分 ^［1～2］ ，而侧伯叶具有抗农业病虫害的作用，为寻求具有绿色环保作用的抗菌杀虫剂，我们对富含有酚性成分的侧柏叶进行提取 ^［3］，并进行抗真菌活性研究。

1 实验仪器与材料

1.1 实验仪器 Gilson微量移液器（法国）;LHR-150恒温恒湿培养箱（广东省医疗器械厂）;SW-CJ-2FD医用型净化工作台（苏净集团安太公司制造）;H-I旋涡微型振荡器（上海康禾光电仪器有限公司）。

1.2 实验材料 侧柏叶Platy cldus orientatis（L.）Franco采自北京郊区喇叭沟门自然保护区内，由胡迎庆副教授鉴定。石油醚、甲醇（天津康科德科技有限公司生产）、二甲基亚砜（DMSO）（天津化学试剂有限公司生产）均为分析纯。

1.3 实验菌种 立枯丝核菌（Rhizoctonia solani，3.2871和3.2888）2株，分别来源于苹果烂根和棉花;黑白轮枝孢（Verticillium alboatrum，3.4306）1株，来源于棉花;金黄壳囊孢（Cytospora chrysosperma，3.4279）1株，来源于柳树树干;梨叶点霉（Phyllostictapirina，3.2886）1株，来源于苹果枝（购于中国科学研究院微生物研究所）。亚麻刺盘（Col_ˉletotrichum lin，3.4486）1株，来源于亚麻;枯斑盘多毛孢菌（Pestalotia funereal）2株，分别来源于马尾松和湿地松（购自中国林业科学研究院生态环境中心）。聚生小穴壳属菌 国家高技术研究发展计划［863计划资助课题（课题编号2002AA322060）］（Dothiorella gegaria，99006）1株，来源于怀柔板栗种子;粉红聚端孢霉（Trichothecium rosoum，99015）1株，来源于怀柔板栗;黄萎轮枝霉（Verticilium alboatrum，98026）1株（以上3株由北京林业大学森林病理教研室提供），共计11株。

1.4 培养基 马铃薯培养基（PDA）和沙氏液基（SDB）按常规方法配制。

2 实验方法 ^［4］

2.1 实验样品提取 称取侧柏叶200g，用10倍量的石油醚脱脂2次，再用10倍量的甲醇回流提取3次，减压回收溶剂，得到侧柏叶的提取物。减压干燥，备用。

2.2 实验药物制备 称取侧柏叶的提取物，用少量的DM_ˉSO溶解，提取物配制成浓度为36.8mg/ml的溶液，保存于4℃冰箱供实验使用。将药液用沙氏液基倍比稀释，使侧柏叶提取物各试管的实验终浓度为18.4～0.07mg/ml（含6%DMSO）。

2.3 菌悬液的制备 将受试菌株经PDA培养基活化2次，再取菌溶于2ml0.9%的生理盐水中制成菌悬液，在振荡器上振荡15s，用血细胞记数板将其浓度调至1×10 ⁴ ～2×10 ⁴ CFU/ml。

2.4 接种 以含6%DMSO的沙氏液基作为溶剂对照，以沙氏液基不加药物作生长对照，分别将各菌悬液10μl接种于各浓度的试管中，置35℃恒温箱中培养。