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【摘要】 目的 观察同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）组织型纤溶酶原激活物（tPA）抗原含量的影响。方法 将体外培养的HUVEC分为5个实验组0、10、50、200、500μmol/L浓度Hcy组和上述各Hcy共同培养组，培养24h后，酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中的tPA抗原含量。结果 与单纯培养基组（0μmol/L Hcy）相比，10μmol/L Hcy组（生理浓度组）tPA含量明显增高（P<0.05）。超生理剂量Hcy时，tPA含量依赖性地下降，但与对照组无明显区别（P<0.05）。而与生理浓度Hcy相比，当Hcy浓度达到500μmol/L时，tPA抗原合成明显减少（P<0.05）。加入叶酸后，可以减弱Hcy抑制tPA抗原合成的作用，500μmol/L Hcy共同培养组与单纯Hcy组相比差异有显著性（P<0.05）。结论 高Hcy可以减少内皮细胞tPA抗原的分泌，可能降低纤溶系统的活性。生理浓度的Hcy可以增加内皮细胞tPA抗原的分泌，可能提高纤溶系统的活性。
【关键词】 同型半胱氨酸；组织型纤溶酶原激活物；人脐静脉血管内皮细胞
同型半胱氨酸（Hcy）是人体内蛋氨酸代谢的一个重要的中间产物，高胱氨酸血症（HHE）与动脉粥样硬化及心脑血管疾病密切相关，然而HHE的致病机制还不完全清楚。本实验中笔者研究了Hcy对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的tPA抗原分泌的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料 Hcy为Sigma公司产品，tPA ELISA试剂盒购自ADI公司。
1.2 人血管内皮细胞的培养 HUVEC及2%血清培养基购自美国Cascade Biologics公司。细胞复苏后于37℃、5%CO2培养箱中静置培养，EDTA消化，离心，吹悬，传代。所用细胞为2～3代。
1.3 内皮细胞分泌tPA抗原测定 将HUVEC消化离心后接种于96孔细胞培养板，接种密度为105 cell/ml，每孔100μl，待细胞生长至亚融合状态时，分为5个实验组（0、10、50、200、500μmol/L Hcy）和上述浓度的Hcy共同培养组，培养24h，吸取上清液，ELISA法测定各组tPA抗原含量（每组4个复孔）。
1.4 统计学处理 采用SPSS10.0软件进行分析，数据处理用均数±标准差（x±s）表示，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
Hcy对内皮细胞tPA抗原合成的影响如图1所示。与单纯培养基组（0μmol/L Hcy）相比，10μmol/L Hcy组（生理浓度组）tPA含量明显增高（P<0.05）。超生理剂量Hcy时，tPA含量剂量依赖性地下降，但未达到统计学差别（P>0.05）。而与生理浓度Hcy相比，当Hcy浓度达到500μmol/L时，tPA抗原合成明显减少（P<0.05）。500μmol/L Hcy共同培养组与单纯Hcy组相比差异有显著性（P<0.05）。
图1 Hcy对内皮细胞tPA抗原含量的影响注：与0μmol/L Hcy相比，■P<0.05；与10μmol/L Hcy相比，▲P<0.05；与单纯Hcy相比，△P<0.05
3 讨论
近年来随着检测水平的提高和分子生物学技术的发展，越来越多的研究表明高胱氨酸血症是动脉粥样硬化、心脑血管疾病及周围血管、血栓性疾病的一个独立的危险因素［1，2］。Hcy是一种含巯基的氨基酸，它是蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中一个重要的中间产物，其本身并不参加蛋白质的合成。正常人群中空腹血Hcy的浓度范围为5～15μmol/L，大于15μmol/L则为高胱氨酸血症（HHE）。高同型半胱氨酸对血管损伤的致病机制仍不十分清楚。有研究报道Hcy可以刺激血管平滑肌细胞增生，增加血小板的粘附性等作用，促进血栓形成，从而成为动脉粥样硬化的重要危险因素。
近年来有临床研究表明缺血性心脑血管疾病的发生与患者血浆内纤溶系统失衡相关，高Hcy可以通过增加tPA及PAI-1抗原水平，损伤纤溶系统，增加心脑血管病的发病危险［3］。体外关于Hcy对tPA影响机制研究较少，且结果不一致。
脐静脉内流淌着含氧量丰富的动脉血，其细胞功能接近于动脉内皮细胞［4］，笔者的实验采用体外培养的人脐静脉内皮细胞进行研究。在研究中分别采用无Hcy的单纯培养基和生理浓度的Hcy作为对照组，结果表明以单纯培养基为对照时，超生理浓度的Hcy对内皮细胞分泌tPA抗原无影响，而生理浓度的Hcy则可增加tPA抗原的分泌，提高纤溶系统的活性。但是，与生理浓度的Hcy相比较，在超生理剂量时，随着浓度的增加，Hcy剂量依赖性地抑制内皮细胞tPA抗原的分泌，当Hcy为500μmol/L时，这种影响具有统计学意义。这表明HHE可抑制内皮细胞tPA抗原的合成，降低纤溶活性。
本实验在细胞水平揭示了生理浓度Hcy可能增强纤溶系统活性，超生理浓度的Hcy可能抑制内皮细胞纤溶系统活性。
【参考文献】
1 梅轶芳，金红，栾绍钧，等.脑血栓形成与亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的关系.中华神经科杂志，2003，02：126-128.
2 Midorikawa S,Sanada H,Hashimoto S,et al.Enhancement by homocysteine of plasminogen activator inhibitor-1 gene expression and secretion from vascular endothelial and smooth muscle cells.Biochem Biophys Res Commun,2000,272:182-185.
3 Chanters JC,Obeid DA,Refsum H,et al.Plasma Homocysteine concertrations and risk of coronary heart disease in UK Indian Asian and European men.Lancet,2000,355（9203）:523-527.
4 Lindgren A,Lindoff C,Norrving B.Tissue plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1 in stroke patients.Stroke,1996,27:1066-1071.
作者单位：150001 黑龙江哈尔滨,哈尔滨医科大学第一临床医学院