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乙型肝炎病毒为嗜肝病毒,在电镜下血清标本有3种抗原颗粒:小球型颗粒、杆状颗粒和dane颗粒。Dane颗粒就是乙肝病毒。它是双壳结构,由囊膜和核衣组成,内核表面有核心抗原,内含e抗原,环状DNA和DNA-P。其中DNA-P活性的高低是乙肝病毒活性和繁殖程度的灵敏标志。由于DNA-P在乙型肝炎病人血清中含量甚微,以至其他检验方法难以检测。现在我院引进了高科技检测仪SN-695A型放免r测量仪,从根本上解决了这一技术难题,从而为临床医生在对乙肝病人诊断中提供可靠依据。
1 原理
乙肝病毒颗粒+NP-4037℃DNA-P+125I标志物→125I-DNA→测放射性
当反映条件控制一定时,生成125I-DNA量与DNA-P活性成线性关系,所以测量生成的125I-DNA的放射性就可以代表血清DNA-P活性。
2 试剂
2.1 NP-40。
2.2 125I工作液(由上海海研医学生物技术中心提供)。
3 测定方法
3.1 取0.1ml血清于圆底塑料管中,加20mINP-40溶液,混匀,于37℃水浴中温育30min。
3.2 取出试管,加0.1ml125I工作液,混匀,于37℃水浴中温育3h。
3.3 取出试管,加入一颗玻璃珠,加3ml 15%三氯乙酸溶液沉淀125I-DNA,4000转/min离心5min,弃清液。
3.4 加0.2ml 15%三氯乙酸溶液,然后将试管置于旋涡混匀器上混匀1min,至沉淀成无颗粒的匀浆状为止。
3.5 加3ml 15%三氯乙酸溶液洗涤沉淀,4000转/min离心3min,弃清液。
3.6 加0.2ml 15%三氯乙酸溶液,然后将试管置于旋涡混匀器上混匀1min,加3ml 15%三氯乙酸溶液洗涤沉淀,4000转/min离心3min,弃清液。
3.7 重复操作“6”一次。
3.8 测沉淀放射性。凡放射性等于或超过诊断限者为阳性,低于诊断限者为阴性。
诊断限=x(放射性平均值)±2SD
4 结果和讨论
通过放射性免疫检查DNA-P的活性,具有灵敏高、特异性强、重复性好和早期诊断等优点。DNA-P活性的高低代表乙肝病毒的繁殖程度,传染性的强弱。乙肝病毒携带者与乙肝病人本身是否具有传染性及治疗中的乙肝病人的恢复程度在很大程度上依赖于DNA-P活性的检测。
乙型肝炎遍布全世界,我国乙型肝炎病人约占人口的10%左右[1]。每年因乙型肝炎引起的肝硬化和肝癌导致死亡的病例很多,所以DNA-P活性的检测为乙肝病人在临床的早期诊断、早期治疗、早期保健,提供重要的依据。
【参考文献】
1 尹伯元.放射免疫分析在医学中的应用.北京:原子能出版社,1991,12.
作者单位: 164000 黑龙江北安,北安市第一人民医院检验科
(编辑:齐 永)