阴虚体质系统性红斑狼疮患者中HLA-DQA1基因多态性的研究

　【摘要】 目的 探讨阴虚体质系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者中HLA-DQA1基因多态性。 方法 用聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性（PCR-RFLP）技术，对56例阴虚体质SLE患者和50例健康人的HLA-DQA1基因多态性进行研究。 结果 阴虚体质SLE患者中HLA-DQA1*0102显著增加，而HLA-DQA1*0601则显著下降。 结论 HLA-DQA1*0102或与这两个位点紧密连锁的基因可能是阴虚体质SLE患者的易感基因，而HLA-DQA1*0601或与这个位点紧密连锁的基因可能对阴虚体质SLE患者的发病具有保护作用。

    【关键词】 红斑狼疮；系统性；人白细胞抗原；多态性

      系统性红斑狼疮（SLE）因为临床表现异常多 样，目前被公认为自身免疫病的原型［1］。SLE的发病机制目前尚未完全明确，但已有研究表明遗传因素在其发病中具有重要作用［2］。近年来越来越多的研究表明SLE的发病与HLA-Ⅱ类基因，特别是HLA-DQ的基因多态性相关［3］。我们采用了聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性（PCR-RFLP）技术，并结合中医辨证分型，研究了阴虚体质SLE患者中HLA-DQA1基因多态性，旨在从中西医结合的角度进一步探讨HLA-DQ的基因在SLE发病中的作用。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 入选的56例SLE患者均为本院2004年8月～2006年8月期间的住院或门诊患者，诊断全部符合ACR1997年修定的SLE分类标准。中医辨证分型参照《中药新药临床研究指导原则》及中医风湿病专著、文献中关于SLE辨证分型标准，中医认为SLE发病总属于本虚标实之证，多因先天禀赋不足、真阴亏损的基础上，复因六淫侵袭、七情内伤、劳倦失调等因素，导致阴阳失调，伤及皮肤、关节、经络、脏腑而发病。本虚为肝肾阴虚为主，包括心阴亏虚、气阴两虚、肝肾阴虚证；标实表现为火热亢盛、气郁血瘀等证。56例患者均辨证为阴虚型，其中女48例，男8例，平均年龄（27.29±13.42）岁。50例健康人均为本院职工或正常体检者，其中女44例，男6例，平均年龄（26.31±12.26）岁。两组年龄、性别构成差异均无统计学意义。采集以上研究对象的外周静脉血液标本，采用酚氯仿法抽提DNA，置于-20℃冰箱中保存待测。

    1.2 研究方法 HLA-DQA1的PCR引物序列为： 正相引物：5’-GTGCTGCAGGTGTAAACTTGTACCAGG-3’,反相引物：5’-CACGGGATCCGGTAGCAGCGGTAGAGTTG-3’。PCR试剂盒购自美国PE公司，PCR扩增条件为：95℃ 1min、57℃ 1min、72℃ 2min,共计30个循环。HLA-DQA1的分型用以下6种酶：Mn1Ⅰ、MoAⅡ、Apa1Ⅰ、HphⅠ、AsajⅠ及FokⅠ，均购自日本TOYOAL公司。酶切缓冲液及其他条件完全按照试剂盒说明书进行。PCR后酶切产物的检测采用PAGE电泳方法。

    1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件包进行分析，SLE与DQA1等基因的相关性通过相对危险度（RR）及RR的显著χ2检验来确定。按照Woolf及Haldane公式计算，当RR显著性确定后，为进一步明确表示相关等位基因对疾病的作用，还要计算病因分数EF（RR>1)及预防分数PF（RR<1)。

    2 结果

    在56例阴虚体质SLE患者和50例健康人中，共可以检出8种HLA-DQA1等位基因，其基因分布频率详见表1。统计分析结果显示HLA-DQA1的纯合子基因型HLA-DQA1*0102/0102在阴虚体质SLE患者中较健康人明显增高，而HLA-DQA1*0601则显著下降。 表1 阴虚体质SLE患者和健康人HLA-DQA1等位基因分布与比较 注：*P<0.05

    3 讨论

    目前有关SLE患者中HLA-DQA1基因多态性的研究已有许多，如Reverlle JD等［4］研究显示在美国白人中SLE与HLA-DQA1*0501相关，Stephens HA及其同事的研究则显示巩固SLE与HLA-DQA1*0201相关［5］。已有研究结果提示SLE与HLA-DQA1基因多态性的相关具有民族差异性。国内潘星华等［6］报道发现上海及其附近地区HLA-DQA1基因与SLE遗传关联，SLE患者中HLA-DQA1*0102及HLA-DQA1*0401显著增加，而HLA-DQA1*0501及HLA-DQA1*0601则显著下降。但迄今为止，有关从中医辨证角度研究SLE患者中HLA-DQA1基因多态性的报道则极为少见。

    本研究用PCR-RFLP技术，对56例阴虚体质SLE患者和50例健康人的HLA-DQA1基因多态性进行了检测。结果显示 阴虚体质SLE患者中HLA-DQA1*0102显著增加，而HLA-DQA1*0601则显著下降。以上结果提示HLA-DQA1*0102或与这两个位点紧密连锁的基因可能是阴虚体质SLE患者的易感基因，而HLA-DQA1*0601或与这些位点紧密连锁的基因可能对阴虚体质SLE患者的发病具有保护作用。

    在国外研究报道中，还发现特定的HLA-DQ多态性与特定的自身抗体产生有关，如抗Sm抗体与HLA-DQw6和/或HLA-DQA1*0102密切相关［7］。鉴于本研究例数尚少，未对此进行进一步研究。

    总之，本研究从中医辨证角度对阴虚体质SLE患者中HLA-DQA1基因多态性进行了初步的研究，结果提示HLA-DQA1位点特定的等位基因或与这些位点紧密连锁的基因可能与SLE发病相关。

    【参考文献】

    1 Ballestar E,Esteller M,Richardson BC.The epigenetic face of systemic lupus erythematosus.J Immunol,2006,176(12):7143-7147.

    2 Lee YH,Nath SK.Systemic lupus erythematosus susceptibility loci defined by genome scan meta-analysis.Hum Genet,2005,118(3):434-443.

    3 Stevens AM,Tsao BP,Hahn BH,et al.Maternal HLA class Ⅱ compatibility in men with systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum,2005,52(9):2768-2773.

    4 Reverlle JD,Macleod MJ,Whihington K,et al.Specific aminc acid residues in the second hypervariable region of HLA-DQA1 and DQB1 chain genes promote the Ro/La autobodies responses.J Immunol,1991,161(11):3871.

    5 Stephens HA,McHugh NJ，Maddison PJ,et al.HLA class Ⅱ restriction of autoantibody production in patients with systemic lupus erythematosus.Immunogenetics,1991,33(4):276.

    6 潘星华，陆建荣，猪子英俊，等.中国汉人HLA-DQA1基因对系统性红斑狼疮的遗传易感性研究.中国免疫性杂志，1995，11（1）：19-22.

    7 Scofied RH.Cooperative association of T cell bata receptor and HLA-DQ alleles in the production of ati-Ro in systemic lupus erythematosus.Clin Immunol Immunolpathol,1994,72(3):335.

     *基金项目：深圳市医学重点学科建设资助项目（编号：2005C10）；深圳市科技局项目专项经费资助（编号：7H200507120961A）

    作者单位： 518040 广东深圳，深圳市第四人民医院香蜜湖风湿病分院 广东医学 院深圳风湿病研究所

　（编辑：悦 铭)