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【摘要】 目的 探讨PTEN蛋白表达与胃癌临床病理预后因素的关系，从而评估PTEN作为胃癌预后分子标志物的可行性。 方法 免疫组织化学方法检测53例胃癌组织中PTEN蛋白的表达，统计分析PTEN表达与胃癌临床病理预后因素的关系。 结果 胃癌组织中PTEN蛋白阳性表达率为66.0%（35/53）。PTEN蛋白表达与胃癌的组织学分化程度（P=0.005）、浸润深度（P=0.024）、有无淋巴结转移（P=0.002）和病理学分期（P=0.001）有关，而与患者的性别、年龄，肿瘤的位置、大小、有无远处转移以及有无癌栓等临床病理特征无关（P>0.05）。 结论 PTEN蛋白表达与胃癌的多种重要临床病理预后因素相关，提示PTEN蛋白表达表型可作为评估胃癌某些生物学特性的辅助指标。
关键词 胃癌 PTEN基因 蛋白表达 临床病理学 免疫组织化学
Clinicopathological significance of the expression of PTEN gene in gastric carcinoma
Zhu Zhongzheng，Liu Shufang，Wang Aizhong，et al.
Department of Pathology，The113th Hospital of PLA，Ningbo3150400.Department of Pathology，Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital，The Second Military Medical University，Shanghai200438.
【Abstract】 Objective To study the relationship of PTEN expression with clinicopathological characteristics，and to assess the prognostic value of PTEN expression in gastric carcinoma.Methods The expression of PTEN in53cases with gastric carcinoma was detected by immunohistochemistry，and PTEN expression was compared with clinico-pathological characteristics.Results The positive rate of PTEN protein in gastric carcinoma was66.0%（35/53）.The expression of PTEN protein was significantly associated with the differentiation level（P=0.005），infiltration lev-el（P=0.024），lymphatic metastasis（P=0.002）and pathological stage（P=0.001），but not with sex，age，tumor location，tumor size，distant metastasis and presence of tumor thrombus（P>0.05）.Conclusion The expression of PTEN protein is associated with multiple clinicopathological characteristics relevant to prognosis.It is suggested that the expression phenotype of PTEN protein could be an assistant marker for the evaluation of some biopathological be-haviors of gastric carcinoma.
Key words gastric carcinoma PTEN gene protein expression clinicopathology immunohistochemistry
影响胃癌生物学行为特点的因素多种多样，包括肿瘤本身生长特点、机体免疫状况以及治疗措施等，然而目前评估胃癌的生物学行为主要是根据一般的病理形态学观察，缺乏客观的标志物 ［1］ 。近年来，许多新的分子标志物的检测已用于评估胃癌的生物学行为特点 ［2～4］ ，其中PTEN是第一个被发现具有酪氨酸磷酸酶活性的抑癌基因，其蛋白异常表达常见于胃癌组织中 ［5～8］ ，提示其在胃癌的演进过程中发挥重要作用。本研究采用免疫组织化学方法对PTEN蛋白表达与胃癌临床病理预后因素的关系进行分析，旨在评估PTEN作为胃癌生物学行为特点的辅助分子标志物的可行性。
1 资料与方法
1.1 材料 53份胃腺癌标本来源于上海同济大学附属铁路医院2000～2002年住院的53例胃癌患者，诊断均经组织病理学和免疫组化方法证实，其中男41例，女12例;年龄39～81岁，平均65.6岁。所有标本均经10%福尔马林溶液固定、石蜡包埋。
1.2 方法 每例选取同时具有胃腺癌组织与癌旁正常黏膜组织的蜡块进行5μm连续切片5张，其中两侧切片供HE染色以定位癌组织和癌旁组织，另3张切片分别供免疫组化染色及空白对照、阴性对照染色。兔抗人PTEN多克隆抗体及染色试剂盒为Zymed公司产品。染色操作流程按试剂盒提供的说明书进行。实验中以PBS代替一抗作空白对照，用正常未免疫兔血清代替一抗作阴性对照，用已知阳性的乳腺癌组织切片作阳性对照。
1.3 染色结果判定 每张切片随机选取10个高倍镜视野（50～200cells/HP），根据阳性细胞百分比评分（percentage，P）和着色强度评分（intensity，I）进行组织学评分（histology score，H）（H=P×I）。H评分0分或1分记为“-”，2分或3分记为“+”，4分或6分记为“++”，9分记为“+++”，见表1。采用双盲阅片法。1.4 统计学方法 采用χ 2 检验。数据统计用统计分析系统（SPSS10.0版）进行，P<0.05为差异有显著性。
表1 PTEN蛋白免疫组化染色结果评分标准（略）
2 结果
PTEN阳性表达均明确定位于细胞质，呈淡黄、棕黄或褐黄色颗粒。空白对照和阴性对照染色结果为阴性，阳性对照染色结果为强阳性。53例癌旁正常胃黏膜组织染色均为阳性，而胃癌组织阳性表达仅35例（66.0%）。胃癌中PTEN蛋白表达与患者的性别、年龄，肿瘤的大小、位置、有无远处器官的转移以及有无癌栓无关（P>0.05），但与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和病理学分期（pTNM分期）有关，见表2。高、中分化胃癌组织中PTEN蛋白表达阳性率（84.6%）显著高于低分化癌（48.1%）（P=0.005）;随着浸润深度Ⅰ、Ⅱ→Ⅲ→Ⅳ级的增加，PTEN蛋白表达阳性率逐步下降92.9%→60.0%→54.2%（P=0.024）;无淋巴结转移者PTEN蛋白表达阳性率（90.5%）显著高于有淋巴结转移者（50.0%）（P=0.002）;pTNM分期为Ⅰ、Ⅱ期者PTEN蛋白表达阳性率（94.7%）显著高于Ⅲ、Ⅳ期（50.0%）（P=0.001）。
表2 PTEN蛋白表达与临床病理预后因素的关系 （略）注:浸润深度:Ⅰ级局限于黏膜及黏膜下层;Ⅱ级侵及肌层;Ⅲ级侵及浆膜下及浆膜层;Ⅳ级经浆膜侵及邻近器官
3 讨论
本组病例胃癌组织中PTEN蛋白表达阳性率为66.0%（35/53），与文献报道具有一致性 ［5～8］ 。为了评估PTEN作为胃癌生物学行为特点分子标志物的可行性，本研究对PTEN蛋白表达与胃癌临床病理特点的关系进行了分析。结果显示，胃癌中PTEN蛋白表达与患者的性别、年龄，肿瘤的大小、位置、有无远处器官的转移以及有无癌栓无关，但与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和pTNM分期有关。在诸多影响预后因素中，胃癌的浸润深度与淋巴结转移是公认的影响预后的重要因素 ［1～3］ 。国内胃癌协作组资料显示，病变局限于黏膜及黏膜下层者（Ⅰ级，早期胃癌），其5年生存率可达90%～100%;侵犯浅肌层和深肌层（Ⅱ级）的5年生存率分别为30%和49%;侵及浆膜下及浆膜者（Ⅲ级），其5年生存率为19%;而经浆膜侵及邻近器官（Ⅳ级）的其5年生存率仅为11%。进展期胃癌无淋巴结转移者5年生存率为22%～87%，有淋巴结转移者只有4%～54%，前者平均为60%，而后者只有约30% ［9］ 。笔者的研究结果显示，PTEN蛋白表达与胃癌浸润深度相关（P=0.024），随着浸润深度的增加，PTEN蛋白表达阳性率逐步下降;PTEN蛋白表达与淋巴结有无转移相关（P=0.002），无淋巴结转移者PTEN蛋白表达阳性率显著高于有淋巴结转移者。目前一致认为，综合考虑浸润深度和淋巴结转移以及远处器官的转移情况的预后评估体系，即pTNM分期，是胃癌最有力的决定预后的因素，已被广泛应用 ［10］ 。笔者的研究结果显示，PTEN蛋白表达与pTNM分期相关（P=0.001），pTNM分期为Ⅰ、Ⅱ期者PTEN蛋白表达阳性率显著高于Ⅲ、Ⅳ期。远处器官的转移是公认的影响胃癌预后的重要指标 ［3］ 。然而，本研究中PTEN蛋白表达与远处器官有无转移无关（P>0.05）。由于本研究中有远处转移的病例少（8例），因此大样本基础上的进一步研究将有助于揭示二者的确切关系。胃癌组织学分化程度与预后有一定关系是较为公认的观点 ［9～11］ 。组织学上高分化者5年生存率为32%～86%;而低分化者只有9%～31% ［9］ 。笔者的研究结果显示，PTEN蛋白表达与胃癌分化程度相关（P=0.005），高、中分化胃癌组织中PTEN蛋白表达阳性率显著高于低分化癌。
综上所述，PTEN蛋白表达与胃癌诸多重要临床病理特点，包括浸润深度、淋巴结转移、pTNM分期以及分化程度相关。结果提示，PTEN蛋白表达表型可作为评估胃癌生物学行为特点的辅助指标。
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（编辑夏 露）
基金项目:国家自然科学基金项目（编号:30470791）
作者单位:15040宁波解放军第113医院病理科
200438上海第二军医大学东方肝胆外科医院病理科
200072上海同济大学铁路中心医院消化内科（与朱忠政同为第一作者）