HPLC-ELSD 法在注射用七叶皂苷钠质量控制中的应用

HPLC-ELSD 法在注射用七叶皂苷钠质量控制中的应用

李菁（浙江省医药管理局 杭州 310012）；叶文才（中国药科大学）

关键词: 高效液相色谱；蒸发光检测；指纹图谱；七叶皂苷钠


摘　要　HPLC 测定七叶皂苷钠，并用蒸发光检测器 (ELSD) 检测，得到 HPLC-ELSD 指纹图谱。对不同注射用七叶皂苷钠样品的比较研究表明，HPLC-ELSD 指纹图谱准确的显示了样品的质量，结果直观，可靠。
　　
　　目前测定七叶皂苷钠总皂苷的方法主要有三氯化铁比色法［1］和酸碱滴定法［2］，用于注射用七叶皂苷钠的含量测定。研究表明，目前上市的注射用产品除主要含有七叶皂苷钠 A，B，C 和 D 外，还含有少量的糖元、苷元、脱乙酰基的降解产物和其它杂质。由于比色法和滴定法专属性差，因而测定结果偏高，不能反映产品的真实质量。本文提出了用 HPLC 分离、蒸发光检测器 (ELSD) 检测注射用七叶皂苷钠，并将得到的色谱图定义为七叶皂苷钠 HPLC-ELSD 指纹谱图。指纹图谱简单明了，在质量标准中引入指纹图谱可以提高制剂的质量控制水平。方法可靠，实用。

1　仪器与材料

　　美国 Tsp 的 Specta System P1000 泵，进样器，Alltech 500 型蒸发光检测器 (ELSD) 和 Anastar色谱工作站；乙腈：色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司)，三氟乙酸为 Acros 试剂，注射用七叶皂苷钠样品 1～7 分别来自武汉爱民 (971210)、烟台绿叶制药有限公司(990528)、德国 MADAUS(806974)、武汉生化 (990523)、南京大学(9904204)、长春天诚(990601)、无锡生化 (980513)等。

2　测定方法

2.1　色谱条件：美国SUPELCO公司的DiscoverTMC-18　柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温为室温；流动相：乙腈 -0.05% 三氟醋酸(36∶64)，流速： 1.0 mL／min；漂移管温度：110 ℃；载气流速： 3.0 SLPM。
2.2　测定方法：将七叶皂苷钠的粉针剂样品溶于甲醇配成约 2 mg/mL 的溶液，取 20 μL 注入色谱仪，测定 ELSD 色谱图。

3　结果与讨论

3.1　七叶皂苷的 HPLC-ELSD 指纹图谱：在本文制定的色谱条件下，测得样品 1 的 HPLC-ELSD 谱图见图2样1。图中 20 min 至 40 min 之间的4个主峰为七叶皂苷钠A，B，C和D，15 min 左右的两个主峰为七叶皂苷钠E和F。10 min 以前的色谱峰为无机盐、苷元、糖元及其它杂质。直观的显示了样品中主要有效成分七叶皂苷A，B，C 和D、降解产物 E，F 和其它杂质的含量水平，不同样品具有不同形状的色谱图。研究表明，当 β 型七叶皂苷钠 A 和 B 与 α 型七叶皂苷钠 C 和 D 比例约为 7∶3 时，综合药效好，刺激性小。而具有这种组成的七叶皂苷钠，其 HPLC-ELSD 指纹谱中七叶皂苷A，B，C 和D 的色谱峰呈台阶式下降

　　综上所述，一个质量好的注射用七叶皂苷钠的 HPLC-ELSD 指纹谱图首先应该是杂质峰尽可能的少且小，其次应如图 2 那样，七叶皂苷钠四个主峰形状呈台阶式下降。
3.2　不同样品的指纹图谱：样1～7是不同来源样品的 HPLC-ELSD 谱图。这些样品按比色法均为合格上市产品。比较各图可知，样品 2 和样品 3 杂质峰较小，其它产品杂质含量均很高；表1列出了归一化法测得不同样品中主要有效成分七叶皂苷钠A，B，C和D、降解产物及其它杂质的含量。

4　结论

　　七叶皂苷钠的 HPLC-ELSD 指纹谱图直观准确的反应了产品的质量，如应用于药品的质量控制，将大大提高药品的质量控制水平，方法准确可靠，具有较好的应用前景。

参考文献

1，鲁/WYB 02-97,注射七叶皂苷钠
2，德国药典 (Deutsches-Arzneimittel-Codex),Aescin,A-030,1997