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【摘要】 目的 检测血清固定早期梅毒患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞水平，探讨细胞免疫与早期梅毒血清固定的关系。方法 流式细胞仪检测20例血清固定早期梅毒患者的外周血T淋巴细胞亚群及NK淋巴细胞，并与45例健康人对照。结果 血清固定组早期梅毒患者CD3、CD4淋巴细胞低于正常对照组，而CD8淋巴细胞高于对照组，NK淋巴细胞差异无显著性。结论 早期梅毒血清固定的患者机体内细胞免疫受到明显抑制及产生免疫不平衡，可能造成了梅毒螺旋体逃脱机体免疫监视而残存，成为引起血清固定的原因之一。
【关键词】 早期梅毒;血清固定;淋巴细胞亚群;流式细胞仪
Detection of peripheral blood lymphocyte subsets in early sero-resisitant syphilis
CHEN Xing. Department of Dermatology, Jiaxing Hospital of Force Police, Jiaxing 314000,China
【Abstract】 Objective To detect the T-lymphocyte subsets and NK cells of peripheral blood in early syphilis patients with sero-resistance after treatment and then explore the correlation of cellular immunity and sero-resistance.Methods T-lymphocyte subsets and NK cells in peripheral blood were measured by flow cytometry (FCM) in these 20 sero-resistant patients with early syphilis, and 45 healthy subjects were taken as controls.Results The sero-resistant patients had lower CD3 and CD4 lymphocytes (P<0.05), but higher CD8 cells as compared with the healthy, and NK cells exhibited no significant difference.Conclusion Cellular immunity imbalance and immune suppression can be present in sero-resistant patients with early syphilis, which may help Treponema pallidum to succeed in escaping the immune-monitoring of organism and survive. This may be one of the reasons of sero-resistance.
【Key words】 early syphilis; sero-resistance; lymphocyte subsets; flow cytometry
早期梅毒经正规驱梅治疗，大部分患者临床症状消失，非梅毒螺旋体抗原血清试验转为阴性，但有少数患者其非特异性梅毒螺旋体抗体滴度下降到一定水平便不再下降，表现为血清固定。对于发生血清固定的患者笔者在临床工作中发现，即使再给予重复驱梅治疗，其非梅毒螺旋体抗原血清试验仍难以转阴，说明对这类患者缺乏有效的治疗措施，本研究希望通过探讨发生血清固定的可能原因，找到有效的治疗方法来减少这种现象的出现。笔者应用流式细胞仪检测驱梅治疗后20例血清持续阳性的早 期梅毒患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞，并以45例正常人作为对照，比较两组观察对象的细胞免疫功能，探讨早期梅毒血清固定与细胞免疫的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 所有梅毒患者来自2005年2月—2007年12月重庆医科大学附属第二医院皮肤性病科门诊，经TPPA试验确诊，其中20例血清固定组患者平均年龄25.35岁，男6例，女l4例;另选45例正常人作为对照组，为门诊健康体检者，平均年龄29.73岁，男20例，女25例。所有观察对象HIV抗体初筛试验均为阴性，并排除了妊娠、患有肿瘤或其他可导致免疫力低下的疾病者以及失访者。
1.2 方法 所有梅毒患者按卫生部推荐的治疗方案用苄星青霉素进行驱梅治疗，疗程结束后每3个月随访一次，并复查TPPA及TRUST，到TRUST转为阴性或随访期满时抽血用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群及NK细胞。主要试剂有T淋巴细胞亚群单克隆抗体试剂盒(美国BECKMAN COULTER公司)，TPPA试剂盒(日本Fujirebio Inc公司)，TRUST试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司)，流式鞘液(美国Becton Dickinson公司);主要仪器有COULTEREPICS XL 流式细胞仪(美国BECKMAN COULTER公司)。
1.3 统计学分析 实验中计量数据以x±s表示，运用SPSS12.0统计软件分析，组间比较采用t检验，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 TPPA和TRUST试验结果 血清固定组治疗前后TPPA均为阳性，TRUST滴度为1:2～1:8不等，其中4例为1:2，15例为1:4，1例为1:8;正常对照组TPPA和TRUST均为阴性。
2.2 T淋巴细胞亚群及NK细胞测定结果 血清固定组患者CD3、CD4淋巴细胞明显低于正常对照组，而CD8淋巴细胞则明显高于对照组。两组观察对象的NK细胞值进行两两比较差异无显著性(见表1)。表1 外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞测定结果注：①t=-2.040,P=0.040; ②t =-3.270,P=0.002; ③t=2.769,P=0.008
3 讨论
经驱梅治疗后非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不转阴的现象称为血清固定。但对早期梅毒血清固定具体时间的界定尚无统一标准，有的以2年为限，有的以1年为限，也有定为6个月的[1]。如以2年为限，病程已肯定进入晚期，不利于早期诊断和治疗;如定为6个月，则观察时间显得较短，尚难以确定药物效果。由于本研究对象是限于早期梅毒患者，故笔者认为将TRUST持续阳性9~24个月定为血清固定较为合理。
机体产生抗梅毒螺旋体感染的细胞免疫主要是由CD3T淋巴细胞介导,其中CD4淋巴细胞在抗梅毒螺旋体感染中起决定性增强作用。介导迟发性超敏反应的T淋巴细胞主要是CD4+Th1细胞，可通过分泌IL-2、INF-γ促进自身分化、成熟，同时活化巨噬细胞、NK细胞，增强它们的吞噬能力。本实验中血清固定梅毒患者外周血CD3及CD4细胞显著降低，其分泌细胞因子的能力下降，使梅毒螺旋体(TP)的清除减少。另外，正常机体内Th1/Th2细胞网络间维持动态平衡，在血清固定梅毒患者，CD4细胞明显下降，其中主要是Th1细胞的减少，使得Th1/Th2动态平衡向Th2方向移动，Th2细胞发挥的免疫抑制作用相对突出[2,3]。Th2细胞可通过分泌IL-10和TGF-β阻遏由Th1介导的细胞免疫应答，使得机体保护性清除TP的免疫功能下降。 CD8淋巴细胞在抗螺旋体感染的免疫功能主要是抑制机体细胞免疫反应，同时还可抑制梅毒螺旋体制动抗体的产生。本研究中血清固定梅毒患者外周血CD8淋巴细胞显著高于健康人群，增强了抑制细胞免疫的作用，使制动抗体生成减少。张晓东等[4]研究发现二期梅毒疹中CD4/CD8比值降低，说明CD8淋巴细胞在局部产生了一定的免疫抑制作用，拮抗了CD4细胞介导的免疫反应，造成TP在体内残留、扩散，并可发生晚期梅毒的组织损害。 本试验中两组观察对象的外周血NK细胞差异无显著性，表明血清固定梅毒患者外周血中NK细胞在数量上较正常人无明显降低。但由于NK细胞是一种抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)的效应细胞，必须在抗体结合靶细胞时才能发挥作用。而血清固定梅毒患者体内的梅毒螺旋体在治疗后数量大大减少，可供NK细胞攻击的靶细胞较少，使之不能充分发挥ADCC作用。同时有研究[5]发现，梅毒患者血清中含有与免疫球蛋白碎片有关的免疫抑制因子，可降低正常人的NK细胞活性。 故对于血清固定梅毒患者，笔者认为即使NK细胞数量无减少，但其活性已降低而不能有效清除梅毒螺旋体和梅毒抗体。 通过本研究，笔者认为早期梅毒血清固定患者体内存在细胞免疫失衡或细胞免疫抑制，是这类患者非梅毒螺旋体抗原血清试验持续阳性的原因之一。对于此类患者在常规驱梅治疗基础上能否加用免疫调节剂以增强机体免疫力，使之也能得到有效治疗而达到临床治愈和血清治愈的目的，其疗效可行后续研究。
【参考文献】
1 施辛，戚宝康.头孢曲松治疗早期梅毒血清固定近期疗效观察.中国麻风皮肤病杂志，2002，18(4)：348-349.
2 Lusiak M, Podwinska J. Interleukin 10 and its role in the regulation of the cell-mediated immune response in syphilis. Arch Immunol Ther Exp(Warsz), 2001,49(6):417-421.
3 Podwinska J, Lusiak M, Eaba R, et al. The patern and level of cytokines secreted by Th1 and Th2 lymphocytes of syphilitic patients correlate to the progression of the disease. FEMS Immunol Med Microbiol, 2000,28(1):1-4.
4 张晓东，脱朝伟，宋芳吉.早期梅毒皮损组织CD3、CD20和CD68的表达.解放军医学杂志，2002，27(11)：989-900.
5 吴志华.现代性病学,第2版.广州：广东人民出版社，2002,80-81.
作者单位：314000 浙江嘉兴，嘉兴武警医院皮肤科