决明退障丸对亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的影响

　　【摘要】  目的  探讨中药决明退障丸对硒性白内障大鼠晶状体脂质过氧化反应的抑制作用及其机制，寻求决明退障丸治疗老年性白内障的疗效机制。方法  参照张家萍等学者亚硒酸钠性白内障大鼠模型制作方法和不同时段（造模10天、20天、30天、40天）晶状体混浊程度裂隙灯显微镜分级记分，以及化学比色法测定晶状体谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6-PD）含量的方法，对80只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、中药预防组和中药治疗组同时进行中药预防和治疗作用的比较研究。结果  注射亚硒酸钠后，大鼠晶状体混浊程度分级记分不断增高， GSH-Px、G-6-PD活性逐渐降低，与正常晶状体比较差异有显著性（P<0.001或P<0.05）。中药预防组和中药治疗组晶状体混浊程度分级记分明显低于模型对照组，而GSH-Px、G-6-PD活性则明显高于模型对照组（P<0.05或P<0.001），其中以中药预防组作用优于治疗组（P<0.05），其造模40天的GSH-Px、G-6-PD活性接近正常对照组水平（P>0.05）。结论  决明退障丸具有明显的阻抑大鼠晶状体混浊发生发展的作用，能显著提高和恢复GSH-Px、G-6-PD活性，增强晶状体的抗氧化能力，阻止氧自由基连锁反应，抑制硒性白内障的形成，以早期预防用药作用更为突出，决明退障丸防治白内障的作用机制可能与其提高晶状体抗氧化损伤能力，清除氧自由基，抑制脂质过氧化反应有关。

　　【关键词】  决明退障丸；白内障；亚硒酸钠；晶体浑浊度；谷胱甘肽过氧化物酶；6-磷酸葡萄糖脱氢酶

　　Effect of the Jueming Tuizhang Wan on the activities of glutathione peroxidase and glucose-6-phosphate dehydrogenase in lens of rats with cataract induced by sodium selenite

　　LIU Jing-xia,ZHANG Xiao-dong,LV Rui-min,et al.

　　The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of TCM, Harbin 150040, China

　　【Abstract】  Objective  To investigate the effect of the Jueming Tuizhang Wan on peroxidation in rat selenite ateractous lenses, study inhibiting effect and mechanism of the Jueming Tuizhang Wan on prevent cataract induced by sodium selenite, and explore the therapeutic mechanism of the Jueming Tuizhang Wan to senile cataract.Methods  According to Zhang Jia-pangs method of establishing the model of sodium selenite-induced cataract in rats, and the cataract grading of lens opacity were examined periodically by slip lamp in different time-phase (10th day, 20th day, 30th day, 40th day), in addition, the activities of glutathione peroxidase(GSH-Px) and glucose-6-phosphate dehydrogenase （G-6-PD）were determined.  80 rats were divided randomly into natural control group, untreated cataract group, prevented group with standard dose herbs, and treated group with standard dose herbs, to make a comparative investigation in the effects of the herbs between the prevention and treatment.Results  After injection of sodium selenite, the cataract grading of ratslens opacity increased constantly, the activities of GSH-Px and G-6-PD reduced gradually, compared with the natural control group, the differences had remarkable significance (P<0.001 or P<0.05). The cataract grading of lens opacity in the prevented group and treated group were lower significantly than the untreated cataract group, but the activities of GSH-Px and G-6-PD  was higher markedly (P<0.05 or P<0.001).  Furthermore, the effects of the prevented group were better than the treated group (P<0.05),  the activities of GSH-Px and G-6-PD on the 40 th day in the prevented group was closed to the natural control group (P>0.05).Conclusion  The Jueming Tuizhang Wan can prevent and delay the advance of cataract grading of lens opacity, it has good action of antioxidation, it may enhance theactivities of GSH-Px and G-6-PD, and  inhibit formation of selenium-induced cataract, the effect ofpreventive giving herbs early is marked mostly. The preventive and therapeutic mechanism of the Jueming Tuizhang Wan to senile cataract maybe relative to improvement of activity of antioxidation damages in the lens, eliminate radicals and inhibit lipid peroxidation.

　　【Key words】  the Jueming Tuizhang Wan;cataract;sodium selenite;lens opacity;glutathione peroxidase;glucose-6-phosphate dehydrogenase   

　　目前，学术界广泛接受的老年性白内障（SC）病因是晶状体蛋白氧化和自由基产生学说。许多学者认为晶状体的某些酶活性下降是老年性白内障发病的重要因素［1］。我们自2003年6月～2005年3月采用亚硒酸钠性白内障大鼠模型，就院内制剂决明退障丸对白内障大鼠晶状体中脂质过氧化反应的调控作用进行实验研究，旨在通过动物实验研究探讨SC的发病机制和决明退障丸防治SC的作用机制，为其临床疗效提供客观实验依据。现将决明退障丸对亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6-PD）活性的影响作用报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验动物  选用健康Wistar大鼠80只，雌雄各半，12日龄，体重约25g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号：P00102004。药物：决明退障丸，由黑龙江中医药大学附属一院制剂室一次性生产，批号：20030623。主要试剂：GSH-Px 和G-6-PD 测试盒（南京建成生物工程研究所提供），亚硒酸钠（天津市天达净化材料精细化工厂生产）以及其他试剂均为国产分析纯试剂（同一批号）。主要仪器：见参考文献［2］。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  造模与分组给药  同参考文献［2］。

　　1.2.2  观察指标   于造模后第10、20、30、40天，分别随机抽取每组各5只大鼠（10眼）。以1%阿托品眼液散瞳后采用裂隙灯显微镜进行晶状体混浊程度分级记分观察记录，然后处死大鼠，立即摘除眼球，小心剥离晶状体，用冷生理盐水冲洗，用滤纸除去附着的水分、玻璃体和其他眼组织，称重，-80℃下冷冻保存备用。检测时取冷冻保存的晶状体低温下（4℃）制作匀浆并离心（3000r/min）取上清液。采用化学比色法测定晶状体中的GSH-Px和G-6-PD活性。晶状体混浊程度分级评分方法同参考文献［2］。

　　1.3  统计学方法  对实验数据进行方差齐性检验；两组间比较用t检验，计量资料以均数±标准差(±s)表示。

　　2  结果

　　2.1  不同时段白内障大鼠晶状体GSH-Px活力变化及决明退障丸调控作用的观察  见表1。

　　2.2  同时段白内障大鼠晶状体G-6-PD活力变化及决明退障丸调控作用的观察  见表2。

　　表1  不同时段各组晶状体GSH-Px活力比较（略）

　　注： t1为造模组与正常对照组比较；t2为中药预防组与正常组比较；t3为中药治疗组与正常对照组比较；t4为中药预防组与造模对照组比较；t5为中药治疗组与造模对照组比较；t6为中药预防组与中药治疗组比较。*P<0.001；**P<0.01；***P<0.05；△P>0.05；△△P>0.50

　　表2  不同时段各组晶状体G-6-PD活力比较 （略）

　　注： t1为造模组与正常对照组比较；t2为中药预防组与正常组比较；t3为中药治疗组与正常对照组比较；t4为中药预防组与造模对照组比较；t5为中药治疗组与造模对照组比较；t6为中药预防组与中药治疗组比较。*P<0.001；**P<0.01；***P<0.05；△P>0.05；△△P>0.50

　　3  讨论

　　相关研究证实，亚硒酸钠性白内障的发生和发展与自由基损伤有关［3］。SOD、GSH-Px、G-6-PD等酶类对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。SOD能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤。G-6-PD是磷酸戊糖代谢的第一个酶，其反应产物HADPH维持晶状体中还原型谷胱甘肽水平，对维持晶状体的透明性有重要作用。GSH具有抗氧化作用，可阻止自由基产生脂质过氧化反应，可保护晶状体膜的蛋白质及酶类使其活性基团-SH基免于被氧化而失活，从而保护晶状体细胞DNA免受氧化损害。本研究结果显示亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体中GSH-Px含量明显低于正常晶状体，该结果与文献［4］报道相符；同时还发现亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体中G-6-PD活力明显低于正常晶状体。说明亚硒酸钠性白内障形成与其晶状体内G-6-PD、 GSH-Px活性降低，抗氧化能力随之降低，脂质过氧化反应活跃，过氧化物聚集，晶状体受氧化损害而发生蛋白聚集变性相关。

　　本研究发现，模型对照组GSH-Px、G-6-PD活性较正常对照组和中药预防组、治疗组显著性降低，其变化程度有随白内障病程度延长而逐步明显的趋势，以造模30天后更为明显；决明退障丸预防组和治疗组都能明显提高硒性白内障大鼠晶体GSH-Px、G-6-PD活性，差异有显著性（P<0.05或P<0.001），其中尤以预防组效果更为明显，其造模40天时晶状体GSH-Px、G-6-PD活性接近正常晶体水平（P>0.05）。说明亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体组织内脂质过氧化反应活跃，有害过氧化物代谢产物的清除能力降低，决明退障丸对硒性白内障晶状体脂质过氧化反应具有良好的调控作用，可调节酶促系统，增强晶状体的抗氧化能力，通过提高和恢复晶状体GSH-Px、G-6-PD活力，清除有害过氧化物代谢产物，阻断脂质过氧化连锁反应，达到预防和治疗硒性白内障之功效。

　　【参考文献】

　　1  陈双厚，刘瑞华.复方参果液对大鼠半乳糖性白内障晶状体蛋白6-磷酸葡萄糖脱氢酶和钠钾三磷酸腺苷磷酸化酶活性的影响.中国中医眼科杂志，2002，12(2):82-83.

　　2  刘静霞,张晓冬,吕瑞民,等.决明退障丸对亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体脂质过氧化的影响.中国中医药科技,2005，12(3):143-145.

　　3  张伟.牛磺酸防治白内障的实验研究.国外医学·眼科学分册,1995,19(5):294.

　　4  陈双厚，刘瑞华.复方参果液对大鼠亚硒酸钠性白内障晶状体中巯基和谷胱甘肽含量的影响. 中国中医眼科杂志，2002，12(1):25-27.

　　*基金项目： 黑龙江省教育厅科学技术研究项目（编号：10543044）

　　作者单位： 150040 黑龙江哈尔滨，黑龙江中医药大学附属第一医院

　　(编辑：建  伟)