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首页医源资料库在线期刊中华现代外科学杂志2010年第7卷第5期

金灵汤体外抑菌实验的观察与分析

来源:中华现代外科学杂志
摘要:【摘要】目的观察金灵汤对5种骨科感染伤口中常见细菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、克雷伯菌、表面葡萄球菌)的体外抑菌效果,并与200u/ml庆大霉素体外抑菌进行对比。将观察用细菌菌株均匀密布在碟形培养基上,将钢管置于其上,再将各不同浓度金灵汤药液及200u/ml庆大霉素滴入钢管内,滴满,放入......

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【摘要】  目的 观察金灵汤对5种骨科感染伤口中常见细菌(金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌 、大肠埃希菌、克雷伯菌、表面葡萄球菌)的体外抑菌效果,并与200u/ml庆大霉素体外抑菌进行对比。方法 制备并稀释金灵汤药液(100%、50%、25%、12.5%);将观察用细菌菌株均匀密布在碟形培养基上, 将钢管置于其上,再将各不同浓度金灵汤药液及200u/ml庆大霉素滴入钢管内,滴满,放入37℃恒温培养箱中,24h后取出,观察抑菌圈,测量并记录结果。 结果 金灵汤对5种细菌中的4种(金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、克雷伯菌、表面葡萄球菌)敏感,但不及庆大霉素;对大肠埃希菌无效。结论 金灵汤对5种骨科伤口感染常见细菌中的4种(金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌 、克雷伯菌、表面葡萄球菌)有一定的抑菌效果,但不及200u/ml庆大霉素,中药治病是综合治疗,并非单纯杀菌,用药时应综合用药,配合广谱抗生素庆大霉素或敏感抗生素,能起到更好的效果。

【关键词】  金灵汤;体外抑菌;庆大霉素

 Observation and analysis on bacteriostasis experimental in vitro by Jinling soup

  ZHU Qian-qing,NING Zeng-en,CHEN Jiu-yi.The First Affiliated Hospital of Guiyang Chinese Medicine,Guiyang 550001,China

   Objective To observe the Jinling soup on the five kinds of orthopedic wounds in the common bacterial infection (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus surface) in vitro antibacterial results and comparison with 200u/ml antibacterial effect of gentamicin. Methods Jinling soup and diluted liquid (100%, 50%, 25%, 12.5%); to observe the use of bacterial strains even clouds in the disc medium, the tube was placed, in different concentrations of Jinling soup and 200u/ml gentamicin infusion liquid steel, the drop is full, put in an incubator at 37 ℃, 24h later removed to observe the inhibition zone, to measure and record the results.Results The Jinling soup on the five kinds of bacteria in the four (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus surface) sensitive, but not gentamicin. Invalid on Escherichia coli.Conclusion The Jinling soup of the five kinds of soup orthopedic wound infections in the four kinds of common bacteria (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, from Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus surface) has a certain inhibitory effect, but less than 200u/ml gentamicin, Chinese medicine treatment is a comprehensive treatment, not simply sterilization, can be used for clinical, but the medication should be integrated medicine, with broad-spectrum antibiotic gentamicin or sensitive to antibiotics, to achieve better results.

  [Key words] Jinling soup; antibacterial in vitro;gentamicin

  金灵汤为贵阳中医学院第一附属医院骨科常用的经验方,在临床应用已有多年的历史,从1980年起就开始在本院用于临床,医治过大量患者并取得了良好的临床效果,近期已经完成了动物实验,实验结果表明金灵汤对致病菌有良好的抑制作用。近年来感染伤口较多,很多细菌对西药有严重的耐药性,开发新的有效抗菌药剂成为比较热门的课题,因中药副作用小,耐药菌株少,所以开发中药抗菌药制剂更为热门,中药方剂中有不少疗效好的外用洗方,但是开发成为现代医学常用制剂的很少,为了加快中药现代化进程,我院决定开发一种适宜于外洗的中药制剂,而金灵汤是我院常用的经验方,疗效较好,临床常用,又有一定的实验基础,就成为本实验的对象。本实验在贵阳中医学院微生物实验室进行,药物(笔者在实验中采用的中药材均为生品,其他炮制方法药品[1]的抑菌效果可能不同,留待以后实验观察)由贵阳中医学院第一附属医院提供,菌株由贵阳中医学院微生物实验室提供,药物制剂在贵阳中医学院制剂实验室制作。

  1 材料与方法

  1.1 材料 游标卡尺;消毒钢管;玻璃双碟琼脂平板;普通恒温箱等。庆大霉素;生理盐水。中药材为金银花、 威灵仙、蒲公英、苦参、野菊花、冰片等。

  1.2 方法

  1.2.1 药液的制备 金灵汤配方为金银花200g, 威灵仙200g,蒲公英200g,苦参200g,野菊花150g,冰片 50g,败酱草150g,黄栀子150g。先将金银花 、威灵仙等放入10倍于药物量的水中浸泡30min后,加热煮沸10min,放冷,用纱布滤出药液,再加5倍于药物量的水,按前法煮沸并过滤,合并两次煎液,加热浓缩到1000ml并将煎剂过滤,另取冰片50g加水300ml研磨溶解,将上述过虑煎液与冰片溶解液共1300ml(100%浓度)制成含量为1g/ml。一起倒入干净空瓶中,盖紧后置于高温灭菌容器中灭菌80min,装入无菌容器(塑料袋真空包装)密封备用。

  1.2.2 培养基制备 在容量为1000ml的三角烧瓶中加入蒸馏水1000ml,放在电炉上加热。用天平准确称取35.0g营养琼脂,放入三角烧瓶中并不断搅拌使琼脂完全溶解,然后放入高压灭菌锅中经121.3℃、15~20min高压灭菌,取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中,厚度约3~5mm,冷却凝固后备用。

  1.2.3 菌液的制备 将金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌 、大肠埃希菌、克雷伯菌、表面葡萄球菌菌株接种在营养肉汤内,37℃摇床孵育12h,然后用0.5标准化比浊管比浊。生理盐水将菌液稀释至0.5标准化比浊管比浊浓度。相当于5×108CEH/ml,将菌液用生理盐水按照1:10倍比稀释法将浓度稀释到1.5×105CEH/ml。作为抑菌实验浓度。培养基及标准菌液(5×108CEH/ml)由贵阳中医学院微生物实验室提供。

  1.2.4 对比试验药物 选择200u/ml庆大霉素。

  1.2.5 实验方法 管碟法:管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[2],利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散,形成含一定浓度抗生素球形区,抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。基本操作和设计适用于各种抗生素,试验结果较稳定;样品用量少,灵敏度高;适合于大批样品的测定。此法系根据抗生素在一定浓度范围内,对数剂量与抑菌圈直径(面积)呈直线关系而设计,通过检测抗生素对微生物的抑制作用,比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小,计算出供试品的效价。

  将金灵汤通过倍释法配制(生理盐水)成100%、50%、25%、12.5%浓度药液,将标准菌液用生理盐水按照1:10倍比稀释法将浓度稀释到1.5×105CEH/ml作为抑菌实验浓度。将金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌 、大肠埃希菌、克雷伯菌、表面葡萄球菌菌株分别均匀密布在不同的碟装培养基上, 将钢管均匀的置于其上,在100%、50%、25%、12.5%的金灵汤药液及200u/ml庆大霉素滴入钢管内,滴满,放入37℃恒温培养箱中,24h后取出,观察抑菌圈,测量并记录结果。

  1.3 判定标准 抑菌环直径<10mm为低度敏感;11mm>中度敏感>26mm;高度敏感>26mm。

  1.4 统计分析 应用SPSS11.5软件进行统计学分析和处理。结果用(x±s)表示,采用单因素方差分析、t检验统计学方法进行比较,P<0.05表示差异有显著性。

  2 结果

  金灵汤对5种骨科伤口感染常见细菌中的表面葡萄球菌(50%)高度敏感,但不及庆大霉素;对金黄色葡萄球菌中度敏感,对照品庆大霉素为高度敏感。对克雷伯菌中度敏感,对照品200u/ml庆大霉素体高度敏感;铜绿假单胞菌中度敏感(50%),对照品200u/ml庆大霉素体中度敏感,但效果好于金灵汤;对大肠埃希菌无效,对照品200u/ml庆大霉素体高度敏感。具体见表1~5。表1 金灵汤对表面葡萄球菌菌株的抑菌效果表2 金灵汤对金黄色葡萄球菌的抑菌效果表3 金灵汤对大肠杆菌的抑菌效果 表4 金灵汤对克雷伯菌的抑菌效果 表5 金灵汤对铜绿假单胞菌的抑菌效果

  3 结论

  金灵汤对5种骨科伤口感染常见细菌中的4种(金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、克雷伯菌、表面葡萄球菌)有一定的抑菌效果,但不及200u/ml庆大霉素,考虑到中药治病是综合治疗,并非单纯杀菌,用药时应综合用药,配合广谱抗生素庆大霉素或敏感抗生素,能起到更好的效果。

  4 讨论

  中药的抑菌机制尚不清楚,有报道通过对中药与抗生素作用后菌落直径大小的比较,提示了中药成分可能具有与一般抗生素不同的抑菌机制[3],中药抑菌成分较多,可作用于细菌的不同部位和繁殖的不同阶段,并对细菌的多个代谢环节作用,故不易产生耐药性。清热解毒药物不仅具有抑菌作用,并且能通过调节机体的整体免疫反应和改变机体的局部微环境条件,从而达到清除病原菌,提高临床疗效的目的。本次研究采用的是体外抑菌实验,在体内能否达到抑菌浓度,控制感染,有待继续探讨。本实验用于中药的最低抑菌浓度测定采用管碟法,该法是测定抗生素敏感性的一门成熟的技术,但是中药浓度不好控制,浓度增大时琼脂难以凝固,药物浓度太低,又达不到中药的抑菌浓度,也有待继续探讨完善检测方法。中药药源广泛、价格低廉,具有广阔开发潜力。因此积极探讨中药的抑菌作用,以指导临床合理使用中药协同抗生素治疗细菌感染,对减少细菌耐药性的产生有着积极的意义。

【参考文献】
   1 王晓玉,魏伟.抗炎免疫中药的药动学研究.时珍国医国药,2006,17(10):2073.

  2 任董春.浅谈抗生素微生物检定--管碟法操作注意要点.安徽医药,2003,7(3):230.

  3 盛朝凯,刘岚,朱军,等.儿童呼吸道感染苛氧菌耐药性分析.中华现代儿科学杂志,2004,1(2):106-108.

  

作者: 祝乾清1,宁增恩2△,陈久毅1 2011-6-29
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