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【摘要】 目的 观察肾白宁对大鼠糖尿病肾病模型CTGF表达的影响，并探讨其作用机制。方法 大鼠腹腔麻醉下进行左侧肾脏切除术，术后2周按照50mg/kg剂量，予以STZ腹腔注射;72h后，尾静脉取血，将空腹血糖≥16.7mmol/L者随机分为模型组、中药肾白宁组、洛汀新对照组，每组15只，另取15只为假手术组。CTGF检测采用免疫组化的方法。结果 12周后光镜下可见模型组肾小球毛细血管球萎缩、球囊腔略增大、肾小球出入球小动脉有轻度内皮细胞增生及纤维化、基底膜略增厚，远曲小管扩张，肾间质充血、水肿、血细胞浸润，并有轻度间质纤维化。模型组、中药组、对照组肾组织CTGF阳性表达较假手术组高，差异有显著性(P<0.01)，中药组、对照组与模型组比较阳性表达低(P<0.01)，中药组与对照组差异无显著性(P>0.05)。结论 具有滋补肝肾，益气固精，祛瘀化浊解毒之功效的肾白宁通过抑制肾CTGF表达，抑制细胞外基质增加和肾脏纤维化保护了肾功能延缓了DN的发展。
【关键词】 糖尿病肾病;肾白宁;CTGF
糖尿病肾病是糖尿病的主要并发症之一,已经成为终末期肾病的首要病因。早期的病理特征是肾脏肥大，肾小球基底膜增厚和系膜基质进行性积聚。几年来,导师应用肾白宁治疗糖尿病肾病取得了较好的临床疗效,因此我们以糖尿病肾病大鼠模型作为研究对象,探讨肾白宁对糖尿病肾病大鼠肾损害的防治作用机制。
1 材料与方法
1.1 药物 肾白宁：由哈尔滨世一堂研究所配制成浸膏(药物组成：黄芪50g，熟地黄20g，山药15g，山茱萸15g，牡丹皮15g，茯苓25g，泽泻15g，桑螵蛸35g，水蛭10g，白花蛇舌草45g，当归15g，益母草15g等)。洛汀新 (贝那普利， 北京诺华制药有限公司 批号：X1266)。
1.2 实验方法
1.2. 1 实验动物 清洁级健康SD雄性大鼠(200～240g)60只。
1.2.2 糖尿病肾病模型的建立 动物适应性喂养1周后开始实验。随机取15只为假手术组，假手术组大鼠在腹腔麻醉状态下,背部切口,剥离左肾脂肪包膜,关闭缝合切口。其余大鼠腹腔麻醉下进行左侧肾脏切除术，术后恢复2周。将STZ溶于0.1mol/L柠
檬酸缓冲液(pH4.4)中，避光条件下迅速配成浓度为1%STZ溶液。动物禁食12h后，按照50mg/kg剂量，予以STZ腹腔注射;72h后，尾静脉取血，测定空腹血糖，空腹血糖≥16.7mmol/L作为DN大鼠成模标准。
1.2.3 分组与给药 造模成功后大鼠随机分为模型组、中药组、对照组及假手术组各15只，共60只。各组自造模成功第1天起开始给药。假手术组、模型组：给予每日1次蒸馏水1ml灌胃;中药组:将肾白宁浸膏溶于生理盐水，配制成混悬液，以2.97g/(kg·d)(含生药量)灌胃，每日1次;对照组：洛汀新(贝那普利)溶于生理盐水，配制成混悬液，0.9mg/(kg·d)灌胃，每日1次。均给药12周,每2周称重调整剂量。给药期间每组大鼠分笼饲养,随意饮水,食用标准动物饲料。
1.2.4 观察指标及检测方法 结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor, CTGF)检测采用免疫组化的方法，并使用图像采集系统测定阳性反应面积，每张切片随机选取5个视野，每组分析15个标本。此项内容由黑龙江中医药大学附属第一医院病理科帮助完成。
1.3 统计学处理 所有数据均以〖x〗±s表示，采用SPSS 10.0软件进行统计学分析。
2 结果
12周后光镜下可见模型组肾小球毛细血管球萎缩、球囊腔略增大、肾小球出入球小动脉有轻度内皮细胞增生及纤维化、基底膜略增厚，远曲小管扩张，肾间质充血、水肿、血细胞浸润，并有轻度间质纤维化。模型组、中药组、对照组肾组织CTGF阳性表达较假手术组高，差异有显著性(P<0.01)，中药组、对照组与模型组比较阳性表达低(P<0.01)，中药组与对照组差异无显著性(P>0.05),见表1。表1 各组肾组织CTGF表达情况 注：与假手术组比较，*P<0.01;与模型组比较，△P<0.01
3 讨论
结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor, CTGF)作为转化生长因子(TGF)-β的下游调节因子以促进细胞外基质增加和肾脏纤维化参与DN的发生发展过程。Roestenberg等[1,4]报道1型糖尿病肾病患者与正常白蛋白尿的糖尿病患者相比较,血CTGF水平是升高的,并且与白蛋白尿和肌酐清除率相关。同时[2,5]发现在糖尿病鼠肾病的早期即有血、尿和肾组织中CTGF水平的增加。Riser等[3,4]研究发现,健康人群、4/6没有肾脏疾病的糖尿病患者,尿CTGF水平是比较低的,而在5/7有肾脏疾病的糖尿病患者,尿CTGF的排泄明显增加。本实验结果显示，中药组CTGF阳性表达明显少于模型组，与对照组比较差异无显著性。具有滋补肝肾，益气固精，祛瘀化浊解毒之功效的肾白宁通过抑制肾CTGF表达，抑制细胞外基质增加和肾脏纤维化，保护了肾功能，延缓了DN的发展。
【参考文献】
1 Roestenberg P, van Nieuwenhoven FA,Wieten L, et al. Connective tissue growth factor is increased in plasma of type 1 diabetic patients with nephropathy.Diabetes Care, 2004, 27: 1164-1170.
2 Roestenberg P, van Nieuwenhoven FA, Joles JA, et al.Temporal expression profile and distribution Pattern indicate a role of connective tissue growth factor (CTGF/CCN-2) in diabetic nephropathy inmice.Am J Physiol Renal Physio,2006, 290(6):F1344-F1354.
3 RiserBL,Cortes P,Denichilo M, et al.Urinary CCN2(CTGF) as a possible predictorofdiabetic nephropathy: Preliminary report.Kidney International, 2003, 64: 451-458.
4 涂晓文. 结缔组织生长因子:糖尿病肾病治疗的新靶点.国际泌尿系统杂志，2006，1:126-129.
5 董明.结缔组织生长因子:糖尿病肾病治疗的新靶点. 国际内科学杂志,2008,8：456-459.