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1 仪器和材料
1.1 仪器 美国雅培公司生产的CD-1700血细胞分析仪。
1.2 试剂 CD-1700专用配套试剂（溶血剂、稀释液、清洗液）。
1.3 其他 校准物与质控液，全血校准液（迈克科技），全血质控物（由省临检中心提供）。
2 方法
2.1 按仪器维护保养要求，对仪器进行全面的维护，经常保持微孔的清洁，以保证CD-1700在正常条件下批内重复测定变异系数（RCV）在规定范围内，每次实验前血液分析仪用全血校准物校准仪器后，严格按仪器操作步骤进行平行测试。
2.2 用含EDTA-K 2 抗凝管，采集204例健康人静脉血2ml、轻轻混匀后，立即在血液分析仪CD-1700上平行测定3次，然后分别于5min、10min、20min、30min、60min，各测3次，并用全血质控物质同步监测仪器，分别计算其均值，按时间分组，分别利用多样本均数间显著性检验与配对t检验进行统计学分析。
3 结果
3.1 RBC、MCV、HGB各时间段所测结果利用多样本均数间显著性检验，差异无显著性（P>0.05），WBC在采血后0～30min内随时间延长其数量不规则递减，组与组之间差异有显著性（P<0.01），直方图小细胞群截距也随时间延长不规则下降，而血小板（PLT）随时间延长其数量呈不规则增多，组间差异有显著性（P<0.01）、直方图逐渐变得平滑，尾部逐渐降低。标本放置30min和60min所测的两组WBC与PLT进行配对t检验分析，差异无显著性（P>0.05），WBC和PLT直方图也均正常。如表1。
3.2 血小板聚集分为可逆聚集和不可逆聚集，当新鲜静脉血加入EDTA-K 2 抗凝瓶混匀后血小板即发生聚集反应，此时立即进行全血细胞测定，可逆聚集的血小板还没有解聚，会造成全血细胞分析结果误差。白细胞不同程度假性升高，直方图的小细胞群会出现一个很高的截距，血小板不同程度的假性降低，直方图就会出现锯齿波或尾部抬高。但抗凝血静置30min后，再进行测定，即可消除上述假性结果。
表1 204例静脉血放置不同时间各参数的均值比较
从表中可看出60min与30min测定值差异无显著性（P>0.05），30min与20min测定值差异有显著性（P<0.05）。
4 讨论
血小板膜分内膜和外膜，外膜围绕胞质形成浆膜，并延伸到胞质内部并折叠形成开放微小管系统、它是血小板摄取和释放的通道。质膜内侧附着许多微丝，其主要成分为肌动蛋白的肌凝蛋白，与微管环周束共同支持伪足的形成 ［1］ 。当新鲜静脉血离体加入EDTA-K 2 抗凝瓶内，管壁周围的全血外环境及温度发生改变，使血小板形态发生变化。血小板外膜形成的微小管游离端向外伸展、或因肌动蛋白纤维丝向中心方向延长时遇到阻力而产生向膜外方向的反作用推力，从而在血小板周围形成丝状伪足，数个这样血小板的伪足相互缠绕，形成血小板可逆聚集体。其体积一般和淋巴细胞大小相似。在使用阻抗法作白细胞计数时，由于这种血小板可逆聚集体不被溶血剂溶解，它便会产生淋巴细胞样脉冲被计入白细胞的小细胞群而干扰白细胞计数结果。血细胞计数对每个细胞检测显示的脉冲大小除与细胞大小有关外，还与溶血剂的种类、稀释液的渗透压、离子强度、电导率、仪器出厂时仪器内固定的孔电流和脉冲增益等因素有关。
同时，由于血小板发生聚集，在阻抗法作血小板计数时，聚集体所产生的脉冲大于仪器预设的单一血小板脉冲值，因而就不会计入血小板结果内，从而使血小板数量减少。由于EDTA-K 2 有抑制血小板聚集的作用，阻止了血小板的进一步不可逆聚集，从而避免了血小板变性释放出ADP、5-羟色胺及内源性钙离子等。可逆聚集血小板随着标本放置时间的延长逐渐解聚而能够形成均匀分布的单个血小板。故血小板解聚的原因可能有:（1）抗凝剂EDTA-K 2 能使血小板形态发生改变。由盘状变成球状，从而使可逆聚集血小板的伪足回缩到血小板胞质内，血小板相互缠绕的伪足就可解除 ［2］ 。（2）可逆聚集的血小板由于形态有所改变及伪足的形成。增大了血小板表面积，其表面负电荷相应增大，同性电荷的排斥力也就相应增强。（3）温度升高，分子运动速度越快。温度对可逆聚集血小板解聚的影响尤其在用预稀释方法作全血细胞测定中更为明显。（4） 溶血剂的加入量、溶血时间和仪器检测的清洁度有关，因此必须保持微孔的清洁，才能保证仪器测定的可靠性 ［3］ 。原因:经EDTA-K 2 抗凝的全血标本，在采血30min后进行全血细胞分析，可提高结果的准确性。但需排除化疗、血小板减少性紫癜、白血病及造血系统异常等疾病。
参考文献
1 马文斯，林其燧.血小板微粒子及其检测方法研究进展.中华检验医学杂志，2002，25（1）:55.
2 丛玉隆.当代血液分析技术与临床，北京:人民卫生出版社，1997，34.
3 周洪华，罗明.溶血剂对白细胞形态的影响.中华医学检验杂志，1997，20:87.
作者单位:721300陕西省宝鸡市陈仓医院