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【摘要】 目的 探讨血清抗核小体抗体(ANuA)的检测在系统性红斑狼疮（SLE）患者中的意义。方法 采用免疫印迹法检测58例SLE患者及40例健康人血清抗核小体抗体。结果 SLE患者血清ANuA阳性率为74.1%。SLE患者与健康对照组血清中ANuA阳性率差异具有极显著性(P<0.001)。SLE活动期患者与非活动期患者ANuA阳性率差异有极显著性(P<0.001)。结论 ANuA可以作为抗dsDNA和抗Sm以外的诊断SLE和判断SLE活动期的一种新的自身抗体。
【关键词】 系统性红斑狼疮;抗核小体抗体;免疫印迹法
系统性红斑狼疮(SLE)是一种以多系统损害伴多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病。目前SLE的实验室检测主要以抗核抗体、抗双链DNA和抗Sm抗体为主。近几年来人们对核抗原中作为染色质基本结构的核小体(nucleosome)的认识逐渐增多,特别是在SLE患者外周血淋巴细胞凋亡的研究中发现:细胞凋亡过程中被释放到细胞外间质中的大量核小体,可以作为自身抗原驱动机体产生自身免疫反应,导致SLE患者出现抗核小体抗体(anti-nucleosome antibodies,ANuA)。国外有学者在SLE患者血清中检测了抗核小体抗体,并发现在SLE患者中抗核小体抗体阳性率较高,而国内尚无这方面的实验室资料。本文采用免疫印迹法检测58例SLE患者血清抗核小体抗体,旨在讨论抗核小体抗体在SLE的诊断和监测中的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 所有研究对象来源于2000年6月~2003年4月我院住院和门诊患者,SLE 58例,女52例,男6例,年龄17~62岁,平均(34±10)岁,根据临床表现及实验室检查指标,参照SLE临床活动指数对所有SLE患者评分,其中狼疮活动期(总分>3分)36例,缓解期(总分≤3分)22例,以上均符合美国风湿病学会诊断标准。正常对照组40例，女35例，男5例，年龄18~65岁,平均(33±10)岁，为我院体检正常职工。均于清晨空腹采静脉血5ｍｌ,分离血清-20℃冻存待检。
1.2 方法 免疫印迹法检测血清抗核小体抗体,试剂盒由德国欧蒙实验室免疫制品有限公司提供。SLE患者在检测抗核小体抗体时同时也进行抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(抗dsDNA)和抗Sm抗体检测。ANA采用间接免疫荧光法测定,试剂由德国欧蒙实验室免疫制品有限公司提供。
1.3 统计学方法 组间率的比较采用χ2检验。
2 结果
SLE与正常对照组ANuA阳性率差异有极显著性(χ2=33.04,P<0.001);SLE活动期与非活动期患者ANuA阳性率差异有极显著性(χ2=6.63,P<0.001)。SLE患者及对照组血清中抗核小体抗体检测结果见表1。表1 SLE患者及对照组血清中抗核小体抗体检测
3 讨论
SLE是一种以多系统损害伴多种自身抗体为特征的免疫性疾病,SLE患者中常检测到大量的抗核抗体,Tax等认为这些抗体的产生与SLE患者淋巴细胞凋亡有关,细胞凋亡过程中所释放的核小体在ANuA的产生中具有重要意义。核小体是高度组织的染色体的功能亚单位，它的核心是组蛋白（H2A、H2B、H3、H4）八聚体，周围被两圈DNA双螺旋环绕。1990年Rumore等从SLE患者外周血中发现了核小体，并认为外周血中这种游离的核小体是由于细胞凋亡所产生的寡聚核小体，并且这种核小体的免疫原性很强，可驱动自身免疫反应，诱导产生抗核小体抗体［1］。核小体在SLE中同时又是触发性自身抗原，可作为多克隆B细胞活化因子，在鼠狼疮模型中，核小体可刺激CD+Th细胞诱导抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体的产生，但是抗核小体抗体仅对天然的核小体以及核小体亚结构（H2A-H2B）-DNA起作用，而并不与其中的DNA或组蛋白起反应，而且抗核小体抗体的形成又先于抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体［2］。因而，抗核小体抗体可能是SLE的比较早期的指标。
近年来，抗核小体抗体对SLE的诊断价值已成为一个热门话题，认为抗核小体抗体对SLE的敏感性高于抗dsDNA抗体，以至有学者认为抗核小体抗体的检测可代替抗dsDNA抗体。国内外文献［3］认为抗核小体抗体的检测在SLE的诊断和监测中有着重要的意义。Iin DJ［4］等学者检测129例SLE患者血清抗核小体抗体,其中98例阳性,阳性率76.0%,我们检测58例SLE患者血清抗核小体抗体阳性率为74.1%(43/58),与之非常接近。本文采用免疫印迹法检测58例SLE患者血清抗核小体抗体,灵敏度为74.1%,特异性为97.6%。从表1中可以看出SLE患者与健康人对照组血清中抗核小体抗体阳性率差异有极显著性(P<0.001)。SLE活动期患者ANuA阳性率高于非活动期,且两者差异有极显著性(P<0.001),因此ANuA可作为诊断SLE和SLE活动期的诊断指标。
目前实验室诊断SLE的标志性抗体为抗dsDNA和抗Sm抗体,这两种抗体对于诊断SLE,特异性高,但敏感性较差,抗dsDNA在30%~40%左右,抗Sm只有20%~40%,而我们检测的ANuA敏感性为74.1%,高于抗dsDNA和抗Sm。因此，笔者认为ANuA可以作为除抗dsDNA和抗Sm抗体外的诊断SLE和判断SLE活动期的一种新的标志性抗体,ANuA的检测对于SLE的诊断和监测具有重要的意义。在研究中还发现，在SLE中抗核小体抗体与抗dsDNA抗体之间没有明显的相关性，对可疑SLE患者，同时检测抗核小体抗体和抗dsDNA抗体可增加SLE的血清学命中率。
【参考文献】
1 Rumore PM, Stein man CR. Endogenous circulting DNA in syste mic jupus erythe matosus. Occurrence as multimedia complex bound to histone.J Clin Invest,1990，86(1):69.
2 Chabre H，Amoura Z, Piette JC, et al. Presence of nucleosome restricted antibodies in patients with systemic jupus erythe matesus. Arthritis Rheum,1995,38(17):1485.
3 Kiss E, Lakos G, Nemeth J, et al. Significance of anti-nucleosome(anti-chromatin) antibodies in systemic jupus erythematcsus.Orv Hetil,2001,142(32):1731-1736.
4 Iin DJ, Kim SJ, Park SH, et al. Anti-nucleosome antibody:significance in Jupus patients lacking anti-double-stranded DNA antibody. Clin Exp Rheumatol,2002,20(1):13-18.
作者单位： 067000 河北承德,承德市中心医院检验科
(编辑：陈 沁)