EIA检测HBsAg尝试用优选法设定灰带区

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    摘要：  目的  避免或减少输血后肝炎（PTHB）的感染率。方法  用优选法设定灰带区，EIA检测HBsAg，OD值在灰带区内的标本为实验组。OD值低于灰带区的标本为对照组，两组同时用PCR法检测HBVDNA。结果  实验组HBVDNA阳性率为48.48%，对照组阳性率为2.56%。结论  优选法用于设定灰带区具有一定的合理性，在血站实验室工作的其他方面也有客观体现。

    关键词：  酶免疫测定法；乙型肝炎表面抗原；灰带区

    尽管我国血站严格按照卫生部规定筛查HBsAg，但是患者输注HBsAg阴性血液后仍难免发生输血后肝炎（PTHB）［1］。有文献报道，正常人中隐性感染或急性窗口期约占6%［2］。2000年，卫生部医政司规定检测HBsAg“一般临床诊断试剂灵敏度为2 ng/μl，而对输血使用的检测试剂灵敏度要求＜1 ng/μl，输血多在200～400 ml，若灵敏度低则输血后乙肝感染率会上升”［3］。含毒血浆的致病性极强，输入10-4 ml含毒血浆就可以引起乙肝发病，输入10-7 ml虽不发生临床肝炎，但20%可成为HBsAg血症者［4］。近期有学者提出血站使用的HBsAg试剂灵敏度要求应达到0.5 ng/μl。

    在感染的早期（血清转阳期）仅出现OD值轻微的升高是可能的，所有感染的个体实际上在某一阶段均经过了灰带区，故对灰带区的样本要给予足够的警惕［5］。灰带区是人为指标，如何更加科学合理地设定灰带区，我们尝试用数学家华罗庚提出的优选法（0.618法）［6］，计算和设定灰带区，同时结合PCR法检测HBVDNA，以提供依据，进行分析评价。

    1  资料与方法

    1.1  标本  本站献血员体检的血液标本。

    1.2  试剂和仪器  上海科华EIA HBsAg试剂盒、德国Hotstar Kit、ELX800G酶标分析仪、Multiwash-2洗板机、PE9700 PCR分析仪。

    1.3  方法  各项实验均严格按操作说明书进行。献血员血清分为实验组和对照组，经EIA HBsAg检测为阴性（cutoff=0.105，阴性平均值低于0.05按0.05计算所得），其中OD值处于0.105～0.065（0.105×0.618所得）之间的样品为实验组，共33例。OD值小于0.065的样品为对照组，共39例。两组同时用PCR法作HBVDNA分析，分析结果作优选法（单因素）数据取舍依据。

　　2  结果

    实验组HBVDNA阳性率为48.48%（16/33），EIA HBsAg检测OD值分布范围0.104～0.065。对照组HBVDNA阳性率为2.56%（1/39），OD值分布范围0.062～0.001。

    3  讨论

    按操作说明书计算所得cutoff值（0.105）来判读，实验组和对照组EIA检测HBsAg均为阴性，但是处于优选法设定的灰带区内的OD值所代表的血液标本，经PCR检测，HBVDNA阳性率为48.48%，而OD值小于灰带区的血液标本，HBVDNA阳性率为2.56%。由此分析，灰带区的设定具有一定的合理性，OD值在灰带区内的标本都应该复检，复检结果仍在灰带区的，以考虑不合格为宜，这样可以避免如文献报道的“处于窗口期的样本，进行EIA检测时，会有少数标本落在测定的cutoff值以下导致EIA假阴性结果”［7］。

    优选法不仅仅是一个数学命题，而且具有一定的普遍意义。据我们观察，在血站实验室工作的其他方面，也有客观体现。例如，赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）原来的正常值是40IU［8］，后来改为25IU［9］，沿用至今。又如，“国家有关部门将试剂盒检测的精密度标准定为≤15%，然而经过长期对EIA试剂的实践观察认为，孔间变异控制在所有单个读数与平均值之差在±10%为好”［5］。后设定的数值均在原来数值的0.618倍左右。我们认为，优选法在血站工作中是否具有应用价值，值得引起关注和研究。

    参考文献

    1  宠启迪，张明良，樊少勇，等.抗HBC阳性HBsAg阴性献血者乙型肝炎病毒感染性分析.中国输血杂志，2001；14（3）：164.

    2  王玉玲.对179例HBsAg阳性婚检者做两对半结果分析.国外医学·临床生物化学与检验学分册，2000；21（增刊）：114.

    3  中华人民共和国卫生部医政司.血站工作人员须知，2000：30.

    4  马宗超，高耀宸，杨纯本，等.大规模检测乙型肝炎表面抗原方法的比较.中华医学检验杂志，1982；5（4）：245.

    5  孙玉芬，郭永翠，姚建敏.ELISA检测抗HIV灰带区样品的质量控制.中国输血杂志，2001；14（3）：168.

    6  贵州省科技情报室.华罗庚同志关于推广应用“优选法”的报告，1973：11.

    7  张爱红，王鸿捷，葛红卫.血液筛查的核酸扩增技术：当前的问题，未来的挑战.国外医学·输血及血液学分册，2001；24（6）：528.

    8  上海市卫生局.医学检验报告工作手册,1991：61.

    9  上海第二医学院.内科手册.上海：上海科学技术出版社，1981：946.

　　（上海市浦东新区血站，上海 200135）