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【摘要】 目的 用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC/ESI-MS-MS）法分析琥珀酸氯霉素各组分的化学成分。方法 采用HPLC/ESI-MS-MS法对琥珀氯霉素中的化学成分进行初步研究。液相色谱条件为色谱柱：Agilent C18 2.1mm×250 mm；流动相：流动相0.05M甲酸铵用甲酸调pH至4.0 /乙腈=80/20,流速0.2ml/ min,检测波长276nm；质谱条件为离子肼电喷雾质谱仪，离子源：ESI；检出模式：负离子检测。结果与结论 得到了样品MS以及选择离子对应MS/MS质谱图，鉴定出琥珀酸氯霉素中未知成分的化学结构式,为工艺开发和质量控制提供依据。
【关键词】 琥珀酸氯霉素;高效液相色谱;质谱
【Abstract】 Objective A HPLC/ESI-MS method for relative compounds of chloramphenicol succinate was established. Method A HPLC/ESI-MS method studied on relative compounds of chloramphenicol succinate ;Column:an Agilent ODS column 250×2.1mm;Mobile phase: 0.05M ammonium formicate buffer PH4.0/acetonitrile=80/20 ,flow0.2ml/min, and λ276nm;Mass:trap ion mass;source:ESI;Scan mode:negative ion scan.Results 4 compounds were isolated by HPLC, the two unkown compounds were distinguished by ESI-MS and MS-MS.Conclusion This method providing useful information for study and quality control of chloramphenicol succinate.
【Key words】 chloramphenicol succinate；HPLC; mass-spectrum
琥珀酸氯霉素（Chloramphenicol succinate）（结构见图1）,D-苏式-（-）-N- ［α－（羟基甲基）-β-羟基－对硝基苯乙基］-2，2-二氯乙酰胺α－琥珀酸酯。由氯霉素和琥珀酸酐反应制得的氯霉素酯性化合物，在体内很快分解成氯霉素显示抗菌活性，其抗菌谱、作用、用途和不良反应与氯霉素相似。静脉注射血药浓度高，可进入脑脊液。本品排泄快。琥珀酸氯霉素相关成分的研究未见报道。本文利用RP-HPLC分离得到4个组分，并利用ESI-MS-MS技术鉴定了两个未知成分。
1 试药和仪器
1.1 试药 琥珀酸氯霉素（由海正药业提供）；乙腈，色谱纯（美国Fisher公司）；其余试剂均为分析纯。
1.2仪器 美国Agilent 1100 液相色谱仪,包括G1322A在线脱气机、G1312A二元泵、G1314A可变波长检测器、G1313A自动进样器、G1316A柱温箱。Finnigan LCQ Advantage 离子肼质谱联用仪。
2 实验方法
2.1 液相部分 Agilent 1100型液相色谱仪，色谱柱：Agilent C18 2.1mm×250mm；流动相：0.05M甲酸铵用甲酸调pH至4.0/乙腈=80/20，流速0.2ml/min，波长276nm,柱温:室温，进样方式为自动进样。
2.2 电喷雾质谱仪 离子源：ESI；检出模式：负离子形式检测；电离电压：4.5 kV；电喷雾接口干燥气（N2）流速50，辅助气流量为10,二级碰撞能量为18。
2.3 统计学处理 Finnigan Xcaliber 1.3 数据处理系统。
2.4 供试液的制备 精密称取琥珀酸氯霉素0.025g，置50ml容量瓶用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
4 实验结果
4.1 HPLC分离 琥珀酸氯霉素的HPLC色谱图见图2，图中出现4个色谱峰，它们的保留时间分别为9.14、10.43、12.45、14.51min，其中2#峰为琥珀酸氯霉素主成分。
4.2 ESI-MS-MS确认组分 见图3。采用系统提供的ESI-MS与MS-MS功能进行质谱检测，1#峰［M-H］-分子离子峰321/323/325丰度比近似于9/6/1，表明分子中有两个-Cl元素，此峰得到的质谱信号和液相保留时间与氯霉素相同，1#峰应为氯霉素。图2 样品的色谱图图3 琥珀酸氯霉素的MS谱图 3#峰有［M-H］-分子离子峰421/423/425丰度比近似于9/6/1，分子中有两个-Cl元素，此成分应与主成分有相同的分子量，且其二级质谱碎片与主成分相同，可推断3#峰应为琥珀氯霉素异构体。
4#峰有［M-H］-分子离子峰521/523/525丰度比近似于9/6/1，分子中有两个-Cl元素，分子量比主成分多100，此成分应为另一性C上的-OH与琥珀酸成酯后的产物，且母离子521的二级质谱碎片有421、321，可推断4#峰应为双琥珀酸氯霉素。琥珀酸氯霉素及各相关成分的LC/MS数据及鉴定结果汇总于表1。表1 琥珀酸氯霉素及各相关成分的LC/MS数据
5 讨论
氯霉素光学异构体分子中C-1和C-2是两个手性中心，琥珀氯霉素异构体可能是由于氯霉素中异构体引入产生。
随着反应的加剧，双琥珀酸氯霉素产物会不断升高。
明确琥珀酸氯霉素中各成分的名称来源后,为改进其合成工艺、提高成品质量提供参考依据。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，二部.北京：化学工业出版社，2005，679.
2 SJ Soldin, C Golas, P Rajchgot, et al. The high performance liquid chromatographic measurement of chloramphenicol and its succinate esters in serum. Clinical Biochemistry, 1983, 16（ 3）: 171-177.
作者单位：318000 浙江台州，浙江海正药业有限公司