HPLC-ELSD测定灵芪加口服液中黄芪甲苷的含量

【摘要】  目的 用HPLC-ELSD测定灵芪加口服液中黄芪甲苷的含量。方法 色谱柱填料为十八烷基键合硅胶 ,流动相为乙腈-水；温度 40℃ ,气体压力3.5Bar。结果 黄芪甲苷在 0.864～12.96μg之间呈良好的线性关系 ；黄芪甲苷的平均回收率分别为 99.2% （RSD 1.7% ）；结论 该方法简便、准确、分离效果好 ,无干扰 ,可用于灵芪加口服液的质量评价。

【关键词】  HPLC-ELSD；黄芪甲苷；灵芪加口服液

    【Abstract】  Objective  o establish a method for determination of Astragaloside Ⅳ in Lingqijia Oral Solution by HPLC-ELSD.  Method  HPLC-ELSD was used in the quantitative analysis of Astragaloside Ⅳ.The column was packed with 5 μm Diamonsil C_（18） stationary phase. The mobile phase consisted of acetonitrile-water. The temperature was 40℃ and the pressure was 3.5Bar.Result  The linear range of the component was 0.864～12.96μg.The  average recovery  rate was 99.2% with RSD 1.7%. Conclusion  The method  is simple ,accurate and with a good separation result and can be used for  the quality control of Astragaloside Ⅳ in Lingqijia Oral Solution.

    【Key words】  HPLC-ELSD；astragaloside Ⅳ；lingqijia oral solution

    灵芪加口服液为内科虚证类非处方药药品，是以灵芝、黄芪、刺五加三种药材组成的中药复方制剂，功能主治为扶正固本，滋补强壮，宁心安神，用于心脾两虚所致的心悸失眠，倦怠乏力，食少便溏。为严格控制产品质量，笔者采用了蒸发光散射检测器（ELSD）作为检测手段，对灵芪加口服液中的黄芪甲苷进行含量测定研究。

    1  仪器与试剂

    1.1  仪器  高效液相色谱仪：日本岛津公司（LC-2010A）；检测器：蒸发光散射检测器（SEDEX 75）。

    1.2  试药与试剂 灵芪加口服液由黑龙江珍宝岛制药公司生产，对照品黄芪甲苷（0781-200311）为中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯；水为去离子纯化水，其他试剂均为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5μm，150mm×4.6mm）；以乙腈-水（32：68）为流动相。

    2.2  对照品溶液的制备  精密称定黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液。

    2.3  供试品溶液的制备  精密量取本品25ml，至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液20ml提取，弃去氨液,再用正丁醇饱和的水20ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

    精密吸取对照品溶液5μl、10μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，得到灵芪加口服液的色谱分离图，见图1。

    1.对照品                                        2.供试品

    图1  灵芪加口服液HPLC图

    2.4  仪器精密度实验  精密量取对照品溶液10μl（0.432mg/ml），重复进样5次测定峰面积，得平均峰面积3554170.2,RSD%=0.3（n=5），结果表明：本法的精密度良好。

    2.5  线性  精密量取对照品溶液（0.864mg/ml）1μl 、2μl 、3μl、4μl、6μl 、8μl、10μl、15μl，注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量的对数为纵坐标，以峰面积的对数为横坐标绘制标准曲线，得回归方程lgM=0.6859lgA-3.8713，r=0.9999，结果显示黄芪甲苷在进样量0.864～12.96μg内其对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系。

    2.6  重复性实验  取同一批样品按供试品溶液制备项下操作，灵芪加口服液中黄芪甲苷的含量为0.0630mg/ml,RSD=2.3%（n=6）,结果表明：本法的重复性良好。

    2.7  回收率实验  精密称取已知含量的同一批供试品10ml，精密加入黄芪甲苷对照品适量，按含量测定法测定，并计算含量，平均回收率为99.2%,RSD=1.7%（n=6）, 结果表明：本法的回收率良好。

    2.8  专属性  取灵芝15.0g，刺五加40.0g，按制法项下制成无黄芪溶液100ml，取对照品及阴性样品按含量测定方法试验，结果在与对照品相同保留时间未见色谱峰，见图2。1.对照品                                    2.阴性

    图2  灵芪加口服液阴性样品HPLC图2.9  检测限  将黄芪甲苷色谱峰测出的信号与空白溶剂测出的信号进行比较，以信噪比为3：1时注入仪器的量确定检测限，测得检测限为0.0864μg。见图3、4。

    2.10  定量限  将黄芪甲苷色谱峰测出的信号与空白溶剂测出的信号进行比较，以信噪比为10：1时注入仪器的量确定检测限，测得检测限为0.1728μg，见图5、6。

    2.11  样品测定结果  分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，按外标两点法测定，即得。结果在灵芪加口服液中黄芪甲苷的含量为0.0623mg/ml。

    图3  空白溶剂图4  检出限图5  空白溶剂图6 定量限3  讨论［1～3］

    黄芪中的黄芪甲苷为黄芪制剂质量检验的指成分，黄芪甲苷的含量是评价黄芪及其制剂的重要指标，黄芪甲苷在用紫外检测器时，仅在末端有吸收，在使用紫外低波长检测时，往往会受到干扰多，而且准确性较低。蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用质量型检测器，对所有的化合物均有响应，而对于结构类似的化合物其响应值几乎仅与待测物的质量有关，因此准确用于物质的定量。采用HPLC-ELSD法对灵芪加口服液中的黄芪甲苷含量测定，分离度好，重现性好，回收率高。

【参考文献】
  1 唐斌，杨杨，等.黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法概述.西南国防医药，2004,14（2）:175.

2 冯埃生，邹汉法，汪海林，等.影响高效液相色谱/挥发激光散射检测器检测性能基本因素的考察.药物分析杂志，1996，16（6）：414-416.

3 邓海根，曹禺震.高效液相色谱仪的通用型质量检测器-蒸发光散射检测器（ELSD）.1994，14（3）:61-63.

作者单位：150001 黑龙江哈尔滨，黑龙江省药品检验所中药室（△通讯作者）