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【关键词】 哮喘 慢性支气管 气道炎症 炎症细胞
The clinic value probe of induced sputum cells analysis to the asthma patients
Yang Ruisheng，Xie Haiying.
Songgang People's Hospital of Shenzhen Municipal，Shenzhen518105.
【Abstract】 Objective To probe the differences of induced sputum cells of nifferen various diseases patients.Methods 29cases of acute asthmatic patients（A group），30cases of chronic bronchitis patients in acute period（B group）and14cases of non-airway diseases patients（C group）were made through airway reaction test，sputum induc-ing an handling.Thedifferences of sputum cells structure of three groups patients were analyzed by statistic software SPSS10.0.Results The eosinophils cells in A group were high than those in B or C group（19.8%vs5.4%、1.3%）;the neutrophil cells inflammation were mainly in B group（66.4%vs45.3%、24.1%），but the phagocytes were mainly in C group（71.9%）.The negative correlation in certain degrees was showed between the percentage of neu-trophils cells and FEV1（RR=0.470，P=0.024）.Conclusions The eosinophils cells must be the possible impor-tance effects in the asthma airway inflammation，and the neutrophil cells might be the possible importance effects in the pathogenic process of asthma.
【Key words】 asthma chronic bronchitis airway inflammation inflammatory cells
作为诱导痰检测的另一重要部分—细胞学分析此前因受处理水平的限制，长期以来仅用于肿瘤细胞学的定性分析。近年来由于发现二硫苏糖醇（DDT）能有效溶解痰液粘蛋白、稀化痰液，且不影响细胞活动性，从而使研究人员可以对痰液细胞进行分类计数，从而使痰液细胞学检测受到较大关注。本文通过对比哮喘、慢性支气管炎、非气道疾病三组患者痰液细胞构成的差异性，来探讨不同疾病患者诱导痰细胞学的不同之处。
1 试验对象与方法
1.1 试验对象及分组 A组:急性发作期哮喘患者29例（符合1997年第二届全国哮喘学术会议修订的《支气管哮喘防治指南》的哮喘诊断标准 ［1］），其中男性21例，女性8例，年龄为18～67岁，平均48±13岁。本次有喘息、胸闷、咳嗽、咳痰等不同程度的症状，气道反应性试验均阳性参按GINA标准 ［2］ 进行症状分级，其中一级3例，二级8例，三级12例，四级6例。B组（阳性对照组）:急性发作期慢性支气管炎患者30例（包括单纯型和喘息型，符合1979年全国慢性支气管炎临床专业会议修订的“慢性支气管炎临床诊断标准” ［3］），男性18例，女性12例，年龄48～65岁，平均53±9岁，病程6～21年不等，本次有咳嗽、咳痰、或伴有喘息等症状。C组（阴性对照组）:选取无肺部疾患的消化道疾病患者14例（浅表性胃炎3例，胃溃疡7例，十二指肠溃疡4例），其中男性11例，女性3例，年龄29～54岁，平均41±11岁，既往均无哮喘或慢支炎病史，亦无吸烟史。
1.2 气道反应性测定 先测定1秒用力肺活量（FEV1）基础值，测2次，取最高值。FEV1基础值>70%预计值者，进行激发试验;FEV1基础值<70%预计值者，进行扩张试验。（1）支气管激发试验测定步骤（计量法）:先测定吸入生理盐水后的FEV1，共2次，取其高值。然后依次吸入3.125mg/ml～50mg/ml的组胺，直至FEV1较吸入生理盐水后FEV1降低≥20%，或组胺达到最高剂量，终止试验。使FEV1降低20%所需药物累计量<7.8μmol为气道激发试验阳性。（2）支气管扩张试验;先测定基础FEV1，然后用定量雾化吸入器（MDI）吸入400μg舒喘灵，15min后重复测定FEV1，计算FEV1的改善率，改善率≥15%为支气管扩张试验阳性。
1.3 痰液诱导及处理 嘱三组病人清洁漱口后，先预防性吸入200μg沙丁胺醇，然后超声雾化吸入3%高渗盐水5～8ml诱导咯痰、并咯于培养皿中。为了减少唾液的污染，选取咯出痰中的成形、粘稠部分置于干净试管中称重，然后加入等重的1%DDT在室温下充分溶解并离心，离心痰液制成痰涂片，痰涂片用Wright染色液染色后，在高倍镜下数250个完整的炎性细胞（嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、吞噬细胞），并计算各自百分比率。
1.4 统计学方法 数据输入SPSS10.0统计软件包进行统计分析，数值以ˉx±s，组间比较用t检验，相关性分析用等 级相关。
2 结果
2.1 三组患者诱导痰炎性细胞组成的差异性 见表1。表1 A、B、C三组患者诱导痰中炎性细胞构成比分析（略）注:Mar代表吞噬细胞，Neu代表中性粒细胞，Eos代表嗜酸粒细胞，Lym代表淋巴细胞哮喘组嗜酸粒细胞百分率显著高于慢支炎组、非气道疾病组（19.8%vs5.4%、1.3%）;慢性支气管炎组表现为中性粒细胞性炎症（66.4%vs45.3%、24.1%），而非气道疾病组以吞噬细胞（71.9%）为主。
2.2 A组诱导痰嗜酸粒细胞与FEV1的相关性 A组诱导痰中嗜酸粒细胞百分率与FEV1表现出一定程度的负相关，计算其相关系数r为0.470，P=0.024。
3 讨论
20世纪70年代末，体外实验证实嗜酸粒细胞是一种毒性细胞，可以通过抗体介导杀死蠕虫、原虫、肿瘤细胞、鸡红细胞等 ［4］。直到这时，人们才想到这种在正常情况下体现出来的防御毒性作用是否会在特殊条件下如哮喘发作时损伤组织、导致发病。此后，相关研究证实嗜酸粒细胞是通过释放胞浆中的主要碱基蛋白MBP、嗜酸粒细胞阳离子蛋白ECP、嗜酸粒细胞过氧化物酶EPO、嗜酸粒细胞衍生性神经毒素EDN等毒性颗粒蛋白损伤靶器官 ［5］ ;并且活体实验表明这些颗粒蛋白是造成哮喘特征性表现———气道高反应的主要因素之一 ［6］ 。从而确定了嗜酸粒细胞在哮喘发病机制中的重要地位。
本试验所选取的发作期哮喘患者诱导痰分析显示:嗜酸粒细胞百分率的平均数为19.8%，最高者达72%。明显高于其他两组患者，再次印证了嗜酸粒细胞增多这一哮喘发作的突出表现。同时，统计学显示哮喘患者痰中嗜酸粒细胞百分率与FEV1表现出一定程度的负相关（r=0.470，P=0.024）。说明嗜酸粒细胞对于哮喘气道炎症中有较重要的作用。但因不是完全相关，这一点也提示FEV1的改变并非仅由气道局部浸润的嗜酸粒细胞决定，还存在其他因素的参与。此外，在所选取的哮喘患者中，有14例痰中中性粒细胞百分率超过50%，甚至其中有2例嗜酸粒细胞仅占1%、2%，未表现出嗜酸粒细胞增多的特征。这2名患者年龄分别为45岁、37岁，哮喘病史均有20余年。本次发作有典型的喘息症状，体检双肺有广泛哮鸣音，吸入沙丁胺醇200μg后FEV1分别改善34%、26%。痰中中性粒细胞比例为89%、85%。Turner等观察了33例发作期轻度哮喘患者的痰中细胞分类，结果显示其中近半数患者（16例）嗜酸粒细胞比例小于4%，而表现为中性粒细胞增多性炎症，且在吸烟史、激素使用等方面与其余18例无明显不同 ［7］。虽然研究表明对哮喘患者气道行变应原激发试验所致的迟发相反应首先表现为中性粒细胞局部浸润 ［8］ ，而对其在哮喘发病中起何种作用目前仍有较大分歧。Marsh研究小组对IgE致敏的新西兰白兔进行过敏原激发后，发现中 性粒细胞大量出现在支气管肺泡灌洗液中 ［9］。并且随后的实验显示，用氮芥抑制的方法耗尽血中的粒细胞，再予以富含中性粒细胞的细胞悬液，能够恢复过敏原介导的迟发相反应，并伴有气道高反应发生 ［10］ 。但Hutson小组观察卵蛋白致敏的大鼠发现，在致敏原激发的迟发相反应中，虽然支气管肺泡灌洗液分析表明在嗜酸粒细胞浸润之前先出现中性粒细胞局部增多，且予以色甘酸二钠可抑制中性粒细胞浸润及早期气道阻力增加，但是预先给以兔抗鼠中性粒细胞的血清在抑制中性粒细胞浸润肺部的同时并未影响过敏原诱发的气道阻力增加，似乎提示此种动物模型的中性粒细胞增多是继发于支气管痉挛，并非迟发相反应所必需 ［11］ 。
目前对于中性粒细胞在哮喘发病过程中的作用较为统一的认识是其合成并释放的弹性蛋白酶为促进气道粘液腺分泌的主要刺激物之一 ［12，13］ 。虽然对于中性粒细胞在哮喘气道炎症中的作用和地位尚未完全明确，但是，一方面多个试验证实哮喘发作时靶器官有中性粒细胞浸润的证据;另一方面，活化的中性粒细胞能够通过释放炎性介质造成组织炎性损伤，且其介质能增加支气管组织对刺激的反应性。因此，以上均支持中性粒细胞在哮喘发病机制中可能起了重要的作用。
参考文献
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作者单位:518105广东省深圳市松岗人民医院