正交设计法研究益复康口服液的最佳制备工艺

【摘要】  目的 研究益复康口服液的最佳制备工艺。方法 正交设计法，提取方法、溶媒用量、提取次数、乙醇浓度等4个因素，每个因素3个水平，选择L9（34）正交表。结果 提取方法为最重要因素，其次为提取次数，溶媒用量及乙醇浓度影响不大。结论 最佳工艺为：取人参、鹿茸、穿山甲，加5倍量的75%的乙醇，回流提取5次，每次40min，滤过，药渣与其余中药合并，加5倍量的水，煎煮5次，每次40min，合并滤液，浓缩至1：1，与回流液合并，加乙醇至含醇量为75%，静置48h，滤过，回收乙醇，加水至全量，115℃灭菌35mmin，放置5天，滤过，加0.5%活性炭，煮沸10min，滤过，备用。

【关键词】  益复康口服液;正交设计;制备工艺

    益复康口服液以人参、穿山甲、鹿茸、天门冬、沙苑子等中药为原料制备而成，用于肿瘤病人放疗、化疗引起的恶心、呕吐、白细胞及血小板减少症的预防和治疗。为保证制剂质量，用正交设计法研究其最佳制备工艺。

    1  实验材料

    人参、穿山甲、鹿茸、天门冬、沙苑子等中药，均符合《中国药典》2005年版一部有关规定。购自河南省新乡市药材公司。人参皂苷Rb1化学对照品，中国药品生物制品检定所提供。高效液相色谱仪HP1100，美国惠普公司生产。紫外分光光度计HP8453，美国惠普公司生产。

    2  正交设计

    2．1  因素-水平的选择  本研究重点考察提取方法、溶媒用量、提取次数及处理杂质时的乙醇含量4个因素，每个因素选择3个水平。列因素-水平表，见表1。表1  益复康口服液因素-水平表

    2．2  正交设计表的选择  本研究为4因素3水平，不考虑各因素间的交互作用，因此选择L9（34）正交表，正交设计表实验结果及数据统计分析结果见表2。表2  益复康口服液工艺正交表及统计分析

    3  实验方法

    3．1  样品液的制备

    3.1.1  水提醇沉法  取生药，加表2中规定量的水，煎煮规定的次数，每次40min，滤过，滤液浓缩到1：1，加乙醇至规定的含醇量，静置48h，滤过，回收乙醇，加水至100ml，115℃灭菌35min，放置5天，滤过，加0.5%活性炭，煮沸10min，滤过，备用。

    3.1.2  醇提水沉法  取生药，加表2中规定量、规定浓度的乙醇，回流规定的次数，每次40min，放冷滤过，滤液回收乙醇，加水至100ml，115℃灭菌35min，放置5天，滤过，加0.5%活性炭，煮沸10min，滤过，备用。

    3.1.3  分类提取法  取人参、鹿茸、穿山甲，按3味药的总量，加表2中规定量、规定浓度的乙醇，回流规定的次数，每次40min，滤过，药渣与其余中药合并，按其余中药总量加表2中规定量的水，煎煮规定的次数，每次40min，合并滤过，浓缩至1：1，加乙醇至规定的含醇量，与回流液合并，静置48h，滤过，回收乙醇，加水至100ml，115℃灭菌35min，放置5天，滤过，加0.5%活性炭，煮沸10min，滤过，备用。

    3．2  人参皂苷的测定  用HPLC法［3，4］。

    3.2.1  对照品溶液的制备  精密称取人参皂苷Rb1对照品5.8mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，备用。

    3.2.2  供试品溶液的处理  精密取样品5ml，置分液漏斗中，加正丁醇提取3次（15、10、10ml），分取正丁醇，水浴蒸干，用甲醇使溶解并稀释至10ml，备用。

    3.2.3  测定法  分别取标准溶液及样品溶液20μl，注入液相色谱仪，用甲醇：水（72：28）为流动相，记录色谱图，计算人参皂苷Rb1的含量。

    3．3  总吸收度的测定  取样品溶液0.1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，于275nm波长处测定吸收度。

    4  结果

    结果见表2。

    5  结果分析

    5．1  结果处理方法  分别以总吸收度、人参皂苷Rb1及二者的积为评价指标，最后以综合评价指标为准作评价。

    5．2  各因素影响  各因素的影响大小顺序为A>C>D>B，即提取方法最为重要，其次为提取次数，而含醇量及溶媒用量影响不大。

    5．3  各因素最佳水平  各因素最佳水平为A3B1C3D2。

    6  结论［1～5］

    最佳制备工艺为：取人参、鹿茸、穿山甲，加3味药总量5倍量的75%的乙醇，回流5次，每次40min，滤过，药渣与其余中药合并，加其余中药总量5倍的水，煎煮5次，每次40min，合并滤液，浓缩至1：1，加乙醇至75%，与回流液合并，静置48h，滤过，回收乙醇，加水至全量，115℃灭菌35min，放置5天，滤过，加0.5%活性炭，煮沸10min，滤过，备用。

    7  讨论

    益复康口服液是以人参、鹿茸补气，天门冬、玄参滋阴，沙苑子补肾，诸药合用，补气、益肾、滋阴，以增强机体免疫功能，对抗放疗、化疗对机体的损伤。

    结果表明,提取方法中人参、鹿茸、穿山甲以乙醇回流，再与其他药物合并后以水提醇沉法制备，可以使人参皂苷及其他成分尽可能多的提取，以减少损失，保证疗效。

    本研究中，测定人参皂苷Rb1含量，同时测定总吸收度，如此，可以比较全面评价工艺的合理性。

    高效液相色谱法测定人参皂苷Rb1，方法可靠，具有专一性；紫外分光光度法测定，在275nm波长处有特征吸收，无干扰。因暂时未取得对照品，故以总吸收度为评价指标。

    （致谢:本文承济宁市久益中药研究所申庆亮副主任药师指导并参与部分工作，谨诚致谢意。）

【参考文献】
  1 李伯廷. 植物药有效成分的提取与分离.太原：山西高校联合出版社，1993，262.

2 陆蕴如.中药化学.北京:学苑出版社,1995，303-304.

3 王继彦，李向高，郑毅男，等.鲜人参中水溶性人参皂甙的分离.吉林农业大学学报,1993，15（1）：25-30.

4 刘健明，宋安全.人参地上部分总苷工业化提取工艺的研究.中国中药杂志,1992，（5）：291.

5 姜岚.人参类注射液中人参总皂苷的提取工艺研究.中药通报,1998，（6）：25.

作者单位：453000 河南新乡,解放军第371医院