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【摘要】 目的 本文从骨密度（BMD）和血清TRAP、BALP的角度探讨壮骨颗粒对原发性骨质疏松症的作用机制。方法 建立6月龄雌性兔卵巢摘除骨质疏松模型，模型成立后随机分成壮骨颗粒组、钙尔奇—D组和生理盐水组，分别喂服壮骨颗粒、钙尔奇—D和生理盐水。喂药12周后处死取材，检测BMD和血清TRAP、BALP等浓度。结果 壮骨颗粒组BMD明显高于对照组，兔血清TRAP活性均较对照组降低，而BALP较对照组升高。结论 壮骨颗粒可以提高骨质疏松模兔的BMD，抑制破骨细胞活性，提高成骨细胞的活性。
【关键词】 壮骨颗粒；去卵巢兔；抗酒石酸盐酸性磷酸酶；骨碱性磷酸酶；骨质疏松
The experimental study of Zhuanggu Granula on the BMD and TRAP,BALP of ovariectomized rabbits
CHEN De-xi,LANG Ji-xiao,WAN Xiu-yang,et al.
Haici Hospital of Qingdao,Qingdao 266033,China
【Abstract】 Objective To investigate the treatment effect of Zhuanggu Granula on primary osteoporosis,and to study the mechanism from the BMD and TRAP,BALP.Methods Osteoporosis model animals (Sprague-Dawley,6 months) by ovary excised were randomly divided into Zhuanggu Granula treating group,Gaierqi group and normal saline group.The animals were killed after 12 weeks treatment in order to collect experimental samples.The levels of BMD and TRAP,BALP were measured.Results After 12 weeks treatment,bone mineral density increased obviously,the levels of BALP increased,the amounts of TRAP were decreased.Conclusion Zhuanggu Granula can effectively treat osteoporosis of ovariectomy habits by accelerating the osteoblastion,enhancing the contents of bone inorgan and improving the properties of trabecular bone.
【Key words】 Zhuanggu Granula;ovariectomized rabbits;tartrate-resistant acid phosphatase;bone alkaline phosphatase;osteoporosis
骨质疏松症（osteoporosis,OP）是以骨量减少，骨组织显微结构退化（松质骨骨小梁变细、断裂、数量减少，皮质骨多孔、变薄）为特征，以致骨的脆性增加及骨折的危险性增加的一种全身性骨病［1］，危害性大，近年来深受人们的关注，特别是对绝经后骨质疏松症的研究日益广泛和深入。破骨细胞分泌的抗酒石酸盐酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)［2］被认为是破骨细胞功能的标志。骨中生成的TRAP可进入血循环。骨碱性磷酸酶（bone alkaline phosphatase,BALP）由成骨细胞生成［3，4］，参与骨形成，并可进入血循环。因此，血中TRAP及BALP水平可分别反映破骨细胞及成骨细胞的功能。本文旨在观察壮骨颗粒对去势兔骨质疏松动物模型BMD和血中TRAP、BALP水平及其变化趋势，以期探讨中药治疗骨质疏松症的机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 60只6月龄新西兰雌性大白兔，体重1550～1600g，实验动物合格证书号：医动学第03-49-2号，编号01535。医学实验动物环境设施为兔类实验室，清洁级。随机分为3组：壮骨颗粒组、钙尔奇—D组、生理盐水组。
1.2 实验药物 壮骨颗粒原药材从青岛市医药公司统一购进，青岛中医医院制剂室负责加工制备，每克颗粒含原生药2.9g。钙尔奇—D颗粒由江苏惠氏药业有限责任公司产生，生产批号：国药准字号第H10950029号。壮骨颗粒组喂服壮骨颗粒2g/（kg·d），钙尔奇—D组喂服钙尔奇—D 1.5g/（kg·d），生理盐水组喂服生理盐水2ml/（kg·d）。
1.3 主要试剂与仪器 对硝基酚磷酸二钠盐由德国Merch公司生产。对硝基酚由成都化学试剂生产，DG3022A型酶标仪由国营南京电子管厂生产。UV-120-02型分光光度计由日本岛津生产。TB-85型超级恒温水浴箱（温波+0.10℃）由日本岛津生产，双能X线骨密度仪（Hologic QRD-2000型）由美国产。
1.4 方法 统一于术后12周起灌胃，每日1次，用药剂量按人兔体型系数换算法［5］得出。实验兔均在相同条件下自由摄食饮水，于喂药12周后全部处死取材。取材方法具体如下：先颈动脉取血，离心留取上清液，放入-20℃冰箱内保存待测。胫骨，Bouin液固定垂体，10%福尔马林液固定肾上腺及胫骨。取腰椎、胫骨上端1～1.5cm进行骨密度（BMD）检测。TRAP活性的测定采用K-HWLau等的方法，以37℃，pH值5.5，在80mmol/L酒石酸钠存在下，每分钟催化生成1μmol对硝基酚的酶量为一个酶活性单位（u）。BALP活性的测定采用热失活法，以37℃，pH9.8，每分钟催化生成1μmol对硝基酚的酶量为一个酶活性单位（u）。骨密度测定：应用双能X线骨密度仪（Hologic QDR-2000型）测定全身（头颅除外）及腰椎、胫骨上端等区域的骨密度。
2 结果
2.1 术后24周壮骨颗粒组、钙尔奇—D组和生理盐水组BMD检测结果 见表1。
表1 BMD检测结果 （略）
注：与生理盐水组比较，*P<0.01；与钙尔奇—D组比较，#P<0.05
2.2 血清TRAP、BALP 见表2。
表2 3组血清TRAP、BALP （略）
注：与钙尔奇—D组、生理盐水组比较，*P<0.01
3 讨论
1985年Stepan［6］等学者报道切除卵巢后的妇女血中TRAP及BALP之间的关系。壮骨颗粒组BMD明显高于对照组，兔血清TRAP活性均较对照组降低，而BALP较对照组升高。壮骨颗粒能促进成骨过程，提高骨矿含量，改善骨小梁质量，有效治疗骨质疏松症。壮骨颗粒正是针对骨质疏松“肾亏脾虚”这一病理机制，以中医“肾主骨”、“补先后天”理论为原则组方而成，主要由淫羊藿、补骨脂、山茱萸、党参等药味组成。方中各药具补益肝肾、活血通络之功效。可抑制破骨细胞功能，增强成骨细胞活性，维持成骨细胞和破骨细胞之间的动态平衡。
【参考文献】
1 刘忠厚，杨定焯.中国人骨质疏松症建议诊断标准（第二稿）.中国骨质疏松杂志，2000，6（1）：2.
2 蔡桂英，侯静，杨霞，等.去势骨质疏松动物血清TRAP及BALP水平的观察.中国骨质疏松杂志，1997，3（4）：38-41.
3 Andersson GN,Marks Jr SC.Tarrate-resistant acid ATPase and a cytochemical marker for osteoclasts.J Histochem Cytochem,1989,37:113.
4 Li CY,Chuda RA,Lam WKW,et al.Acid phosphatase in human plasma.J Lab Ckin Med,1973,82:446.
5 施新猷.现代医学实验动物学.北京：人民军医出版社，2000，332-335.
6 Stepan JJ,Pospichal J,Schreiber V,et al.The application of plasma tarrate-resistant acid phosphatase to assess changes in bone resorption in response to artificial menopause and its treatment with estrogen or norethisterone.Calcif Tissue Int,1989,45(5):273.
(编辑：商 洁)
作者单位： 266033 山东青岛，青岛市海慈医疗集团青岛市中医院骨伤科