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【摘要】 目的 探讨神经生长因子（NGF）在子宫内膜异位症患者的异位内膜组织中表达情况及与痛经的关系。方法 采用免疫组化法检测神经生长因子NGF在28例子宫内膜异位症异位内膜与26例正常子宫内膜中的表达，分析神经生长因子NGF与EMs相关性，探讨神经生长因子NGF与内异症痛经的关系。结果 神经生长因子NGF在异位内膜中的表达高于正常内膜，有统计学意义。重度疼痛组比轻度疼痛组表达增高。结论 子宫内膜异位症中的异位内膜NGF有高表达，尤其是重度疼痛组，推测NGF与子宫内膜异位症痛经有关系。
【关键词】 子宫内膜异位症；神经生长因子；免疫组织化学；疼痛
Correlation between nerve growth factor NGF and pain in patients with endometriosis
GAO Hui，ZHANG Zhen.Departmont of Ostetrics and Gynecolegy，People’s Hospital of Linyi，Linyi 276000，China
［Abstract］ Objective To ivestigate the expression of nerve growth factor NGF in patients with endometriosis with and without pain.Methods Immunohistochemical methods were used to identify the expression of NGF in endometriotic（n=28）endometrium and nomal endometrium（n=26）.Results Increased expression of NGF in endometriotic was found as compared with nomal endometrium（P<0.05）Conclusion Our results suggest that NGF were overexpressed in endometriotic tissues，NGF could be involved in the development of endometriotic lessions.NGF may be relevant to the pathogenesis of endometriosis with pain.
［Key words］ endometriosis;nerve growth factor;immunohistochemistry；pain
子宫内膜异位症是育龄妇女的常见病、多发病，发病率逐年上升，但其发病机制尚未完全清楚。临床主要表现为痛经、不孕、盆腔包块。关于疼痛的基础研究甚少。神经生长因子（NGF）是最早发现的靶源性神经生长营养因子，到成年期参与外周炎性疼痛的发生和发展，是疼痛外周敏感化发生的重要介质之一。有学者推测NGF在子宫内膜异位症中存在表达，且与其发生发展，并与其主要症状痛经有密切关系。本研究采用免疫组化方法检测子宫内膜异位症异位内膜和正常子宫内膜中NGF的表达，以探讨其在子宫内膜异位症形成过程中的作用以及与痛经之间的关系，为子宫内膜异位症痛经的治疗提供新的思路。
1 资料与方法
1.1 一般资料 研究标本取自2007年3月至2008年6月在临沂市人民医院妇科因子宫内膜异位症住院的患者，年龄24～48岁，无其他内分泌、免疫和代谢性疾病，术前6个月未接受放疗、化疗或激素治疗，月经周期规律。
将患者分为两组：研究组:为EM患者，卵巢巧克力囊肿、腹膜紫蓝色结节病灶28例。所有患者术前按照视觉模拟评分法对痛经强度评分：无痛（0分），轻度疼痛（1～4分），中度疼痛（5～7分），重度疼痛（8～10分）。所有患者均经腹腔镜或开腹手术，所有标本在术后经病理核实。对照组：自2007年3月至2008年6月，在临沂市人民医院妇科因女扎术后要求再生育而行输卵管吻合术者，宫颈CIN1，术前或术后诊刮所得子宫内膜、经病理证实为正常子宫内膜26例。两组间年龄分布统计学差异无统计学意义（P＞0.05）,有可比性。
1.2 方法
1.2.1 标本采集和处理 两组患者均经手术中留取无菌组织标本，经10%甲醛固定，常规脱水包埋，制成石蜡块留用。
1.2.2 疼痛评分 根据视觉模拟评分法（VAS），采用中华医学会疼痛学会监制的VAS卡，记录疼痛程度。疼痛评估标准：轻度疼痛1～4分（如不适、重物压迫感、钝性痛、炎性痛）；中度疼痛5～7分（如跳痛和痉挛、烧灼感、挤压感和刺痛、触痛和压痛）；重度疼痛8～10分（如妨碍正常生活，无法控制）。
1.2.3 检测神经生长因子NGF水平 用羊抗人NGF蛋白多克隆抗体（武汉博士德生物公司生产）对标本进行免疫组化Elivision法染色，并进行显微照相。
1.2.4 结果判定和图像分析 阳性细胞以细胞质或细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性判断标准，用平均灰度反映阳性程度。随机选择5个具有代表意义的高倍视野，测量其各自灰度，取其平均值，作为该切片的灰度。
1.2.5 统计学处理 应用SPSS 10.0软件对数据进行统计学处理，所得数据均以均数±标准差（±s）表示，两组间的比较用t检验，多组间的比较用但因素方差分析。
2 结果
2.1 研究组异位内膜与正常对照组子宫内膜中NGF的表达 NGF在两组标本中均有表达，阳性细胞棕黄色颗粒可位于细胞质和（或）细胞核中，研究组异位内膜中表达显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 NGF在内异症有无疼痛组、对照组内表达 NGF在内异症疼痛组表达高于无痛组，差异统计学意义（P<0.05），而对照组阳性灰度值最低，与疼痛组及无痛组相比差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。
2.3 NGF在内异症疼痛组内膜的表达与其疼痛程度的关系 NGF在内异症重度疼痛组阳性灰度值最高，而在轻度疼痛组组织阳性灰度值最低，三组间比较差异均有显著性（P<0.05），见表3。 表1 NGF在对照组和内异症组子宫内膜中灰度的比较 表2 NGF在不同组间内膜内表达的比较
3 讨论
内异症所致疼痛的发病机制尚不完全清楚，目前也无有效的治疗方法，短期药物治疗，容易复发，长期治疗有严重的药物副作用，严重者还须行子宫及双附件的切除以缓解疼痛，大大影响了妇女的生活质量。
神经生长因子NGF能支持神经元存活，促进其生长、分化，维持其功能。在成年期也是炎性疼痛的重要中间介质，参与对伤害性刺激的痛觉过敏，在外周炎性疼痛机制中起重要的作用。近期研究发现，注射NGF使动物对疼痛和炎性刺激的敏感性增加，而给予NGF抗体明显降低动物对疼痛的反应。
本研究采用免疫组化法测定不同内异症患者组织神经生长因子的表达，结果表明，NGF在内异症组、对照组子宫内膜中均有表达，两组比较有统计学意义；且在内异症疼痛组子宫内膜标本阳性的灰度值明显高于无痛组，差异有统计学意义（P<0.05）。在内异症轻、中、重度疼痛组，三组间比较也均有统计学意义（P<0.05），其中NGF在内异症重度疼痛组组织中阳性灰度值最高，而在轻度疼痛组灰度值最低，说明NGF在异位内膜组织中有表达，且提示与患者疼痛的程度有关。
NGF导致内异症患者疼痛的作用机制推测可能与以下因素有关：子宫内膜异位症异位病灶可释放一些刺激神经纤维的分子如肿瘤坏死α（TNF-α），PGI2，PGE2和PGF2a及NGF使神经纤维生长，这些神经纤维有可能在介导疼痛中起重要的作用。由于异位内膜分泌神经生长因子NGF及两种NGF受体［1］即Trk-A和p75表达增加导致局部神经纤维生长［2］。Anaf等［3，4］指出，NGF在痛觉过敏中起很重要的作用，而且发现在所有不同子宫内膜异位症病灶中NGF都有表达。NGF本身是一种疼痛介质，能诱导与调控中枢疼痛传导有关的SP，CGRP和NF的表达。另外，NGF能增加感觉神经元的数量，选择性营养参与调节痛觉的小感觉神经纤维及交感神经结神经元。因而NGF在子宫内膜异位症中的过度表达可以解释疼痛与痛觉过敏的发生。
本研究结果证实：在子宫内膜异位症异位内膜中有NGF的表达，且随着疼痛的加剧，NGF的阳性表达率增高，NGF可能在内异症疼痛的作用机制中起重要作用。对在痛经产生早期有目的的拮抗外周NGF和中枢SP的增加，有可能为痛经治疗提供新的研究方向。由于本研究样本例数较少，此结论有待进一步进行大样本、多中心的研究、长期观察加以证实。
【参考文献】
1 Greene LA.Early events in neurotrophin signalling via Trk and p75 receptors.Curr Opin Neurobiol，1955，5:579-587.
2 Tokushige N，Markham R，Russell P，et al.High density of small nerve fibres in the functional layer of the endometrium in women with endometrios.Hum Repord，2006，21（3）:782-787.
3 Anaf V，Simon P，Nakadi I EI，et al.Relationship between endometrioticfoci and nerves in rectovaginalendometriotic nodules.HumReprod，2000，15（8）:1744-1750.
4 Anaf V，Simon P，Nakadi I EI，et al.Hyperalgesia，nerve infiltrationand nerve growth factor expression in deep adenomyotic nodules，peritoneal and ovarian endometriosis.Hum Reprod，2002，17（7）:1895-1900.
（本文编辑：陆 华）
作者单位：276003 山东，临沂市人民医院妇科