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Li Zhifu，Zhang Guohao，Li Yanli
Zhuzhou Institute for Drug Control of Hunan Province，Zhuzhou，412008.
【Abstract】 Objective To study the influence on the results of the dissolution determination of the Roxˉithromycin preparation by the temperature and the concentration of sulphate acid solution.Methods Two-factors cross design of the experiments and the spectrophotometrywere used，the data was analysed by the scientific statistics.Results There were significant difference between the absorbance of the Roxithromycin solution which were treated with the different temper
ature and the different concentration of sulphate acid solution（P<0.05）.There was also sigˉnificant introduction between the two factors on the absorbance of the Roxithromycin solution（P<0.05）.The results of the dissolution determination of the Roxithromycin preparation were different which was treated with the different kinds of the sulphate acid thatwere manufactured by the different factorys.Conclusion The method of the dissolution determination of the Roxithromycin preparation was recommended，which was treated with the concentration（75→100）V/V
of the sulphate acid and the water bath（60℃）for30minutes.
Key words temperature sulphate acid roxithromycin dissolution
罗红霉素片（胶囊、颗粒）的溶出度测定方法，在我国现行的药品标准 ［1，2］ 中均系用硫酸显色后，采用分光光度法测定。但两个标准对供试液的显色处理方法不一致。实验中，我们发现不同的硫酸浓度以及不同的环境温度对罗红霉素溶液吸光度的影响十分明显，对制剂溶出度的测定结果也有较大的影响。对边缘产品而言，有时会得出完全不同的结论，因此必须引起高度注意。
1 仪器、试剂与试样
1.1 仪器 UV-265型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）;ZRS-8C智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）;
1.2 试剂 硫酸（分析纯:①上海振兴化工二厂批号9512033;②湖南省株洲市开发区石英化玻有限公司批号2002071001;③湖南省邵阳市化学试剂厂批号9301123;④湖南省株洲市化学工业研究所批号9904023）
1.3 试样 罗红霉素标准品（中国药品生物制品检定所批号130351-200102，952U/mg）。样品:Ⅰ.罗红霉素颗粒剂（牡丹江温春双鹤药业有限公司批号020407）;Ⅱ.罗红 霉素片（桂林制药厂批号011201）;Ⅲ.罗红霉素胶囊（浙江京新药业股份有限公司批号0204111）。
2 方法与结果
2.1 温度、硫酸浓度双因子交叉试验对罗红霉素溶液吸光度的影响
2.1.1 实验设计 以温度为A因素，设10℃、25℃、35℃、60℃4个水平;以硫酸浓度为B因素，设浓度（V/V）为（25→100）、（50→100）、（75→100）3个水平。按双因子交叉试验设计，共设12个处理，每一处理做6个重复。
2.1.2 精密称取罗红霉素对照品0.0429g，置500ml量瓶中，加乙醇8ml使溶解，加盐酸溶液（1→1000）定容至刻度，作为供试液。精密量取供试液5ml，置具塞纳氏比色管中，再加入用硫酸④制备成的与各处理对应的硫酸溶液5ml，各置对应处理的温度下显色30min，同法作空白，在482nm波长测定吸收值。
2.1.3 结果 不同处理下测得的吸收值见表1。
表1 不同的温度、硫酸浓度对应的罗红霉素溶液吸收值（略）
从对表1的比较可以看出，相同温度条件下，硫酸溶液浓度越高，罗红霉素溶液的吸收值越大。在硫酸溶液浓度相同的条件下，低浓度（25→100）时，35℃以下，吸收值都几乎接近于0，60℃时，吸收值有约10倍的增加;中等浓度（50→100）时，吸收值随温度升高而明显增大;高浓度（75→100）时，温度很低时，吸收值偏低，而当温度达到25℃以上时，各处理吸收值差异不明显。方差分析（F检验） ［3］ 结果显示，因素A、B对溶液的吸光度的影响差异均有非常显著性（P<0.01）。同时，因素A与因素B对罗红霉素溶液吸光度影响的交互作用也非常显著（P<0.01）。
2.2 几种不同处理下罗红霉素溶液的标准曲线 精密称取罗红霉素标准品约50mg，置50ml量瓶中，加乙醇10ml使溶解，并加盐酸溶液（1→1000）定容至刻度。摇匀，精密量取2.5，5.0，7.5，10.0，12.5ml分别置100ml量瓶中，加上述盐酸溶液稀释至刻度。摇匀，再分别精密量取5ml置具塞纳比色管中，按各不同处理（5，6，11，12）分别加硫酸溶液5ml，摇匀，分别置上面各处理对应的温度显色30min，同法作空白，在482nm波长处测定吸收值。计算回归方程，得到上面各处理的回归方程，见表2。。
表2 4种不同处理的回归曲线（略）
从表2可以看出，处理5和11与处理6和12比较，回归曲线有较大差异，表现在直线的截距和斜率有较大不同。处理6和12的回归方程非常接近，线性关系也好。这进一步说明了硫酸浓度达到（75→100），温度在25℃以上时，对罗红霉素溶液吸光度的影响无明显差异。
2.3 不同厂家的硫酸试剂对罗红霉素溶液吸光度的影响
精密称取罗红霉素标准品约40mg置500ml量瓶中，加乙 醇8ml使溶解，并加盐酸溶液（1→1000）定容至刻度，作供试液。摇匀，精密量取5ml，置具塞纳比色管中，再分别加入不同厂家的硫酸试剂（①→④）制成的（75→100）溶液5ml，摇匀，置60℃水浴中显色30min，同法作空白，在482nm波长处测定吸收值，结果见表3。
表3 不同厂家的硫酸试剂对应的罗红霉素溶液吸收值（略）
从表3可以看出，上述4个不同厂家生产的硫酸试剂，对同一浓度的罗红霉素标准品溶液在相同的温度下进行显色，得到的吸收值各不相同。比较平均吸收值，硫酸③号的最低，④号的最高。将4组数据进行统计学比较（t检验），结果:③号硫酸与其它3种硫酸比较吸收值显著偏低，差异非常显著（P<0.01）;①号硫酸分别与②号、④号比较以及②号与④号比较，它们之间的差异也达到了显著水平（P<0.05）。
2.4 样品测定 选取硫酸①、②分别稀释成（75→100）的溶液，对样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ按标准 ［1，2］ 规定的方法，依法进行对比测定，结果见表4。
表4 2种不同的硫酸试剂对样品溶出度的测定（略）
对于样品Ⅰ而言，由于属于边缘产品，分别用硫酸①、②试验，结果得出了相反的结论;对于样品Ⅱ、Ⅲ，虽然2组实验结论相同，可是两组平均值的相对偏差分别达到了1.4%、1.2%，表明它们的平均溶出量有较大差异。经统计分析（t检验），3组实验数据差异无显著性（P>0.05）。
3 讨论
3.1 温度、硫酸浓度对罗红霉素与硫酸的显色反应起着重要作用，溶液必须达到一定的温度，反应才能顺利进行。同时，硫酸作为该化学反应的底物，浓度越大，越有利于化学反应平衡向右移动，促进该化学反应的进行。室温下，硫酸浓度为（25→100）时，反应不明显。当硫酸浓度为（75→100）时，由于底物浓度增加了很多，同时由于浓的硫酸稀释时，放出大量的溶解热，使溶液系统的温度迅速升高（可达到60℃），反应得以顺利进行。但是环境温度很低时，溶液温度迅速下降，可能导致反应不完全。从相同硫酸浓度下，10℃与60℃2组吸收值的比较中就验证了这一点。《中国 药典》2000年二部罗红霉素片（胶囊）质量标准中规定的溶出度测定方法，硫酸溶液浓度定为（75→100），但是没有规定显色的温度。当冬季室温很低时，对结果有较大影响。国药局标准 ［2］ 中罗红霉素颗粒剂溶出度的检查，规定了显色温度为50℃，但硫酸浓度定为（50→100）。2个标准均值得商榷。建议选用硫酸浓度（75→100），60℃水浴显色30min为宜。
3.2 由于目前我们国家化学试剂的管理欠规范，硫酸试剂质量良莠不齐。实验中采用不同厂家生产的硫酸试剂进行试验，结果产生了显著差异。因此值得我们引起高度重视。
参考文献
1 卫生部药典委员会.中国药典（二部）.2000，389.
2 国家药品监督管理局标准WS-542（X-483）-99:罗红霉素颗粒剂.
3 杜荣骞.生物统计学，北京:高等教育出版社，1985，123-127;187-200.
作者单位:412008湖南省株洲市药品检验所